ترکیبی از qPCR از پیش مخلوط جهانی فوق العاده کم مصرف: برای تشخیص دقیق پاتوژن در کاربردهای متنوع

کلمات کلیدی:

باقیمانده کم، پیش مخلوط، چند هدف جهانی، یک لوله، qPCR، حساسیت بالا.

چکیده:

نسل سوم مخلوط qPCR با باقیمانده فوق العاده کم، از قبل مخلوط شده برای اطمینان از حساسیت بالا، از یک پروتکل سریع 30 دقیقه ای پشتیبانی می کند و در تقویت چندگانه در سناریوهای مختلف برتری دارد.

پس زمینه：

آنزیم‌های مولکولی تجاری، عمدتاً از طریق بیان نوترکیب در سویه‌های مهندسی شده (به عنوان مثال، E. coli) تولید می‌شوند، اغلب حاوی DNA ژنومی میزبان باقی‌مانده هستند. عواملی مانند محیط آماده سازی و آلودگی انسانی احتمال باقی مانده DNA را در این آنزیم ها افزایش می دهد. این ممکن است منجر به کمی سازی نادرست باقیمانده اسید نوکلئیک میزبان در محصولات کنترل کیفیت شود که خطرات ایمنی را برای تولید بیوداروها ایجاد می کند. در طی تشخیص پاتوژن، اسیدهای نوکلئیک باکتری پس زمینه آلوده می توانند بر اسیدهای نوکلئیک هدف با فراوانی کم غلبه کنند یا همزمان با آنها شناسایی شوند، که دقت آزمایش را به خطر می اندازد.

راه حل کل

برای مقابله با تداخل باکتری های پس زمینه و باقیمانده های اسید نوکلئیک میزبان در تشخیص پاتوژن، YEASEN Biotech یک فناوری منحصر به فرد کنترل پسماند فوق العاده کم ایجاد کرده است. ما UCF.ME، یک پایگاه تولید آنزیم مولکولی فوق‌العاده تمیز با رعایت استانداردهای GMP، با انطباق دقیق با سیستم مدیریت کیفیت ISO 13485 در تمام مراحل، ایجاد کردیم. این شامل کنترل دقیق بر پرسنل، ماشین آلات، مواد (معرف ها و مواد مصرفی)، فرآیندها، محیط زیست و استانداردها است. با ادغام اقدامات فنی موثر، محیط تولید تمیز، و کنترل کیفیت دقیق، ما تولید در مقیاس بزرگ UCF.ME مختلف را امکان پذیر می کنیم.^TMآنزیم های مولکولی باقیمانده بسیار کم

Hieff Unicon^TM Pure Pro U+ qPCR Mix(یک لوله）(گربه#16713ES)یک مخلوط qPCR جهانی با دقت ساخته شده است YEASEN Biotech، که دارای باقیمانده DNA میزبان کم است. این محصول بر اساس نسل جدیدی از مخلوط qPCR پیش مخلوط جهانی (Cat#16713ES) است که به طور موثر DNA ژنومی باقیمانده میزبان را کنترل می کند.E. coli)، در حالی که سطوح باقیمانده باکتری های بیماریزای رایج مانند سودوموناس آئروژینوزا و آلاینده های مشتق شده از انسان را نیز کنترل می کند. از آنجایی که این محلول از پیش مخلوط شده (Cat#16713ES) نه تنها به طور موثر سطح باقیمانده پاتوژن را کنترل می کند، بلکه به مسائل پایداری در تشخیص چندگانه و تطبیق پذیری هدف نیز می پردازد، شاخص های عملکرد کلیدی مانند حساسیت و ویژگی معرف را افزایش می دهد. این به طور قابل توجهی کارایی تشخیص را بهبود می بخشد و می تواند به طور گسترده در سناریوهای کاربردی مانند تشخیص میکروارگانیسم های بیماری زا استفاده شود.

مزایای محصول

• پس زمینه کم باقی مانده - عدم شناسایی اشریشیا کلی، سودوموناس آئروژینوزا و بقایای DNA ژنومی مشتق از انسان در 48 چاه.
• پایداری استثنایی از قبل مخلوط شده: در دمای 37 درجه سانتی گراد تا 14 روز، در دمای 4 درجه سانتی گراد تا 28 روز و پس از 50 سیکل انجماد و ذوب پایدار است.
• تطبیق پذیری معرف عالی - سازگار با انواع مجموعه های پرایمر پرایمر چندگانه (تایید شده برای بیش از 40 نوع هدف مختلف)، با عملکرد تقویت عالی.
• حساسیت و ویژگی بالا - حساسیت قادر به تشخیص 250 کپی در میلی لیتر است، با ویژگی که از عدم پیک در 48 چاه منفی اطمینان می دهد.
• از پروتکل های سریع پشتیبانی می کند - سازگار با پروتکل های سریع، نتایج را می توان تنها در 30 دقیقه به دست آورد.
• سیستم ضد آلودگی dUTP/UDG - دارای یک سیستم ضد آلودگی dUTP/UDG برای جلوگیری موثر از آلودگی آئروسل.
• سازگاری با چندین پلتفرم و سیستم – سازگار با پلتفرم هایی مانند Bio-Rad CFX96، ABI Q5، 7500، Slan، Tianlong و غیره.

نکات برجسته عملکرد

1، باقی مانده باکتری پس زمینه بسیار کم

بر اساس ارزیابی سطوح باقیمانده باکتری پس زمینه معرف، استفاده از YEASEN's فوق کم باقی مانده جهانی pدوباره مخلوط شد مخلوط qPCR (Cat#16713ES) و معرف‌های معمولی (بدون کنترل باقی مانده)) برای NTC (بدون کنترل الگو) تقویت در اشریشیا کلی (E. coli) سیستم، با 16713ES نیز در حال تقویت NTC در هر دو سودوموناس آئروژینوزا و سیستم های DNA ژنومی مشتق شده از انسان است. نتایج نشان می دهد که Cat#16713ES هیچ تقویتی را نشان نمی دهد در 48 حلقه چاه NTC، نشان دهنده باقی مانده DNA پس زمینه ناچیز (E. coli، P. aeruginosa و DNA انسان) در معرف است.

2، پایداری فوق العاده پیش مخلوط کاملاً مخلوط شده

بر اساس بررسی پایداری از قبل مخلوط شده معرف Cat#16713ES به سه روش (4 درجه سانتیگراد، 37 درجه سانتیگراد و انجماد-ذوب) تیمار شد. گروه‌های آزمایشی به‌ترتیب در دمای 4 درجه سانتی‌گراد و 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 7 روز تحت درمان قرار گرفتند و تحت 50 سیکل انجماد و ذوب قرار گرفتند. پایداری در برابر گروه کنترل (ذخیره شده در دمای 20- درجه سانتیگراد) تحت چهار سیستم تقویت چندگانه (گروه های 1، 2 و 4 سیستم های تقویت 4 پلکس هستند و گروه 3 یک سیستم تقویت 3 پلکس هستند)، با برخی از گروه های تقویت علاوه بر این، برای پایداری پس از 14 روز شتاب در دمای 37 درجه سانتیگراد ارزیابی شد. نتایج نشان داد که انحراف مقدار Ct (مقدار ΔCt) بین معرف های آزمایشی و کنترل در محدوده 0.5± بود و انحراف مقدار فلورسانس در 15%، نشان می دهد که YEASENمعرف از پیش مخلوط شده دارای پایداری عالی است تقویت چندگانه.

3، تطبیق پذیری معرف عالی

بر اساس بررسی سناریوهای کاربردی همه کاره معرف، YEASEN (Cat#16713ES) در کنار چندین معرف معمولی برای تایید عملکرد تقویت تحت سناریوهای هدف مختلف استفاده شد. نتایج نشان داد که محصول عملکرد تقویت خوبی را در بین اهداف مختلف از جمله پاتوژن‌ها، منابع انسانی و گیاهان از خود نشان می‌دهد که نشان‌دهنده سطح بالایی از تطبیق پذیری معرف

4، حساسیت تقویت فوق العاده

بر اساس ارزیابی حساسیت معرف، ارزیابی بر روی نرخ تشخیص Cat#16713ES در یک سیستم تقویت چندگانه (4-plex) با استفاده از نمونه‌ها در غلظت‌های بسیار کم (250 کپی در میلی‌لیتر) انجام شد. نتایج حاکی از آن است YEASENCat#16713ES بسیار عالی است حساسیت تقویت، با محدودیت تشخیص حداقل 250 کپی در میلی لیتر.

5- سازگاری با چندین پروتکل سریع

بر اساس بررسی عملکرد تقویت پروتکل سریع معرف، هفت نمونه گرادیان (1~10^6 کپی/μL) با استفاده از هر دو پروتکل معمولی (1 ساعت و 6 دقیقه) و سریع (30 دقیقه) بر روی همان ابزار کمی PCR (ABI Q5) اعتبارسنجی شدند. نتایج نشان داد که راندمان تقویت پروتکل سریع باقی مانده است بالای 99%و انحراف مقدار Ct (مقدار ΔCt) بین پروتکل های معمولی و سریع بود. در ± 0.5، با انحراف مقدار فلورسانس در ± 10٪، و منحنی های تقویت شکل S را نمایش می دهد.

به اشتراک گذاری معرف تشخیص IVD

به عنوان تامین کننده ابزارهای علوم زیستی، YEASEN Biotech برای مدت طولانی مواد اولیه با کیفیت و مقرون به صرفه را در اختیار شرکت های IVD قرار داده است. علاوه بر جهانی کاملا از قبل مخلوط شده میکس های اصلی qPCR/RT-qPCR، ما انواع دیگری از معرف های تشخیص qPCR/RT-qPCR را ارائه می دهیم که به شما کمک می کند. IVD مشتریان سازمانی به طور مشترک به تشخیص کارآمد پاتوژن های انسانی و بیماری های حیوانی می پردازند.

نوع محصول	عملکرد محصول	نام محصول	شماره مورد
مخلوط qPCR	نسل سوم کاملاً جدید جهانی کاملاً مخلوط شده با حساسیت بالا از تست سریع پشتیبانی می کند	Hieff UniconTM Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix(یک لوله)	16710ES
	جهانی با حساسیت بالا (5× غلظت)	Hieff UniconTM Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG پلاس)	13891 ES
	نسل دوم سریع کاملاً از پیش مخلوط شده است	Hieff UniconTM Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix(UDG پلاس)	11827ES
	باقیمانده فوق العاده کم بدون میزبان	Hieff UniconTM Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix(UDG پلاس)	11853ES
	قابل لیوفیلیزاسیون جهانی با حساسیت بالا	Hieff UniconTM Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG پلاس)	11893ES
مخلوط RT-qPCR	سریع جهانی با حساسیت بالا	کیت پروب HifairTM C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR(UDG Plus)	16630ES
	یونیورسال کاملاً از قبل مخلوط شده	HifairTM کیت پروب یک مرحله ای RT-qPCR V Multiplex(UDG Plus)	11899ES
	لیوفیلیزه شدن سریع جهانی	کیت HifairTM Lyo Multiplex One Step RT-qPCR	11831ES