Wnt3a انسانی بیان شده در سلولهای HEK293 فعالیت بالایی را برای ترویج کشت ارگانوئیدها نشان می دهد

ارگانوئیدها مدل‌های سه‌بعدی در شرایط آزمایشگاهی هستند که شباهت زیادی به بافت‌ها یا اندام‌های طبیعی دارند و در حوزه مدل‌سازی بیماری، جوان‌سازی اندام‌ها و مراقبت‌های پزشکی فردی اهمیت زیادی دارند. کشت این ارگانوئیدها نیاز به مدیریت دقیق مجموعه‌ای از سیتوکین‌ها دارد که Wnt3a به‌عنوان یک عامل پرکاربرد برجسته است که نقشی محوری در پرورش ارگانوئیدهای مشتق‌شده از طیف وسیعی از بافت‌ها دارد.

Wnt-3a چیست؟

Wnt-3a متعلق به خانواده Wnt است، گروهی از پروتئین های ترشح شده شامل 19 نوع انسانی، از جمله Wnt1، Wnt2، Wnt2b (Wnt13)، Wnt3، Wnt3a، Wnt4، Wnt5a، Wnt5b، Wnt6، Wnt7b، Wnt7a، Wnt9، Wnt. (همچنین به عنوان Wnt14 شناخته می شود)، Wnt9b (Wnt14b)، Wnt10a، Wnt10b، Wnt11 و Wnt16. این خانواده با حفظ و ترکیب غنی از سیستئین مشخص می شود. پروتئین های Wnt مسیر سیگنال دهی Wnt را با اتصال به گیرنده های غشای سلولی یا گیرنده های غشای سلولی مجاور تسهیل می کنند. این مسیر را می توان به مسیر متعارف، با واسطه β-catenin، که شامل Wnt1، Wnt2، Wnt2b، Wnt3، Wnt3a، Wnt7a، Wnt8، Wnt8b، و Wnt10a، و مسیر غیر متعارف، مستقل از β-compassesnt، Wnt1,Wnt2,Wnt2b,Wnt10, طبقه بندی کرد. و Wnt11. Wnt3a، به عنوان عضو اصلی خانواده Wnt، در همه جا توزیع شده و نقشی محوری در اداره عملکردهای سلولی مختلف، مانند خود نوسازی، تکثیر، تمایز، و تحرک دارد.

مکانیسم انتقال مسیر سیگنالینگ Wnt-3a

مسیر سیگنالینگ Wnt یک شبکه چند وجهی از تعاملات پروتئینی است که عمدتاً با رشد جنینی و سرطان مرتبط است. با این حال، در فرآیندهای فیزیولوژیکی طبیعی در موجودات بالغ نیز نقش دارد. Wnt3a به گیرنده خود، پروتئین Frizzled (Fz) همراه با پروتئین مرتبط با گیرنده لیپوپروتئینی گیرنده (LRP5/6) متصل می شود و متعاقباً پروتئین داربست Disheveled (Dvl) را فعال می کند. این فعال سازی منجر به جداسازی "کمپلکس تخریب" می شود که شامل کازئین کیناز 1 (CK1)، گلیکوژن سنتاز کیناز-3β (GSK-3β) و پروتئین های داربستی پولیپوز کولی آدنوماتوز (APC)، Axin1 و Axin2 است. انحلال این کمپلکس باعث تثبیت پروتئین β-کاتنین آزاد در سیتوپلاسم می شود. سپس بتا-کاتنین انباشته شده در سیتوپلاسم به هسته منتقل می شود، جایی که به فاکتورهای رونویسی خانواده TCF/LEF متصل می شود و در نهایت ژن های هدف پایین دستی مانند c-myc و Cyclin D1 را فعال می کند. این آبشار پاسخ های سلولی بعدی را القا می کند. به طور خلاصه، مسیر سیگنال دهی Wnt را می توان به صورت زیر ساده کرد: Wnt3a→FZD→DVL→ انحلال پیچیده → β-کاتنین وارد هسته → TCF/LEF→ رونویسی ژن پایین دستی می شود. بدون Wnt3a، β-کاتنین به طور معمول در سیتوپلاسم توسط "کمپلکس تخریب" تجزیه می شود، که آن را برای ubiquitination و تخریب بعدی در پروتئازوم هدف قرار می دهد. در نتیجه، نمی تواند وارد هسته شود تا رونویسی ژن های پایین دست را آغاز کند. مسیر سیگنال دهی Wnt/β-catenin در طول تکامل بسیار حفظ شده است و نقش اساسی در رشد جنینی، رشد سلولی، تمایز، تشکیل قطبیت، رشد عصبی و سرطان زایی دارد.

Wnt3a و ارگانوئیدها

Wnt3a به عنوان یکی از متداول‌ترین فاکتورهای کشت برای تولید ارگانوئید جایگاه مرکزی دارد. فعالیت بالای آن، سازگاری بین دسته‌ها، عدم آلودگی و آماده‌سازی بدون سرم عوامل کلیدی در موفقیت آزمایش‌های ارگانوئیدی هستند.Wnt3a در کشت های ارگانوئیدی از بافت های مختلف، از جمله روده، معده، پانکراس، کبد، تیروئید، مری و سیستم عصبی استفاده گسترده ای یافته است. در تلاش برای کمک به محققان علمی و شرکت‌های داروسازی در مطالعات خود در مورد کاربرد بالینی Wnt3a در تشکیل ارگانوئید و تحقیقات تومور، YEASEN یک محصول پروتئین Wnt3a بسیار فعال (کاتالوگ: 92276ES) را معرفی کرده است که برای تسهیل کشت ارگانوئید طراحی شده است.

شکل 3. با توانایی آن در القای فعالیت گزارشگر Topflash در سلول های کلیه جنینی انسان HEK293T اندازه گیری شد. ED50 برای این اثر 25 نانوگرم در میلی لیتر است.

اعتبار سنجی کشت ارگانوئیدی

Yeasen سیتوکین ها روی ارگانوئیدهای تومور انسانی مانند سرطان ریه، سرطان دهانه رحم، سرطان تخمدان، سرطان پانکراس و سرطان روده و ارگانوئیدهای طبیعی مانند ارگانوئیدهای روده کوچک انسان و موش تأیید شده اند.

سیتوکین های مرتبط اطلاعات