شرح پس زمینه
خالص سازی پروتئین فرآیند جداسازی پروتئین هدف از کل پروتئین های نمونه آزمایشی است در حالی که همچنان فعالیت بیولوژیکی و یکپارچگی شیمیایی پروتئین هدف حفظ می شود. در هنگام ساخت بردارها، علاوه بر برخی عناصر بیان ضروری، بهینه سازی کدون و انتخاب تگ ها نیز ضروری است. انتخاب برچسب مناسب نه تنها برای خالص سازی پروتئین و ارتقای حلالیت پروتئین مفید است، بلکه نباید بر ساختار و عملکرد پروتئین و کاربردهای پایین دست تأثیر بگذارد. این بخش بر روی معرفی تگ های His و GST تمرکز دارد.
جدول 1. معرفی تگ او و GST
| برچسب بزنید | اندازه کیلو دالتون | دنباله | خلوص | حلالیت | حذف برچسب | برچسب آنزیم برش |
| او | ~ 0.84 | HHHHH | + | + | مورد نیاز نیست | پروتئاز TEV
|
| GST | 26 | مرکب از 211 اسیدهای آمینه | ++ | ++ | مورد نیاز | پروتئاز 3C/PSP |
او تگ پروتئین میل خالص سازی
رزین آگاروز HisSep Ni-NTA بر پایه ژل آگارز بسیار متقاطع به عنوان ماتریکس است که از نظر شیمیایی با اسید نیتریلوتری استیک تترا هماهنگ (NTA) به عنوان لیگاند و پس از کیل کردن یون های نیکل (Ni) جفت شده است.2+، یک ساختار هشت وجهی بسیار پایدار با یون های نیکل در مرکز هشت وجهی تشکیل می دهد. این ساختار می تواند از یون های نیکل در برابر حملات مولکول های کوچک محافظت کند. در مقایسه با رزین Ni-IDA، پایدارتر است و می‌تواند غلظت‌های خاصی از عوامل کاهنده، عوامل دناتوره‌کننده یا عوامل جفت‌کننده را در شرایط سخت تحمل کند. در مقایسه با رزین Ni-TED، ظرفیت جذب بیشتری برای پروتئین های هدف دارد. این رزین به یکی از رزین های ضروری برای خالص سازی پروتئین های دارای برچسب His در آزمایشگاه ها تبدیل شده است.
شکل 1. نمودار اصل محصول رزین هیس.
جدول 2. Yeasen راهنمای انتخاب محصول تصفیه او
| شماره محصول | 20502ES | 20503ES | 20504ES/20505ES | 20561ES |
| نام محصول | رزین آگاروز HisSep Ni-NTA | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF | ستون کروماتوگرافی HisSep Ni-NTA 6FF، 5 میلی لیتر / 1 میلی لیتر | HisSep Ni-NTA MagBeads |
| ماتریس | ژل آگارز 6% متقاطع | ژل آگارز 6% دارای پیوند متقابل بالا | ژل آگارز 6% دارای پیوند متقابل بالا | میکروکره های مغناطیسی آگارز |
| مقاومت در برابر فشار | 0.1 MPa، 1 نوار | 0.3 MPa، 3 نوار | 0.3 MPa، 3 نوار | N/A |
| ظرفیت | ＞ 40 میلی گرم 6× ماتریکس پروتئین/میلی لیتر با برچسب هیس | ＞ 40 میلی گرم 6× ماتریکس پروتئین/میلی لیتر با برچسب هیس | > 40 میلی گرم 6×پروتئین/میلی لیتر مهره های مغناطیسی با برچسب او | |
| پیشنهاد پاکسازی | ماتریس با مقاومت فشار متوسط، مناسب برای روش انکوباسیون، تصفیه در مقیاس کوچک ستون گرانشی | ماتریس با مقاومت فشار بالا، می تواند برای تصفیه پروتئین در مقیاس بزرگ صنعتی با دستگاه تصفیه پروتئین استفاده شود | تصفیه سریع و راحت پروتئین از طریق جداسازی مغناطیسی | |
| تحمل | 8 مولار اوره، 6 مولار اسید کلریدریک، 0.5-1 میلی مولار DTT، 1 میلی مولار EDTA و غیره. | |||
| برنامه | خالص‌سازی پروتئین با برچسب او اولین انتخاب، بار بالا، تحمل متوسط است، به‌ویژه برای سیستم خالص‌سازی بیان پروکاریوتی مناسب است. | |||
ضمیمه: ویژگی های محصول HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES)
- در مقایسه با ستون‌ها و رزین‌های از پیش بسته‌بندی شده سنتی، نیازی به سانتریفیوژ چندگانه نمونه‌ها و کنترل سرعت جریان نمونه وجود ندارد و زمان تصفیه را تا حد زیادی کاهش می‌دهد.
- خالص سازی یک مرحله ای می تواند به خلوص بیش از 95 درصد پروتئین هدف دست یابد.
- بازده پروتئین هدف بالا: عملکرد می تواند به 70-80٪ برسد.
- تا 5 بار قابل استفاده مجدد
- تنظیم غلظت و حجم پروتئین مورد نظر آسان است.
- از دست دادن اندک پروتئین و بدون خطر دناتوره شدن یا رسوب پروتئین.
رسانه های تصفیه میل پروتئینی برچسب GST
کروماتوگرافی میل ترکیبی پروتئین برچسب GST از میل ترکیبی کووالانسی بین پروتئین فیوژن GST و گلوتاتیون ثابت (GSH) از طریق پیوندهای گوگردی استفاده می کند و بر اساس اصل شستشوی تبادل GSH خالص می شود. در این تصفیه، یک گلوتاتیون با بازوی ژل از طریق یک پیوند گوگردی ترکیب می‌شود و سپس از نیروی عمل ویژه بین گلوتاتیون و گلوتاتیون S-ترانسفراز (یعنی برچسب GST) برای ترکیب پروتئین فیوژن برچسب‌دار GST با گلوتاتیون بازوی روی ژل استفاده می‌شود و در نتیجه پروتئین از برچسب دیگر جدا می‌شود. گلوتاتیون معمولاً دارای فرم اکسید شده GSSG و فرم احیا شده GSH است. هنگامی که ما از شستشوی GSH استفاده می کنیم، GSH با گلوتاتیون ژل برای ترکیب با پروتئین فیوژن رقابت می کند و در نتیجه پروتئین هدف را شستشو می دهد.
رزین گلوتاتیون آگارز GSTSep یک رزین خالص‌سازی پروتئین برچسب GST است که از نظر ساختاری با ترکیب شیمیایی کووالانسی گلوتاتیون احیا شده با ژل آگارز 6 درصد به عنوان ماتریکس از طریق یک بازوی 12 اتمی ساخته می‌شود. این طراحی راندمان خالص سازی رزین را بسیار بهبود بخشیده است و آن را قادر می سازد تا بیش از 20 میلی گرم پروتئین فیوژن GST را در هر میلی لیتر محیط حمل کند. این محصول دارای ویژگی و عملکرد هزینه خوبی است و می تواند برای خالص سازی مختلف گلوتاتیون اس ترانسفراز، پروتئین های وابسته به گلوتاتیون و مشتقات نوترکیب گلوتاتیون در یک مرحله استفاده شود.
جدول 3. Yeasen راهنمای انتخاب محصول تصفیه GST
| شماره محصول | 20507ES | 20508ES | 20509ES/20510ES | 20562ES |
| نام محصول | رزین گلوتاتیون آگارز GSTSep | GSTSep گلوتاتیون آگارز رزین 4FF | ستون کروماتوگرافی GSTSep گلوتاتیون 4FF، 1 میلی لیتر / 5 میلی لیتر | GSTSep گلوتاتیون MagBeads |
| ماتریس | ژل آگارز 6% متقاطع | ژل آگارز 4% دارای پیوند متقابل بالا | ژل آگارز 4% دارای پیوند متقابل بالا | میکروکره های مغناطیسی آگارز |
| مقاومت در برابر فشار | 0.1 MPa، 1 نوار | 0.3 MPa، 3 نوار | 0.3 MPa، 3 نوار | N/A |
| ظرفیت | ماتریکس بیش از 20 میلی گرم پروتئین GST (40 کیلو دالتون) در میلی لیتر | ماتریکس > 10 میلی گرم پروتئین GST (40 کیلو دالتون) در میلی لیتر | 5-10 میلی گرم پروتئین فیوژن برچسب GST / میلی لیتر دانه های مغناطیسی | |
| برنامه | بار بالا، ماتریس با مقاومت فشار متوسط، مناسب برای روش جوجه کشی، تصفیه در مقیاس کوچک ستون گرانشی، برای مشتریان در مقیاس آزمایشگاهی توصیه می شود | کاربرد بار کم، مقاومت در برابر فشار ماتریس بالا، می تواند برای تصفیه پروتئین در مقیاس بزرگ صنعتی با ابزار تصفیه پروتئین استفاده شود، مقیاس آسان تر | کمترین بار، تصفیه سریع و راحت پروتئین از طریق جداسازی مغناطیسی | |
ضمیمه: ویژگی های محصول GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES)
- خالص سازی مستقیم پروتئین های هدف با خلوص بالا از نمونه های بیولوژیکی از طریق جداسازی مغناطیسی در یک مرحله، تا حد زیادی فرآیند خالص سازی را ساده می کند و کارایی تصفیه را بهبود می بخشد، مناسب برای تصفیه راحت پروتئین فیوژن GST در زمینه های تحقیقات علمی و صنعتی.
- با استفاده از این مهره مغناطیسی برای آزمایش‌های GST Pull-down، از آنجایی که جداسازی مغناطیسی نیازی به سانتریفیوژ چندگانه و زمان‌های انکوباسیون طولانی ندارد، این عملیات در مقایسه با روش‌های کروماتوگرافی سنتی ساده‌تر، سریع‌تر و خودکارتر است.
اطلاعات محصول
| موقعیت یابی محصول | نام محصول | شماره محصول | مشخصات |
| پاکسازی پروتئین او | HisSep Ni-NTA Agarose رزین | 20502ES10/50/60 | 10 میلی لیتر/50 میلی لیتر / 100 میلی لیتر |
| HisSep Ni-NTA Agarose رزین 6FF | 20503ES10/50/60 | 10 میلی لیتر/50 میلی لیتر / 100 میلی لیتر | |
| ستون کروماتوگرافی HisSep Ni-NTA 6FF، 5 میلی لیتر | 20504ES08/25 | 5 میلی لیتر / 5x5 میلی لیتر | |
| ستون کروماتوگرافی HisSep Ni-NTA 6FF، 1 میلی لیتر | 20505ES03/08 | 1 میلی لیتر / 5x1 میلی لیتر | |
| HisSep Ni-NTA MagBeads | 20561ES08/25 | 5 میلی لیتر / 25 میلی لیتر | |
| تصفیه پروتئین برچسب GST | رزین گلوتاتیون آگارز GSTSep | 20507ES10/50/60 | 10 میلی لیتر/50 میلی لیتر / 100 میلی لیتر |
| GSTSep گلوتاتیون آگارز رزین 4FF | 20508ES10/50/60 | 10 میلی لیتر/50 میلی لیتر / 100 میلی لیتر | |
| ستون کروماتوگرافی GSTSep گلوتاتیون 4FF، 1 میلی لیتر | 20509ES03/08 | 1 میلی لیتر / 5x1 میلی لیتر | |
| ستون کروماتوگرافی GSTSep گلوتاتیون 4FF، 5 میلی لیتر | 20510ES08/25 | 5 میلی لیتر / 5x5 میلی لیتر | |
| GSTSep MagBeads گلوتاتیون | 20561ES08/25 | 5 میلی لیتر / 25 میلی لیتر |