شرح
هیف کناسTM اوراسیل + DNA پلیمراز با وفاداری بالا، نسل جدیدی از DNA با وفاداری بالا پلیمراز بر اساس Pfu DNA Polymerase. Hieff CanaceTM Uracil+ DNA Polymerase با وفاداری بالا، واکنش های سریع و دقیق PCR را برای قالب های پیچیده امکان پذیر می کند. وفاداری آن به طور قابل توجهی بهبود یافته است و به طور کامل از شکست تقویت ناشی از استفاده از پرایمرها/الگوها/dNTP های حاوی dUTP جلوگیری می کند. این محصول مجهز به یک بافر آنزیمی بهینه شده و افزودن اجزای تقویت کننده PCR است که آنزیم را بسیار کارآمد و سازگار با طیف گسترده ای از قالب ها، مناسب برای تقویت قالب های پیچیده می کند.
اجزای محصول
| شماره جزء | اجزاء | گربه#/اندازه | |
| 10145ES60 | 10145ES76 | ||
| 10145-A | هیف کناس™ اوراسیل + DNA پلیمراز با وفاداری بالا (1 U/μL) | 100 میکرولیتر | 500 میکرولیتر |
| 10145-B | 2× Canace™ بافر Uracil+ PCR (حاوی Mg2+، dNTPs) | 1 میلی لیتر × 3 | 1 میلی لیتر × 15 |
حمل و نقل و ذخیره سازی
قطعات با کیسه های یخ ارسال می شوند و می توانند در دمای -20 درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری شوند.
برنامه کاربردی محصول
تقویت کتابخانه با وفاداری بالا با استفاده از پرایمرها/الگوها/dNTP های حاوی dUTP.
هشدارها
1. برای ایمنی و سلامتی خود، لطفاً از کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف برای عملیات استفاده کنید.
2. فقط برای استفاده تحقیقاتی!
دستورالعمل ها
هیف کناسTM Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase به روشی کمی متفاوت از آنزیم های معمولی با کیفیت بالا استفاده می شود. لطفا قبل از استفاده دستورالعمل ها را به دقت بخوانید.
1. سیستم واکنش توصیه شده
تمام عملیات باید روی یخ انجام شود. 2× CanaceTM بافر Uracil+ PCR باید پس از ذوب به خوبی مخلوط شود. قبل از پیکربندی سیستم، لطفاً دستگاه PCR را از قبل گرم کنید. پس از افزودن اجزاء، نمونه را با یک پیپت به خوبی مخلوط کرده و تا انتهای لوله بچرخانید، سپس آن را در دستگاه PCR از قبل گرم شده برای تقویت قرار دهید. پس از استفاده، تمام قطعات را برای نگهداری به -20 درجه سانتیگراد برگردانید.
جدول 1. واکنش تقویت PCR
| اجزاء | حجم |
| محصول قالب یا بستن | X µL |
| 2×CanaceTM Uracil+ PCR بافر (حاوی Mg2+، dNTPs) | 25 میکرولیتر |
| پرایمر جلو (10-25 میکرومولار) | 1-2.5 میکرولیتر |
| پرایمر معکوس (10-25 میکرومولار) | 1-2.5 میکرولیتر |
| Hieff CanaceTM Uracil + DNA پلیمراز با وفاداری بالا (1 U/µL) | 1 میکرولیتر |
| ddH2O | مجموع تا 50 میکرولیتر |
[یادداشت ها]:
1) معرف ها: قبل از استفاده، هر جزء را به اندازه کافی ذوب کنید.
2) الگوها: استفاده از الگوهای DNA خالص شده با کیفیت بالا می تواند به طور قابل توجهی کارایی و میزان موفقیت تقویت را بهبود بخشد.
3) dNTPs: غلظت نهایی dNTPs توصیه شده 200 میکرومولار است. dNTP های ارائه شده در کیت حاوی dUTP نیستند. اگر شرایط خاص نیاز به تهیه الگوهای حاوی dUTP داشته باشد، می توان dUTP اضافی را به غلظت نهایی 400 میکرومولار اضافه کرد.
4) غلظت پلیمراز: 1 U/50 میکرولیتر توصیه می شود. می توان آن را بین 0.5-2 U/50 μL بهینه کرد، از 2 U/50 μL تجاوز نکنید. به منظور جلوگیری از تجزیه پرایمرهای پلیمراز به دلیل فعالیت اگزونوکلئیدی 3 '→5'، پیشنهاد می شود در مرحله آخر پلیمراز را به سیستم واکنش اضافه کنید.
5) غلظت نهایی Mg2+: غلظت نهایی سیستم 2 میلی مولار است. لطفاً از شرکت ما بخواهید در صورت نیاز خاص، بافری با غلظت Mg2+ کم یا بدون Mg2+ ارائه دهد.
2. روش واکنش توصیه شده
جدول 2. روش واکنش تقویت PCR
| مرحله | دما | مدت زمان | تعداد چرخه ها |
| دناتوراسیون اولیه | 98 درجه سانتی گراد | 1 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 98 درجه سانتی گراد | 10 ثانیه | 1 تا 15 |
| آنیل کردن | 60 درجه سانتی گراد | 30 ثانیه | |
| پسوند | 72 درجه سانتی گراد | 30 ثانیه | |
| پسوند نهایی | 72 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| نگه دارید | 4 درجه سانتی گراد | - | - |
[یادداشت]:
1) درجه حرارت و زمان دناتوراسیون اولیه: 98 ℃ توصیه می شود. زمان توصیه شده برای الگوهای ساده مانند DNA پلاسمید 30 ثانیه، برای کتابخانه ها 1 دقیقه، برای الگوهای پیچیده مانند cDNA و DNA ژنومی 3 دقیقه و برای الگوهای با محتوای GC بالا 5-10 دقیقه است.
2) دما و زمان بازپخت: 60 درجه سانتیگراد توصیه می شود یا می توان گرادیان دما را تنظیم کرد تا دمای بهینه برای بازپخت پرایمر با توجه به نیازها پیدا شود. زمان بازپخت توصیه شده 20 ثانیه است و می توان آن را در 10-30 ثانیه تنظیم کرد. زمان بازپخت بیش از حد طولانی ممکن است منجر به پراکندگی محصولات تقویت شده روی ژل شود.
3) دما و زمان گسترش: 72 ℃ توصیه می شود. زمان تمدید با توجه به نیازهای واقعی تنظیم می شود.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.