شرح
این کیت می‌تواند مستقیماً و به سرعت تکثیر PCR بافت موش (مانند دم، گوش موش، انگشت پا، ماهیچه و غیره) را انجام دهد و دارای سازگاری با نمونه قوی است. این کیت مجهز به بافر قدرتمند لیز می‌تواند نمونه‌ها را به سرعت لیز کرده و DNA ژنومی را آزاد کند. لیزات را می توان مستقیماً بدون خالص سازی به سیستم واکنش PCR اضافه کرد و عملیات راحت است. علاوه بر این، این کیت به ورودی نمونه کم نیاز دارد و می توان از 5 میلی گرم بافت موش یا دم موش 1-5 میلی متری برای آزمایش استفاده کرد.
مخلوط 2× Mouse Direct PCR ارائه شده توسط این کیت یک محلول واکنش PCR با شروع داغ با غلظت 2 برابر است. این شامل تمام اجزای مورد استفاده برای تقویت PCR به جز قالب و پرایمرها است که روند عملیات را بسیار ساده کرده و احتمال آلودگی را کاهش می دهد. این کیت می تواند برای شناسایی تراریخته، ژنوتیپ موش و غیره استفاده شود.
ویژگی ها
- نمونه کمتر مورد نیاز: 5 میلی گرم بافت موش یا 1-5 میلی متر دم موش
- آماده سازی قالب مناسب: بدون نیاز به آسیاب کردن، بدون نیاز به پالایش و خالص سازی DNA، شار بالاتر، صرفه جویی در زمان و هزینه
- سیستم PCR بهینه: با ویژگی بالاتر و تحمل قوی تر بازدارنده واکنش PCR
برنامه های کاربردی
- شناسایی موش های تراریخته
- ژنوتیپ کردن موش ها
- تجزیه و تحلیل حذف ژن موش
مشخصات
| مشخصات محصول | کیت |
| شروع داغ | Hot Start داخلی |
| شرایط حمل و نقل | بسته های یخ |
| نوع محصول | کیت مستقیم PCR |
| درخواست کنید به (برنامه) | دم موش، گوش موش، انگشت موش، احشاء، پوست و غیره. |
اجزاء
| اجزای شماره | نام | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | بافر ML | 5×1 میلی لیتر | 20×1 میلی لیتر |
| 10185-B | بافر MT | 0.6 میلی لیتر | 2×1.25 میلی لیتر |
| 10185-C | 2× ماوس مستقیم PCR Mix | 500 μL | 2×1 میلی لیتر |
- الف) بافر ML یک بافر لیز حاوی مواد دناتوره کننده پروتئین قوی است، لطفاً دستکش بپوشید.
- ب) بافر MT یک بافر توقف است که برای متوقف کردن عملکرد لیز بافر ML استفاده می شود.
- ج) مخلوط 2× Mouse Direct PCR: حاوی Taq DNA پلیمراز، مخلوط dNTP، MgCl2، بافر واکنش، تقویت کننده واکنش PCR، بهینه ساز، تثبیت کننده، رنگ نشانگر الکتروفورز و غیره است.
ذخیره سازی
- جزء A: محصول باید به مدت یک سال در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگهداری شود. برای استفاده چندگانه برای مدت طولانی، لطفا از آلودگی متقاطع خودداری کنید.
- جزء B/C: محصول باید در-25 درجه سانتیگراد ~ -15 درجه سانتیگراد به مدت یک سال لطفاً از انجماد و ذوب مکرر خودداری کنید.
ارقام
1. نتیجه تکثیر ژن هدف (در عرض 1 کیلوبایت).
شکل 1.مناسب برای تکثیر ژن هدف در 1 کیلوبایت.
2. نمایش سرعت گسترش
شکل 2. ژن 500bp، سرعت گسترش می تواند به سرعت 1sec/kb باشد.
نقل شده از "TFPI یک گیرنده کریپت کولون برای TcdB از کلاد بیش از حد ویروسی 2 C. difficile است. Cell . 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.01.
[1] لو جی، یانگ کیو، ژانگ ایکس، و همکاران. TFPI یک گیرنده کریپت کولون برای TcdB از کلاد 2C hypervirulent است. مشکل سلول 2022؛ 185 (6): 980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J، Chen J، Li YY، Xia LL، Wu YG. تیروزین کیناز بروتون التهاب ناشی از ماکروفاژها را در کلیه دیابتی از طریق فعال سازی التهابی NLRP3 تنظیم می کند. Int J Mol Med. 2021؛ 48 (3): 177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| مشکل رایج | دلیل احتمالی | راه حل |
| هیچ باندی در کنترل مثبت و نمونه های مورد آزمایش وجود نداشت. | سیستم واکنش PCR یا شرایط واکنش مناسب نبود. | از گرادیان PCR برای بررسی شرایط واکنش بهینه برای PCR استفاده کنید. |
| ذخیره سازی نامناسب معرف های PCR فعالیت خود را از دست می دهد. | 2× Mouse Direct PCR Mix باید در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شود و از انجماد و ذوب مکرر در طول استفاده خودداری شود. در صورت استفاده مکرر، می توان آن را برای مدت کوتاهی در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. | |
| مسائل طراحی پرایمر | برای بررسی، پرایمرها را دوباره طراحی کنید. | |
| کنترل مثبت دارای باند مورد علاقه است و نمونه مورد آزمایش بدون باند یا باند ضعیف است. | ذخیره سازی نامناسب یا نگهداری طولانی مدت می تواند باعث از بین رفتن فعالیت معرف شود. | از معرف های تازه استفاده کنید. |
| لیز بافت را بیش از حد اضافه کنید. | سیستم واکنش را افزایش دهید یا مقدار لیزات را کاهش دهید. | |
| مخلوط لیز نمونه به طور نامناسب یا برای مدت طولانی ذخیره شده است و ژنوم DNA تخریب شده است. | مخلوط لیزات را می توان به مدت 2-3 روز در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کرد.سعی کنید از مخلوط لیزات تازه تهیه شده برای PCR استفاده کنید. | |
| مقدار قالب اضافه شده مناسب نیست. | مقدار الگوی اضافه شده در محدوده 1-10 درصد از سیستم واکنش بهینه شد. | |
| تعداد سیکل های PCR ناکافی است. | تعداد سیکل های PCR را ترجیحاً 35-40 سیکل افزایش دهید. به دلیل پیچیدگی الگو، واکنش های PCR باید با 5-10 چرخه بیشتر نسبت به الگوی DNA خالص انجام شود. | |
| تقویت غیر اختصاصی | دمای بازپخت PCR خیلی کم، تعداد چرخه، غلظت پرایمر یا غلظت قالب خیلی زیاد است. | دمای بازپخت PCR را افزایش دهید و تعداد چرخه PCR، غلظت پرایمر یا غلظت قالب را کاهش دهید. |
| عدم تطابق پرایمر PCR | طراحی مجدد پرایمرهای PCR | |
| هنگام آماده سازی سیستم واکنش PCR، دما بسیار بالا است یا زمان بسیار طولانی پس از تکمیل آماده سازی است. | آماده سازی سیستم واکنش PCR در دمای پایین انجام می شود و واکنش تقویت PCR در اسرع وقت پس از تکمیل آماده سازی انجام می شود. | |
| باند هدف در کنترل منفی ظاهر می شود | آلودگی ابزار یا معرف های عامل. | تمام معرف ها یا تجهیزات موجود در آزمایش باید اتوکلاو شوند. برای جلوگیری از مکیده شدن توالی هدف به تفنگ نمونه یا ریختن آن به بیرون از لوله سانتریفیوژ، هنگام دست زدن مراقب و ملایم باشید. |
| آلودگی متقاطع بین نمونه ها | هر نمونه فقط برای یک نمونه استفاده می شود. یا پس از گرفتن یک نمونه، لبه سمپلر را در محلول هیپوکلریت سدیم 2 درصد فرو کنید، مکرراً بشویید و سپس باقیمانده را با دستمال کاغذی تمیز خشک کنید. |
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.