شرح
کیت مستقیم PCR بافت گیاهی کیتی است که می تواند به طور مستقیم انواع مختلف برگ های گیاه را با PCR، با سازگاری وسیع و پایداری قوی تکثیر کند. این کیت از یک سیستم بافر لیز منحصر به فرد استفاده می کند که می تواند به سرعت انواع نمونه های گیاهی را لیز کرده و DNA ژنومی را آزاد کند. DNA ژنومی آزاد شده را می توان مستقیماً به عنوان یک الگو بدون حذف پروتئین، RNA یا متابولیت های ثانویه در واکنش PCR استفاده کرد. علاوه بر این، کیت به مقدار کمی نمونه نیاز دارد، به طوری که می توان از برگ های گیاه به اندازه 1 میلی متر برای آزمایش استفاده کرد.
2×Plant Master Mix ارائه شده در این کیت دارای سازگاری قوی با تقویت است و می تواند مستقیماً از lysate نمونه به عنوان یک الگو برای تقویت کارآمد و خاص استفاده کند. این معرف یک مخلوط واکنش PCR غلیظ 2 برابری است که شامل تمام اجزای مورد استفاده برای تقویت PCR به جز قالب و پرایمرها است که فرآیند عملیات را بسیار ساده کرده و احتمال آلودگی را کاهش می دهد.
از این کیت می توان برای شناسایی گیاهان تراریخته، ژنوتیپ گیاهی و غیره استفاده کرد.
حمل و نقل
محصولات با بسته های یخ ارسال می شوند.
ذخیره سازی
1. معرف 10187-A [بافر P1] را می توان به مدت 1 سال در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری کرد.
2. معرف 10187-B [بافر P2] که برای خنثی کردن لیزات استفاده می شود، که برای نگهداری نمونه برای مدت طولانی تری مفید است و می توان آن را در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری کرد.
3. Reagent 10187-C [2× Plant Master Mix] را می توان به مدت 1 سال در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری کرد. از انجماد و ذوب مکرر خودداری کنید.
هشدارها
1. هنگام انجام آزمایشات برگ، استفاده از بافت برگ تازه جمع آوری شده توصیه می شود. اگر این یک بافت منجمد طولانی مدت است، باید در دمای 80- درجه سانتی گراد نگهداری شود. از انجماد و ذوب مکرر باید تا حد امکان اجتناب شود تا از تخریب قالب جلوگیری شود و بر کارایی PCR تأثیر بگذارد. بافت برگ برای برگ های جوان مناسب است. اگر برگ بالغ است از استفاده از بافت رگبرگ اصلی برگ خودداری کنید.
2. برای بهترین بازدهی تقویت قطعه در طول 1 کیلوبایت توصیه می شود.
3. هنگام نمونه برداری از سوراخ پانچ یا چاقو برای گرفتن نمونه با اندازه مناسب استفاده کنید. هنگامی که نمونه ها متفاوت هستند، سوراخ پانچ یا چاقو باید هر بار قبل از پردازش نمونه تمیز شود.
4. برای بافت برگ توصیه می شود برگ های 10-1 میلی متری بگیرید، طول برگ خیلی کم منجر به بازده تکثیر PCR کم می شود، مقدار زیاد آن واکنش PCR را مهار می کند، از روش ترک حرارتی، له کردن با نوک پیپت و خرد کردن با آسیاب برای درمان برگ های گیاه استفاده کنید. پس از درمان، باید تکان داده شود و سانتریفیوژ شود. حتما از مایع رویی برای آزمایش استفاده کنید. بارش به طور جدی واکنش PCR را مهار می کند.
5. برای ایمنی و سلامتی خود، لطفاً از کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف برای عملیات استفاده کنید.
6. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است!
| مشکلات رایج | علل احتمالی | راه حل ها |
| هیچ باندی در کنترل مثبت و نمونه های مورد آزمایش وجود نداشت. | سیستم واکنش PCR یا شرایط واکنش مناسب نبود. | از گرادیان PCR برای بررسی شرایط واکنش بهینه برای PCR استفاده کنید. |
| نگهداری نامناسب معرف های PCR آنها را غیرفعال می کند. | 2×PCR Mix باید در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شود، از انجماد و ذوب مکرر هنگام استفاده خودداری کنید. در صورت استفاده مکرر، می توان آن را برای مدت کوتاهی در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. | |
| مسائل طراحی پرایمر | برای بررسی، پرایمرها را دوباره طراحی کنید. | |
| کنترل مثبت دارای باند مورد علاقه است و نمونه مورد آزمایش بدون باند یا باند ضعیف است. | نسبت بافر لیز و بافر خنثی سازی نامناسب است و مخلوط لیز بر مقدار pH سیستم PCR تأثیر می گذارد. | در شرایط عادی، pH مخلوط لیز خنثی شده باید حدود 7-8 باشد (محصول لیز و بافر P2 باید کاملاً مطابق با نسبت 5:1 خنثی شوند). |
| مخلوط لیز نمونه به طور نامناسب یا برای مدت طولانی ذخیره شده است و ژنوم DNA تخریب شده است. | مخلوط لیزات را می توان در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 5 روز نگهداری کرد، سعی کنید از مخلوط لیزات تازه تهیه شده برای PCR استفاده کنید. | |
| مقدار قالب اضافه شده مناسب نیست. | مقدار الگوی اضافه شده را در محدوده <5٪ از سیستم واکنش بهینه کنید. | |
| تعداد سیکل های PCR ناکافی است. | تعداد سیکل های PCR را به طور مناسب افزایش دهید، ترجیحاً 35-40 سیکل. با توجه به پیچیدگی قالب، به طور کلی بهتر است از 5-10 چرخه بیشتر از واکنش PCR نسبت به استفاده از الگوی DNA خالص استفاده شود. | |
| تقویت غیر اختصاصی | دمای بازپخت PCR خیلی کم، تعداد چرخه، غلظت پرایمر یا غلظت قالب خیلی زیاد است. | دمای بازپخت PCR را افزایش دهید و تعداد چرخه PCR، غلظت پرایمر یا غلظت قالب را کاهش دهید. |
| عدم تطابق پرایمر PCR. | طراحی مجدد پرایمرهای PCR | |
| در هنگام تهیه سیستم واکنش PCR، دما بسیار بالا است یا زمان قرار دادن آن پس از آماده سازی بسیار طولانی است. | آماده سازی سیستم واکنش PCR در دمای پایین انجام می شود و واکنش تقویت PCR در اسرع وقت پس از تکمیل آماده سازی انجام می شود. | |
| باند هدف در کنترل منفی ظاهر می شود | آلودگی ابزار یا معرف های عامل. | تمام معرف ها یا تجهیزات موجود در آزمایش باید اتوکلاو شوند.برای جلوگیری از مکیده شدن توالی هدف به تفنگ نمونه یا ریختن آن به بیرون از لوله سانتریفیوژ، هنگام دست زدن مراقب و ملایم باشید. |
| آلودگی متقاطع بین نمونه ها | هر نمونه فقط برای یک نمونه استفاده می شود. یا پس از گرفتن یک نمونه، تیغه سمپلر را در محلول هیپوکلریت سدیم 2% غوطه ور کنید، مکرراً بشویید و سپس باقیمانده را با دستمال کاغذی تمیز خشک کنید. |
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.