شرح
کیت Hieff® Blood Advanced Direct PCR کیتی است که می‌تواند مستقیماً نمونه‌های خون کامل را بدون تصفیه DNA یا پیش‌درمان نمونه تکثیر کند و با خون تازه، خون سرد (یخ زده) و لکه‌های خون خشک تجاری حاوی ضد انعقاد‌های معمولی مانند EDTA، هپارین، موتور پلیمری با مقاومت ژنتیکی و سیترات و غیره سازگار است. به مهارکننده‌های PCR، 2× Hieff® Blood Advanced PCR بافر با فاکتور افزایش طول قوی، فاکتور تقویت تقویت، و سیستم بافر بهینه برای تکثیر موثر 8 کیلوبایت قطعات ژنومی در شرایط گسترش سریع، و تنظیم زمان افزایش 3-5 ثانیه بر کیلوبایت برای قطعات زیر 2 کیلوبایت، در نتیجه زمان نمونه‌برداری خون را به میزان قابل توجهی کوتاه می‌کند.
مشخصات
| وفاداری (در مقابل طاق) | 1× |
| شروع داغ | بله |
| برآمدگی | 3'-A |
| پلیمراز | Taq DNA Polymerase (گربه: 10726) |
اجزاء
| خیر | نام | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× هیف® بافر پیشرفته PCR خون | 500 μL | 2.5 میلی لیتر |
| 10188-B | هیف® مخلوط پیشرفته DNA پلیمراز با کیفیت بالا | 20 μL | 100 میکرولیتر |
| 10188-C | مخلوط پرایمر کنترل مثبت (هر کدام 10 میکرومولار) | 100 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| 10188-D | 10× بافر بارگذاری DNA | 1 میلی لیتر | 1 میلی لیتر |
دستورالعمل ها
سیستم های واکنش PCR توصیه شده
| اجزاء | حجم (μL) |
| ddH2O | تا 50 میکرولیتر |
| 2× هیف® بافر پیشرفته PCR خون | 25 میکرولیتر |
| پرایمر جلو (10 میکرومولار) | 2 میکرولیتر |
| پرایمر معکوس (10 میکرومولار) | 2 میکرولیتر |
| هیف® مخلوط پیشرفته DNA پلیمراز با کیفیت بالا | 1 میکرولیتر |
| نمونه خون | X |
2. غلظت نهایی 0.4 میکرومولار در هر پرایمر توصیه می شود، بیش از حد بالا منجر به تقویت غیر اختصاصی می شود.
3. غلظت مطلوب الگوی خون کامل از 0.5٪ تا 20٪ است و استفاده توصیه شده 10٪ به عنوان شرایط آزمایشی اولیه است، یعنی 5 میکرولیتر خون کامل به عنوان یک الگو به سیستم واکنش 50 میکرولیتری اضافه می شود، و مراقب باشید که از آسپیراسیون لخته های خون جلوگیری شود. برای لکه‌های خون خشک‌شده ذخیره‌شده روی کارت‌های فیلتر Whatman®، تقریباً 1 میلی‌متر مربع از کاغذهای گرد با لکه‌های خون را می‌توان گرفت و مستقیماً بدون پیش تیمار در واکنش PCR تکثیر کرد.
برنامه واکنش
| چرخه گام | دما | زمان | چرخه ها |
| دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 95 درجه سانتیگراد | 15 ثانیه | 30-35 |
| آنیل کردن | 60 درجه سانتیگراد | 15 ثانیه | |
| پسوند | 72 درجه سانتیگراد | 3-10 ثانیه در کیلوبایت | |
| نهایی پسوند | 72 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
دمای بازپخت یک مقدار Tm عمومی یا 1-2 درجه سانتیگراد کمتر از مقدار Tm آغازگر است. اگر محصول تقویتی کمتر خاص باشد، می توان یک گرادیان دمای بازپخت برای یافتن شرایط بهینه آنیل ایجاد کرد.
زمان پسوند 10 ثانیه بر کیلوبایت می تواند بیشتر قطعات هدف زیر 8 کیلو بایت را تقویت کند و 5-3 ثانیه در کیلوبایت می تواند اکثر قطعات زیر 2 کیلوبایت را تقویت کند. اگر راندمان تقویت کم باشد، زمان را می توان به طور مناسب به 20-30 ثانیه در کیلوبایت افزایش داد و نباید از 60 ثانیه در کیلوبایت تجاوز کند.
حمل و نقل و ذخیره سازی
محصولات باید در دمای -15 درجه سانتیگراد نگهداری شوند ~ -25 درجه سانتیگراد برای 1 سال
ارقام
یادداشت ها
1. توصیه می شود که از الگوی خون به عنوان 10 درصد از حجم کل واکنش استفاده شود، یعنی 5 میکرولیتر خون کامل به عنوان الگو به سیستم واکنش 50 میکرولیتری اضافه شود و مراقب باشید که از آسپیراسیون لخته های خون جلوگیری شود.
2. زمان گسترش 10 ثانیه در کیلوبایت می تواند بیشتر قطعات هدف زیر 8 کیلوبایت را تقویت کند و 5-3 ثانیه در کیلوبایت می تواند بیشتر قطعات زیر 2 کیلوبایت را تقویت کند. اگر راندمان تقویت کم باشد، زمان را می توان تا 30 ثانیه در کیلوبایت افزایش داد.
3. پس از واکنش PCR، توصیه می شود محصول واکنش را با سرعت 4000 دور در دقیقه (1000× گرم) به مدت 1-3 دقیقه سانتریفیوژ کنید تا قطعات سلول های خونی رسوب داده شود و مایع رویی برای تجزیه و تحلیل پایین دست گرفته شود.
4. این محصول را نمی توان به طور مستقیم برای تشخیص پزشکی استفاده کرد.
5. برای ایمنی و سلامتی خود، لطفا کت آزمایشگاه بپوشید و دستکش یکبار مصرف بپوشید.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.