شرح
Quick T4 DNA Ligase یک محصول تک آنزیمی است که می تواند برای بستن قطعات DNA و آداپتورها در فرآیند ساخت کتابخانه NGS استفاده شود. این محصول توسط توالی یابی با توان بالا تایید شده و دارای کیفیت عالی می باشد. برای مشتریانی که نیازی به تنظیم آزمایشی سیستم ندارند، توصیه می‌شود ماژول بستن DNA سریع Hieff NGSTM (Cat#12607) را خریداری کنند.
اجزای محصول
| شماره جزء | اجزاء | 10301ES40 | 10301ES42 |
| 10301-A | Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL) | 100 میکرولیتر | 1 میلی لیتر |
| 10301-B | بافر 10 × T4 DNA لیگاز | 250 میکرولیتر | 2×1250 میکرولیتر |
حمل و نقل و ذخیره سازی
این محصول با بسته های یخ ارسال می شود و می توان آن را در دمای -20 درجه سانتی گراد به مدت دو سال نگهداری کرد.
تعریف واحد
در یک سیستم واکنش بستن 20 میکرولیتری، وقتی 6 میکروگرم λDNA-Hind Ⅲ در دمای 16 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه واکنش نشان داد، مقدار آنزیم مورد نیاز برای بستن بیش از 50 درصد قطعات DNA به عنوان یک واحد (U) تعریف شد.
هشدارها
1. اگر مقدار کمی بارش در هنگام ذوب شدن بافر رخ داد، لطفاً قبل از استفاده معکوس کرده و خوب مخلوط کنید.
2. برای ایمنی و سلامتی خود، لطفاً از کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف برای عملیات استفاده کنید.
3. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است!
دستورالعمل ها
1. کیت های ساخت کتابخانه DNA جریان اصلی فعلی معمولاً پس از تعمیر نهایی و درمان A-Tailing خالص نمی شوند و مستقیماً بستن آداپتور را انجام می دهند. لطفاً به آماده سازی زیر برای سیستم واکنش مراجعه کنید. کاملاً گرداب کنید، مختصری بچرخانید و به مدت 15 دقیقه در دمای 20 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
| اجزاء | حجم (μL) |
| DNA دنباله دار dA | 60 |
| بافر 10 × T4 DNA لیگاز | 10 |
| 50% PEG 6000 | 10* |
| آداپتور DNA | X** |
| Quick T4 DNA Ligase | 1-5*** |
| ddH2O | تا 100 |
[توجه]: *50% PEG 6000 در کیت موجود نیست، باید خودتان آن را تهیه کنید.
**برای اطلاع از میزان آداپتورها به جدول زیر مراجعه کنید.
***مقدار Quick T4 DNA Ligase مورد استفاده را می توان 1-5 میکرولیتر در صورت نیاز اضافه کرد.
2. کیفیت و غلظت آداپتورهای مورد استفاده مستقیماً بر راندمان بستن و بازده کتابخانه تأثیر می گذارد. استفاده بیش از حد از آداپتور ممکن است دایمرهای آداپتور بیشتری تولید کند، در حالی که استفاده کمتر ممکن است بر راندمان بستن و بازده کتابخانه تأثیر بگذارد. جدول زیر مقدار توصیه شده آداپتورهای مورد استفاده در موقعیت های مختلف DNA ورودی با استفاده از این کیت را فهرست می کند.
| DNA ورودی | آداپتور: DNA ورودی (نسبت مولی) | DNA ورودی | آداپتور: DNA ورودی (نسبت مولی) |
| 1 میکروگرم | 10:1 | 50 نانوگرم | 100:1 |
| 500 نانوگرم | 20:1 | 25 نانوگرم | 200:1 |
| 250 نانوگرم | 40:1 | 1 نانوگرم | 200:1 |
| 100 نانوگرم | 100:1 | 500 صفحه | 400:1 |
[توجه]: مول DNA ورودی (pmol)≈ DNA ورودی (ng)/ [0.66 × طول میانگین DNA ورودی (bp)].
مثال محاسبه بستن آداپتور: وقتی DNA ورودی 100 نانوگرم و طول آن 300 جفت باز است، چقدر آداپتور باید اضافه شود؟
مرحله 1: تعداد مول های DNA ورودی را محاسبه کنید. فرمول: مول DNA ورودی (pmol)≈ DNA ورودی (ng)/ [0.66 × طول متوسط DNA ورودی (bp)]; مول DNA ورودی (pmol) = 100 ÷ (0.66×300) = 0.5 pmol.
مرحله 2: طبق جدول بالا تعداد مول های آداپتور اضافه شده را محاسبه کنید. وقتی DNA ورودی 100 نانوگرم باشد، نسبت مولی آداپتورها: DNA ورودی 100:1 است و تعداد مول آداپتورهای اضافه شده=100×0.5 pmol=50 pmol است.
مرحله 3: حجم اضافه آداپتور را محاسبه کنید. غلظت آداپتور = 15 میکرومول در لیتر (اگر از آداپتور شرکت دیگری استفاده می کنید، باید غلظت آن را طبق دستورالعمل آن تعیین کنید). حجم آداپتور اضافه شده = مول آداپتور اضافه شده (50 pmol) ÷ غلظت آداپتور (15 میکرومول در لیتر) = 3.34 میکرولیتر (توجه: 15 میکرومول در لیتر = 15 pmol/μL).
به طور خلاصه، حجمی که آداپتور را می توان به آن اضافه کرد 3.4 میکرولیتر است. (توجه: حداکثر حجم اضافه آداپتور از 5 میکرولیتر تجاوز نمی کند).
بافر ase.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.