شرح
Hifair™ کیت سنتز cDNA رشته اول AdvanceFast (بدون رنگ) یک کیت رونویسی معکوس سریع است که بر اساس Hifair™ توسعه یافته است. کیت سنتز cDNA رشته 1 III (بدون رنگ)، مناسب برای تقویت PCR و آزمایش‌های RT-qPCR. در مقایسه با Hifair™ کیت سنتز cDNA رشته 1 III (بدون رنگ)، دارای نرخ تشخیص پایدار، ویژگی و تضمین عملکرد است، با کل زمان رونویسی معکوس به طور بالقوه به کمتر از 6 دقیقه کاهش می‌یابد که به طور قابل توجهی مدت زمان آزمایش را کوتاه می‌کند.
این کیت شامل gDNA Digester Mix است که می‌تواند آلودگی DNA ژنومی باقیمانده در قالب RNA را از بین ببرد و نتایج بعدی مطمئن‌تر را تضمین کند. این کیت دو نوع آغازگر سنتز cDNA را ارائه می دهد: پرایمرهای تصادفی N6 و Oligo (dT)18. کاربران می توانند بین Random Primers N6، Oligo (dT) انتخاب کنند.18یا Gene Specific Primers به عنوان پرایمرهای رونویسی معکوس با توجه به نیاز آنها. محصول cDNA تک رشته ای سنتز شده را می توان مستقیماً برای واکنش های بعدی PCR یا qPCR استفاده کرد.
مشخصات
| گربه شماره | 11150ES10 / 11150ES60 |
| اندازه | 10 T/100 T |
اجزاء
| اجزای شماره | نام | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair AdvanceFast SuperMix (بدون رنگ) | 50 میکرولیتر | 500 μL |
| 11150-B | 5×gDNA هاضمه مخلوط | 20 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| 11150-C | پرایمرهای تصادفی (50 میکرومول در لیتر) | 20 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| 11150-D | الیگو d(T)18 پرایمرها (50 میکرومول در لیتر) | 20 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| 11150-E | آب بدون RNase | 200 میکرولیتر | 2×1 میلی لیتر |
ذخیره سازی
این محصول باید در دمای -25 تا 15 درجه سانتیگراد نگهداری شود 1 سال
دستورالعمل ها
- اگر آزمایش نیاز به حذف DNA ژنومی باقیمانده داشته باشد
هضم 1)gDNA
در یک لوله سانتریفیوژ بدون RNase، مخلوط زیر را آماده کرده و به آرامی پیپت کنید تا خوب مخلوط شود. به مدت 2 دقیقه در دمای 42 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
| اجزاء | حجم (μL) |
| آب بدون RNase | تا 10 میکرولیتر |
| 5× gDNA هاضم مخلوط | 2 میکرولیتر |
| کل RNA* | 10 pg-5 میکروگرم |
| یا mRNA* | 10 pg-500 ng |
* توصیه می شود که مقدار ورودی RNA توتال از 2 میکروگرم بیشتر نباشد. اگر سطح بیان ژن هدف کم باشد، مقدار ورودی را می توان تا حداکثر 5 میکروگرم RNA توتال افزایش داد.
2) آماده سازی سیستم واکنش رونویسی معکوس (سیستم 20 میکرولیتر)
| اجزاء | حجم (μL) |
| محلول واکنش مرحله قبل | 10 میکرولیتر |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (بدون رنگ) | 5 میکرولیتر |
| الیگو d(T)18 پرایمرها (50 میکرومول در لیتر)** | 2 میکرولیتر |
| یا پرایمرهای تصادفی (* برای qPCR) (50 میکرومول در لیتر)** | یا 2 میکرولیتر |
| آب بدون RNase | تا 20 میکرولیتر |
* مقدار پرایمرها را می توان با توجه به مقدار ورودی قالب تنظیم کرد. اگر محصول رونویسی معکوس برای آزمایش‌های qPCR استفاده شود، پرایمرهای تصادفی را می‌توان با توجه به مقدار توصیه شده به سیستم اضافه کرد.
** توصیه می شود ابتدا 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (بدون رنگ) اضافه کنید، خوب مخلوط کنید و سپس پرایمر رونویسی معکوس را اضافه کنید تا مطمئن شوید که پرایمر تحت تأثیر gDNA Digester قرار نمی گیرد.
3) تنظیمات رویه رونویسی معکوس
| دما | زمان |
| 55 ℃* | 5 دقیقه ** |
| 85 درجه سانتیگراد | 5 ثانیه |
* برای الگوهای با محتوای GC بالا یا الگوهای پیچیده، دمای رونویسی معکوس را می توان تا 60 درجه افزایش داد.
** این محصول می تواند توالی های cDNA زیر 14 کیلوبایت را سنتز کند. اگر به محصولات cDNA طولانی تری نیاز دارید، می توانید به طور مناسب زمان رونویسی معکوس را افزایش دهید.
- اگر آزمایش نیازی به حذف DNA ژنومی نداشته باشد
1) آماده سازی سیستم واکنش رونویسی معکوس (سیستم 20 میکرولیتر)
| اجزاء | حجم (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (بدون رنگ) | 5 میکرولیتر |
| الیگو d(T)18 پرایمرها (50 میکرومول در لیتر)** | 2 میکرولیتر |
| یا پرایمرهای تصادفی (* برای qPCR) (50 میکرومول در لیتر)** | یا 2 میکرولیتر |
| کل RNA* | 10 pg -5 میکروگرم |
| یا mRNA | 10 pg - 500 ng |
| آب بدون RNase | تا 20 میکرولیتر |
* توصیه می شود که مقدار ورودی RNA کل نباید از 2 میکروگرم تجاوز کند. اگر سطح بیان ژن هدف کم باشد، مقدار ورودی را می توان تا حداکثر 5 میکروگرم RNA توتال افزایش داد.
** مقدار پرایمرها با توجه به مقدار ورودی قالب قابل تنظیم است. اگر محصول رونویسی معکوس برای آزمایش‌های qPCR استفاده شود، پرایمرهای تصادفی را می‌توان با توجه به مقدار توصیه شده به سیستم اضافه کرد.
2) تنظیمات رویه رونویسی معکوس
| دما | زمان |
| 55 ℃* | 5 دقیقه ** |
| 85 درجه سانتیگراد | 5 ثانیه |
* برای الگوهایی با محتوای GC بالا یا الگوهای پیچیده، دمای رونویسی معکوس را می توان تا 60 درجه سانتیگراد افزایش داد.
** این محصول می تواند توالی های cDNA زیر 14 کیلوبایت را سنتز کند. اگر به محصولات cDNA طولانی تری نیاز دارید، می توانید به طور مناسب زمان رونویسی معکوس را افزایش دهید.
یادداشت ها
- تمام عملیات باید روی یخ انجام شود و باید به گونه ای انجام شود که از آلودگی RNase جلوگیری شود.
- این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
- لطفا برای ایمنی خود با کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف کار کنید.
اسناد:
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.