شرح
کیت بی سولفیت متیلاسیون DNA Hieff Superfast (بر پایه ستون) به سرعت سیتوزین های متیله نشده در نمونه های DNA را به اوراسیل تبدیل می کند، در حالی که سیتوزین های متیله را بدون تغییر باقی می گذارد. در طی تصفیه بی سولفیت در دمای بالا، DNA دو رشته ای به تک رشته ها دناتوره می شود. در حضور HSO3-، بقایای سیتوزین تحت دآمیناسیون قرار می گیرند و به اوراسیل تبدیل می شوند و سیتوزین های متیله بدون تغییر باقی می مانند. در تقویت بعدی PCR، اوراسیل با تیمین (T) جایگزین می شود. فرآیند تبدیل تنها 5 دقیقه طول می کشد و ورودی DNA از 100 pg تا 2 میکروگرم را در خود جای می دهد و بازده تبدیل ≥99٪ برای سیتوزین های متیله نشده به دست می آید. DNA تبدیل شده برای کاربردهای پایین دستی مانند تقویت PCR و توالی یابی NGS مناسب است.
ویژگی
ورودی کم: مناسب برای تبدیل نمونه هایی از 100 pg تا 2 میکروگرم
زمان تبدیل کوتاه: تقریبا 5 دقیقه
حداقل آسیب نمونه: حفظ یکپارچگی نمونه خوب پس از تبدیل.
راندمان تبدیل بالا: نرخ تبدیل ≥99% نرخ تبدیل بالا در مناطق با GC بالا با نرخ مثبت کاذب پایین.
مناسب برای نمونه های کمیاب، مانند تبدیل متیلاسیون DNA تک سلولی.
قابلیت تبدیل متیلاسیون نمونه های RNA را دارد.
محصول اجزاء
| خیر | نام جزء | 12225ES10 | 12225ES50 |
| 12225-الف | معرف تبدیل | 2 میلی لیتر × 1 | 3.3 میلی لیتر × 3 |
| 12225-B | بافر شستشو | 1.1 میلی لیتر × 1 | 5.5 میلی لیتر × 1 |
| 12225-C | بافر سولفوناسیون | 2.2 میلی لیتر × 1 | 11 میلی لیتر × 1 |
| 12225-D | بافر شستشو | 500 μL×1 | 1.5 میلی لیتر × 1 |
| 12225-E | ستون DNA | 10 | 50 |
| 12225-F | لوله مجموعه | 10 | 50 |
توجه:
برای 10 آزمایش در هر جعبه: 4.4 میلی لیتر اتانول بدون آب به محلول شستشو اضافه کنید.
برای 50 آزمایش در هر جعبه: 22 میلی لیتر اتانول بی آب را به محلول شستشو اضافه کنید.
پس از افزودن اتانول بی آب، آن را معکوس کرده و خوب مخلوط کنید، سپس برای استفاده در آینده نگهداری کنید. اطمینان حاصل کنید که درب بطری محکم بسته شده است تا از تبخیر اتانول جلوگیری شود که می تواند بر عملکرد معرف تأثیر بگذارد.
شکل
شکل 4. تبدیل بی سولفیت بر روی نمونه های DNA ژنومی انسان با استفاده از کیت های تبدیل 12225 و رقیب Q انجام شد. پس از آن، کیت های آماده سازی کتابخانه DNA تک رشته ای خاص متیلاسیون برای تولید کتابخانه ها مورد استفاده قرار گرفت. عملکرد کتابخانه و داده های کنترل کیفیت در بالا ارائه شده است. نتایج نشان می‌دهد که هنگام توالی‌بندی کتابخانه‌های تلفیقی از هر دو کیت 12225 و رقیب Q، کیت 12225 خروجی داده‌های بالاتری را به همراه داشت، نسبت هدف (%) بالاتری را به دست آورد و نرخ تکرار کمتری (%) را نشان داد.
حمل و نقل و ذخیره سازی
محلول تبدیل 12225-A را در دمای اتاق و دور از نور نگهداری کنید. سایر اجزا را در دمای اتاق نگهداری کنید. ماندگاری 12 ماه است.
توجه:
1. برای اطمینان از موفقیت آزمایش‌های پایین دست، مقدار کل DNA ورودی را در مرحله تبدیل به دقت تعیین کنید. توصیه می شود از Qubit 3.0/4.0 برای تعیین کمیت DNA با نسبت A260/A280 بین 1.7 و 1.9 استفاده کنید. محدوده DNA ورودی باید بین 100 pg تا 2 میکروگرم باشد و محدوده بهینه آن بین 100 نانوگرم تا 1 میکروگرم باشد. ورودی ناکافی DNA می تواند مانع از تشخیص پایین دستی شود، در حالی که ورودی بیش از حد ممکن است بازیابی و راندمان تبدیل را کاهش دهد.
2. محلول تبدیل، محلول سولفوناسیون و محلول شستشو حاوی اجزای فرار هستند. پس از استفاده، به سرعت درپوش ها را ببندید و در دمای اتاق نگهداری کنید.
3. برای نمونه های پس از تبدیل، آزمایشات پایین دستی را به سرعت ادامه دهید. برای نگهداری کوتاه مدت در دمای 20- درجه سانتیگراد و برای نگهداری طولانی مدت در دمای 80- درجه سانتیگراد نگهداری شود.
4. برای ایمنی و سلامتی خود، در حین کار از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.
5. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است!
دستورالعمل ها
تهیه معرف ها و مواد مصرفی: لوله سانتریفیوژ استریل 1.5 میلی لیتر، آب بدون آنزیم، اتانول مطلق، لوله PCR.
ل تبدیل بی سولفیت:
1) لوله PCR استریل مربوطه را با توجه به تعداد نمونه های مورد آزمایش آماده کنید و سیستم واکنش را مطابق جدول زیر آماده کنید:
2) سیستم تحول
| جزء | حجم |
| DNA | 100 pg-2 میکروگرم (تا 20 میکرولیتر) |
| بافر تبدیل | 180 میکرولیتر |
| حجم کل | 200 میکرولیتر |
با استفاده از پیپت، سیستم یا ورتکس فوق را دمیده و مخلوط کنید و به مدت 5 ثانیه مخلوط کنید، سپس برای مدت کوتاهی سانتریفیوژ کنید و محلول واکنش را به ته لوله PCR سانتریفیوژ کنید.
v نکته: 1. در این زمان حجم کل محلول واکنش در لوله PCR 200 میکرولیتر است. به منظور تکمیل ترانسفورماسیون، محلول واکنش باید به قسمت های مساوی تقسیم شده و پس از دمیدن و مخلوط کردن در مرحله 2 به یک لوله PCR استریل جدید منتقل شود و فرآیند تبدیل باید اجرا شود. پس از تبدیل، محلول های واکنش در دو لوله PCR برای خالص سازی در همان ستون تصفیه ترکیب شدند.
2. اگر حجم نمونه بین 20 تا 40 میکرولیتر است، حجم محلول تبدیل را کاهش دهید تا حجم کل 200 میکرولیتر حفظ شود.
3. اگر حجم نمونه 50 میکرولیتر باشد، 150 میکرولیتر از محلول تبدیل اضافه می شود، حجم کل در 200 میکرولیتر حفظ می شود و زمان تبدیل به 6-10 دقیقه افزایش می یابد.
3) تنظیم برنامه تبدیل CT
| دما | زمان |
| 98 ℃ | 5 دقیقه |
| 4 ℃ | ∞ |
لوله PCR روی یک ابزار PCR با یک برنامه از پیش تعیین شده برای انجام واکنش قرار می گیرد.
ل تطهیر
1) تی200 میکرولیتر از تبدیل راه حل برای پستون ادرارسسانتریفیوژ 30-60 ثانیه 13000 g، فیلتر را دور بیندازید و ستون تصفیه را درون آن قرار دهید سیلوله جمع آوریس دوباره؛
2) 100 میکرولیتر اضافه کنید بافر شستشو به ستون های تصفیه (تأیید کنید که اتانول مطلق اضافه شده است)، سانتریفیوژ به مدت 30-60 ثانیه 13000 g، فیلتر را دور بیندازید و ستون تصفیه را درون آن قرار دهید سیلوله جمع آوریس دوباره؛
3) 200 میکرولیتر اضافه کنید بافر سولفوناسیون به ستون های تصفیه و اجازه دهید واکنش به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق بماند. پس از واکنش، 30-60 ثانیه 13000 سانتریفیوژ کنید g، فیلتر را دور بریزید و آن را قرار دهید ستون های تصفیه در سیلوله جمع آوریس دوباره؛
4) 200 میکرولیتر از آن را اضافه کنید بافر شستشو به ستون های تصفیهسانتریفیوژ 30-60 ثانیه 13000 g فیلتر را دور بریزید و آن را قرار دهید پستون ادرارس در سیلوله جمع آوریس دوباره؛
5) مرحله 4) را یک بار تکرار کنید.
6) انتقال دهید ستون های تصفیه به لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری آماده شده، 30-10 میکرولیتر از آن اضافه کنید بافر شستشو پس از باز کردن درپوش و خشک شدن به مرکز غشای فیلتر رفته و آن را جمع آوری کنید DNA پس از ایستادن به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق و سانتریفیوژ کردن به مدت 1 دقیقه در 13000 g;
7) ذخیره کنید DNA به طور موقت در -20 ℃. برای ذخیره سازی طولانی مدت، لطفا ذخیره کنید DNA در -80 ℃ و از انجماد و ذوب مکرر غیر ضروری خودداری کنید.
توجه: محصول تبدیل خالص شده را می توان مستقیماً در واکنش PCR بعدی یا فرآیند توالی یابی استفاده کرد.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.