شرح
Hieff NGS™ One Pot Flash DNA Library PrepKit یک کیت کتابخانه DNA آنزیمی سریع است،جادوگر حاوی آنزیم با کیفیت بالا برای تکه تکه شدن DNA است و قطعه قطعه شدن DNA، ترمیم انتهایی و dA-tailing را در یک مرحله ترکیب می کند که زمان و هزینه آماده سازی کتابخانه را به میزان قابل توجهی کاهش می دهد.
این کیت آماده سازی کتابخانه با نمونه های 100 pg-500 نانوگرم از همه حیوانات معمولی، گیاهان، میکروارگانیسم ها و غیره سازگار است.
و به سرعت تکه تکه شدن DNA، ترمیم ترمینال و واکنش افزودن دم A را در یک لوله تشخیص دهید. این کیت باید با آداپتورها و پرایمرها مطابقت داشته باشد و با Illumina سازگار است. و MGI پلتفرم های توالی یابی با توان عملیاتی بالا
ویژگی
1) مناسب برای نمونه های DNA ژنومی 100 pg-500 ng.
2)سازگار با ایلومینا و MGI پلتفرم های توالی یابی با توان عملیاتی بالا
3)تکه تکه شدن، ترمیم انتهایی و A-tailing واکنش درون 5 دقیقه
4)نرخ تبدیل کتابخانه کارآمد و راندمان تقویت.
مشخصات
| گربه شماره | 12316ES24 / 12316ES96 |
| اندازه | 24 T / 96 تی |
اجزاء
| نام | 12316ES24 | 12316ES96 | |
| 12316-الف | لکه دار کردن مخلوط کنید | 240 μL | 960 μL |
| 12316-ب | تقویت کننده بستن | 720 μL | 4×720 μL |
| 12316-C | Fast T4 DNA Ligase | 120 μL | 480 μL |
| 12316-د | 2×نهایی HF مخلوط تقویتی | 600 μL | 4×600 μL |
| * | مخلوط پرایمر* | 120 μL | 480 μL |
توجه: * نشان می دهد که این معرف در این کیت موجود نیست و معرف های اضافی مورد نیاز است.کیت است سازگار با دو پلتفرم از ایلومینا و ام جی آی، اما مخلوط پرایمر اضافی (CAT # 13334 Primer Mix for MGI و Cat# 13335 Primer Mix for Illumina) مورد نیاز است.
ذخیره سازی
این محصول باید در -25~-15 نگهداری شود℃ برای 1 سال
ارقام
شکل 1. تشخیص DNA 10 نوع میکروارگانیسم
کتابخانه ها با استفاده از گربه شماره 12316 پروتکل ،10 نانوگرم استاندارد DNA جامعه میکروبی ZymoBIOMICS (Zymo Research® #D6306). کتابخانه ها در یک Illumina گردآوری و ترتیب بندی شدند (SE75).داده های توالی یابی به 20M همگن شدند و بین ترکیب مورد انتظار و شناسایی شده برای هر دو سطح ورودی مقایسه شد. تشخیص gDNA میکروبی خاص با ترکیب مورد انتظار مطابقت داشت. ترکیب مورد انتظار: کریپتوکوکوس نئوفورمنس 2%، ساکارومایسس سرویزیه 2%، باسیلوس سوبتلیس 12%، اشریشیا کلی 12%، انتروکوکوس فکالیس 12%، لاکتوباسیلوس فرمنتوم 12%، لیستریا مونوسیتوژنز 12%، سودوموناس 12% و سودوموناس 2% سالمونلا انتریکا 12 درصد
در مورد عملیات
1. لطفا با کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف کار کنید،برای امنیت شما
2. اجزاء را در دمای اتاق ذوب کنید. پس از ذوب شدنبا چرخاندن کاملاً مخلوط کنید، لوله را به طور مختصر بچرخانید و برای استفاده بعدی روی یخ قرار دهید.
3. هنگام تهیه محلول واکنش در هر مرحله، توصیه می شود از یک پیپت برای دمیدن و مخلوط کردن یکنواخت یا تکان دادن ملایم استفاده کنید. لرزش شدید ممکن است باعث کاهش خروجی کتابخانه شود.
4. به منظور جلوگیری از آلودگی متقاطع نمونه ها، استفاده از سر تفنگ با عنصر فیلتر توصیه می شود. لطفاً هنگام جذب نمونه های مختلف سر تفنگ را تعویض کنید.
5. انجام هر مرحله واکنش در ترموسایکلر با درب گرم شده توصیه می شود. ترموسایکلر باید قبل از استفاده تا دمای تنظیم شده گرم شود.
6. عملیات نامناسب ممکن است به احتمال زیاد باعث آلودگی آئروسل شود که بر دقت نتیجه تأثیر می گذارد. جداسازی فیزیکی اجباری مناطق اختلاط واکنش PCR و نواحی سنجش تصفیه محصول PCR توصیه می شود. مجهز به تجهیزاتی مانند پیپت های تخصصی برای ساخت کتابخانه.
7. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
درباره تکه تکه شدن DNA
1. برد سازگار این کیت 100 pg است–500 نانوگرم DNA ورودی DNA ورودی با کیفیت بالا با A260/A280 = 1.8-2.0 باید تا حد امکان استفاده شود.
2. اگر DNA ورودی حاوی غلظت بالایی از عامل کیلیت یون فلزی یا سایر نمک ها باشد، ممکن است آزمایش های بعدی را تحت تاثیر قرار دهد. توصیه می شود DNA را در ddH2O یا Tebuffer رقیق کنید (10 میلی متر tris-HCl، pH 8.0-8.5؛ 0.1 میلی مولار EDTA).
3. برای اکثر DNA ژنومی با کیفیت بالا، زمان هضم در جدول 1 نشان داده شده است. این کیت اولویت کمی دارد و می تواند الگوهای مختلف با محتوای GC را تحمل کند.
جدول 1. زمان توصیه شده قطعه قطعه شدن DNA ژنومی معمولی
| اندازه قله را درج کنید | زمان تکه تکه شدن | محدوده بهینه سازی |
| 200 جفت باز | 5 دقیقه | 3-8 دقیقه |
| 150 جفت باز | 8 دقیقه | 5-10 دقیقه |
اتصال آداپتور
1. غلظت آداپتور مستقیماً بر راندمان بستن و بازده کتابخانه تأثیر می گذارد. استفاده بیش از حد از آداپتور ممکن است آداپتوردایمر بیشتری تولید کند. دوز پایین ممکن است بر روی بستن کارایی و بازده کتابخانه در جداول 2 و 3 مقدار توصیه شده ذکر شده است آداپتور برای ورودی های مختلف DNA ورودی با استفاده از این کیت.
جدول 2. ایلومینای توصیه شده مقدار آداپتور برای DNA ورودی مختلف
| DNA ورودی | 15 μM چندگانه رقیق سازی آداپتور | حجم |
| 50 ng-500 ng | 10 | 5 μL |
| 1 ng-50 ng | 20 | 5 μL |
| 100 صفحه-1 ng | 30 | 5 μL |
جدول 3. MGI توصیه شده مقدار آداپتور برای DNA ورودی مختلف
| DNA ورودی | 10 μم رقیق سازی چندگانه | حجم |
| 50 نانوگرم-500 نانوگرم | رقت چندگانه | 5 μL |
| 10 ng-50 ng | 10 | 5 μL |
| 100 صفحه-10 ng | 5 | 5 μL |
تقویت کتابخانه
اعداد چرخه تقویت باید به شدت کنترل شوند. تقویت ناکافی ممکن است به بازده کتابخانه پایین منجر شود. تقویت بیش از حد ممکن است باعث افزایش بایاس، خطاها، خواندن تکراری و محصولات کایمریک شود. جدول 4 اعداد چرخه توصیه شده را با هدف قرار دادن بازده کتابخانه 1 فهرست می کند μg.
جدول 4. چرخه های توصیه شده 100 pg-500 ng DNA ورودی
| DNA ورودی (ng) | تعداد چرخه های مورد نیاز برای تولید 1 μg |
| 500 نانوگرم | 2-4 |
| 250 نانوگرم | 4-6 |
| 100 نانوگرم | 5-7 |
| 50 نانوگرم | 7-9 |
| 5 ng | 11-13 |
| 100 صفحه | 14-16 |
پاکسازی DNA و انتخاب اندازه مبتنی بر مهره
1. مراحل متعددی در فرآیند ساخت کتابخانه وجود دارد که به دانه های مغناطیسی خالص سازی DNA نیاز دارد. ما Hieff NGS را توصیه می کنیم™ دانه های انتخاب DNA (Yeasen Cat#12601) یا AMPure™ دانه های مغناطیسی XP (Beckman Cat#A63880) برای خالص سازی DNA و انتخاب اندازه.
2. دانه های مغناطیسی باید قبل از استفاده در دمای اتاق متعادل شوند، در غیر این صورت بازده کاهش می یابد و اثر انتخاب اندازه تحت تأثیر قرار می گیرد.
3. دانه های مغناطیسی باید قبل از استفاده با گرداب یا پیپت به خوبی مخلوط شوند.
4. هنگام انتقال مایع رویی، دانه ها را آسپیره نکنید، حتی مقادیر کمی از دانه ها ممکن است بر واکنش های زیر تأثیر بگذارد.
5. اتانول 80% باید تازه تهیه شود، در غیر این صورت بر راندمان بازیابی تأثیر می گذارد.
6. قبل از شستشوی محصول، دانه های مغناطیسی باید در دمای اتاق خشک شوند. خشکی ناکافی به راحتی باعث می شود که باقیمانده اتانول بر واکنش های بعدی تأثیر بگذارد. خشکی بیش از حد باعث ترک خوردن دانه های مغناطیسی و کاهش بازده تصفیه می شود. به طور معمول، خشک کردن در دمای اتاق به مدت 3-5 دقیقه کافی است تا دانه ها کاملا خشک شوند.
7. در صورت نیاز، نمونه‌های DNA خالص شده یا با اندازه انتخاب شده شستشو داده می‌شوند 0.1× بافر TE را می توان در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 2-1 هفته یا در دمای 20- درجه سانتی گراد به مدت یک ماه نگهداری کرد.
تجزیه و تحلیل کیفیت کتابخانه
1. کیفیت کتابخانه های ساخته شده به طور کلی با اندازه گیری غلظت و توزیع اندازه تجزیه و تحلیل می شود.
2. غلظت کتابخانه ها را می توان با روش های مبتنی بر فلورسنت مانند Qubit و PicoGreen یا qPCR اندازه گیری کرد.
3. استفاده از روش های کمی سازی مبتنی بر جذب مانند NanoDrop توصیه نمی شود.
4. توصیه می شود از روش qPCR برای کمی سازی کتابخانه استفاده کنید: روش های مبتنی بر فلورسنت مانند Qubit و PicoGreen نمی توانند ساختارهای ناقص dsDNA (درج های بدون آداپتور یا تنها با یکی از انتهای متصل شده با آداپتور) از کتابخانه های کامل متمایز شوند. روش qPCR تنها کتابخانه‌های کامل را با هر دو سر متصل شده با آداپتورها (کتابخانه‌های متوالی) تقویت و اندازه‌گیری می‌کند، بنابراین اندازه‌گیری دقیق‌تری برای بارگذاری فراهم می‌کند.
5. توزیع اندازه کتابخانه ها را می توان با استفاده از Agilent Bioanalyzer یا دستگاه های دیگر بر اساس اصول الکتروفورز مویرگی یا میکروسیال تجزیه و تحلیل کرد.
اسناد:
برگه اطلاعات ایمنی
دفترچه راهنما
12316_Manual_Ver.Eن20241225.pdf
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.