شرح
پروب تخلیه mRNA گلوبین (انسان) برای حذف mRNA گلوبین انسانی طراحی شده است. این می تواند به طور موثر mRNA گلوبین را از بزرگسالان، نوزادان و جنین حذف کندnic منابع، از جمله HBA1/2، HBB، HBD، HBM، HBG1/2، HBE1، HBQ1 و HBZ. این محصول با Hieff NGS استفاده می شودTM کیت تخلیه rRNA MaxUp (انسان/موش/موش) (Yeasen#12253) برای حذف موثر rRNA و mRNA گلوبین از RNA کل. این کیت هم برای نمونه های RNA دست نخورده و هم برای نمونه های تجزیه شده مناسب است. نمونه‌های RNA پس از حذف mRNA rRNA و گلوبین می‌توانند برای تجزیه و تحلیل توالی‌یابی با توان بالای mRNA و RNA غیر کدکننده استفاده شوند که به طور قابل‌توجهی نسبت داده‌های معتبر در نتایج توالی‌یابی و سنتز cDNA یا سایر کاربردهای پایین‌دستی را افزایش می‌دهد.
برنامه کاربردی محصول
مناسب برای 100 ng~1 میکروگرم نمونه RNA کل انسان، منبع خون موش و موش، و برای هر دو نمونه RNA دست نخورده یا نیمه تخریب شده.
اجزای محصول
| نام محصول | مشخصات | |
| کاوشگر گلوبین (انسان) | 12806ES24 | 24 ت |
| 12806ES96 | 96 ت |
حمل و نقل و ذخیره سازی
تمام اجزاء با یخ خشک ارسال می شوند و می توان آنها را در دمای -20 درجه سانتیگراد به مدت یک سال نگهداری کرد.
شکل
در مجموع 500ng و 100ng RNA کل خون انسان به ترتیب تحت حذف rRNA و حذف ترکیبی rRNA و گلوبین قرار گرفت. پس از ساخت کتابخانه و تعیین توالی، محتوای mRNA گلوبین مقایسه شد.
هشدارها
1. لطفاً از مواد مصرفی بدون آلودگی RNase استفاده کنید و ناحیه آزمایش را مرتباً تمیز کنید. توصیه می شود از RNAZap ThermoFisher استفاده کنیدTM اسپری حذف اسید نوکلئیک با کارایی بالا برای حذف آلودگی RNase.
2. نمونه RNA باید عاری از آلودگی DNA ژنومی باشد. اگر gDNA در نمونه باقی بماند، باید توسط DNase I هضم و قبل از استفاده خالص شود.
3. حداکثر حجم ورودی نمونه RNA 10 میکرولیتر است. اگر حجم نمونه زیاد باشد، ابتدا می توان آن را متمرکز کرد.
4. برای ایمنی و سلامتی خود، لطفا از کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف برای عمل استفاده کنید.
5. فقط برای استفاده تحقیقاتی!
دستورالعمل ها
1. هیبریداسیون پروب به RNA
1.1 10 نانوگرم تا 1 میکروگرم از RNA کل را با آب بدون نوکلئاز تا حجم نهایی 10 میکرولیتر در یک لوله PCR رقیق کنید. RNA را نگه دارید روی یخ
1.2 مونتاژ کنید واکنش هیبریداسیون RNA/پروب زیر روی یخ مطابق جدول 1.
جدول 1 واکنش هیبریداسیون RNA/پروب
| اجزاء | حجم (μL) |
| بافر هیبریداسیون | 3 |
| مخلوط پروب (H/M/آر) | 1 |
| کاوشگر گلوبین (انسان) | 1 |
| RNA کل | 10 (100 نانوگرم ~ 1 میکروگرم) |
| مجموع | 15 |
1.3 با پیپت کردن به آرامی حداقل 10 بار به طور کامل مخلوط کنید. به طور خلاصه لوله را در یک میکروسانتریفیوژ به سمت پایین بچرخانید تا مایع از کنار لوله جمع شود.
1.4 لوله را در یک ترموسایکلر قرار دهید و برنامه زیر را در جدول 2 با درب گرم شده روی 105 درجه سانتیگراد اجرا کنید.
جدول 2 برنامه واکنش هیبریداسیون RNA/پروب
| دما | مدت زمان |
| درب داغ 105 درجه سانتیگراد | روشن |
| 95 درجه سانتی گراد | 2 دقیقه |
| 95-22 درجه سانتی گراد | 0.1 درجه سانتیگراد در ثانیه |
| 22 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه |
| 4 درجه سانتی گراد | نگه دارید |
2. هضم RNase H
2.1 واکنش هضم RNase H زیر را جمع آوری کنید روی یخ مطابق جدول 3.
جدول 3 واکنش هضم RNase H
| اجزاء | حجم (μL) |
| بافر RNase H | 3 |
| RNase H | 2 |
| RNA هیبرید شده (مرحله 1.4) | 15 |
| مجموع | 20 |
2.2 حداقل 10 بار با پیپت کردن به آرامی به سمت بالا و پایین مخلوط کنید. به طور خلاصه لوله را در یک میکروسانتریفیوژ به سمت پایین بچرخانید تا مایع از کنار لوله جمع شود.
2.3 لوله را در یک ترموسایکلر قرار دهید و برنامه زیر را اجرا کنید: درب 50 درجه سانتیگراد؛ 37 درجه سانتیگراد، 30 دقیقه; 4 درجه سانتیگراد، نگه دارید.
3. DNase من گوارش
3.1 واکنش هضم DNase I زیر را مطابق جدول 4 روی یخ جمع کنید.
جدول 4 واکنش هضم DNase Ⅰ
| اجزاء | حجم (μL) |
| بافر DNase I | 27.5 |
| DNase I | 2.5 |
| RNA تیمار شده با RNase H (مرحله 2.3) | 20 |
| مجموع | 50 |
3.2 با پیپت کردن به آرامی حداقل 10 بار به طور کامل مخلوط کنید. به طور خلاصه لوله را در یک میکروسانتریفیوژ به سمت پایین بچرخانید تا مایع از کنار لوله جمع شود.
3.3 لوله را در یک ترموسایکلر قرار دهید و برنامه زیر را اجرا کنید: درب بسته 37 درجه سانتیگراد، 30 دقیقه; 4 درجه سانتیگراد، نگه دارید.
4. خالص سازی RNA
4.1 تعادل NGS HieffTMپاک کننده RNA (Cat#12602) به دمای اتاق برسد و قبل از استفاده، دانه ها را به طور کامل با گرداب زدن معلق کنید.
4.2 افزودن 110 میکرولیتر (2.2×) دانه ها را به محلول RNA از مرحله 3.3 وارد کنید و با لوله کردن حداقل 10 بار به طور کامل مخلوط کنید.
4.3 در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه انکوبه کنید تا RNA به دانه ها متصل شود.
4.4 لوله را روی پایه مغناطیسی قرار دهید تا دانه ها از مایع رویی جدا شوند. وقتی محلول شفاف شد (حدود 3 دقیقه)، مایع رویی را دور بریزید. مراقب باشید که با نوک پیپت به مهره ها دست نزنید.
4.5 لوله را روی پایه مغناطیسی نگه دارید. 200 میکرولیتر اتانول 80 درصد تازه آماده شده را به لوله اضافه کنید. به مدت 30 ثانیه در دمای اتاق انکوبه کنید و سپس مایع رویی را دور بریزید. مراقب باشید که با نوک پیپت به مهره ها دست نزنید.
4.6 مرحله 4.5 را یک بار برای مجموع دو شستشو تکرار کنید.
4.7 اتانول باقیمانده را با 10 میکرولیتر حذف کنید - نوک پیپت لوله را روی پایه مغناطیسی نگه دارید و مهره ها را با هوا تا 5 دقیقه با درب باز خشک کنید.
4.8 لوله را از پایه مغناطیسی خارج کنید. RNA را از دانه ها با افزودن 11 میکرولیتر آب بدون نوکلئاز شستشو دهید. با پیپت کردن حداقل 10 بار به طور کامل مخلوط کنید و لوله را به طور خلاصه بچرخانید.
4.9 به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید. لوله را روی پایه مغناطیسی قرار دهید تا محلول شفاف شود (~ 3 دقیقه).
4.10 10 میکرولیتر از مایع رویی را به یک لوله بدون نوکلئاز منتقل کنید.
توجه: در صورت نیاز به توقف در این نقطه، نمونه ها را می توان در دمای -80 درجه سانتی گراد نگهداری کرد.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.