شرح
Hieff™ تطبیق پذیری T4 DNA Ligase گونه ای از T4 DNA Ligase است. این آنزیم برای کاتالیز کردن واکنش بستن بین مولکول‌های چسبنده یا با انتهای بلوت مناسب است. این یک محصول تک آنزیمی است که برای اتصال قطعات DNA و آداپتورها در طول فرآیند آماده سازی کتابخانه در توالی یابی نسل بعدی (NGS) طراحی شده است. هیف® تطبیق پذیری T4 DNA Ligase به طور گسترده از طریق توالی یابی با توان عملیاتی بالا تأیید شده است و کیفیت استثنایی از خود نشان می دهد.
ویژگی
- وفاداری بالا
- مقاوم در برابر حرارت
درباره توسعه همه کاره DNA لیگاز T4 بیشتر بدانید
مشخصات
| منبع | E.coli نوترکیب |
| بافر ذخیره سازی | 50 میلی متر Tris-HC1,100 mM KC1,0.1 میلی‌مولار EDTA، 1 میلی‌مولار DTT، 50 درصد گلیسرول، pH 7.5士0.2 @25℃ |
| تعریف واحد | در یک سیستم واکنش بستن 20 میکرولیتری، مقدار آنزیم مورد نیاز برای کاتالیز بستن بیش از 50 درصد قطعات DNA، زمانی که 6 میکروگرم λDNA-Hind III در دمای 16 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه واکنش نشان می دهد، به عنوان 1 واحد فعالیت (U) تعریف می شود. |
اجزاء
| اجزاء | نام | 12996ES60 60 KU | 12996ES62 600KU |
| 12996-الف | Hieff® T4 DNA لیگاز همه کاره (600 U/µL) | 100 میکرولیتر | 1000 میکرولیتر |
| 12996-B | بافر 10×T4 DNA لیگاز | 500 میکرولیتر | 3×1500 میکرولیتر |
ذخیره سازی
این محصول باید در دمای -25 ~ -15 درجه سانتیگراد برای 2 نگهداری شود سال
شکل
لطفاً برای پرس و جو در مورد داده های مقایسه عملکرد بین این آنزیم و سایر لیگازهای DNA T4 معمولی و مقاوم در برابر حرارت پیام بگذارید.
یادداشت ها
1. لطفا با روپوش آزمایشگاهی و دستکش یکبار مصرف کار کنید،برای امنیت شما
2. اگر مقدار کمی بارش در بافر رخ دهد، یک پدیده طبیعی است. لطفاً قبل از استفاده بافر را وارونه کرده و کاملاً مخلوط کنید.
3. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
پروتکل
1. کیت های آماده سازی کتابخانه DNA جریان اصلی فعلی با استفاده از روش مبتنی بر بستن معمولاً به مراحل خالص سازی پس از تعمیر نهایی و A-tailing نیاز ندارند. قطعات DNA مستقیماً در معرض بستن آداپتور بدون خالص سازی قرار می گیرند. این کیت با جریان اصلی سازگار است سیستم های تعمیر انتهایی و A-tailing تجاری موجود برای بستن آداپتور بدون درز.
واکنش زیر را در یک لوله میکرو سانتریفیوژ روی یخ تنظیم کنید، به آرامی با پیپت کردن یا تکان دادن مخلوط کنید، برای مدت کوتاهی سانتریفیوژ کنید و در دمای 20 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه غیرفعال کنید.
جدول 1. سیستم واکنش برای بستن آداپتور
| جزء | حجم(μL) | غلظت نهایی |
| DNA دنباله دار dA | 60 | 1× |
| بافر 10×T4 DNA لیگاز | 10 | 0.1 μM-0.5 μM |
| 50% PEG6000 | 12* | 1 ng -400 نانوگرم |
| آداپتور DNA | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| آب بدون هسته | بالا به 100 | - |
【توجه داشته باشید】* محلول 50% PEG6000 در کیت موجود نیست، باید خودتان آن را تهیه کنید.
**لطفا به جدول مراجعه کنید 2 برای مقدار آداپتور
***مقدار T4 DNA Ligase را می توان در صورت نیاز 3-5 میکرولیتر اضافه کرد.
2. غلظت آداپتور مستقیماً بر راندمان بستن و بازده کتابخانه تأثیر می گذارد. استفاده بیش از حد از آداپتورها ممکن است منجر شود در دایمرهای آداپتور بیشتر، در حالی که استفاده کم ممکن است بر کارایی اتصال و تولید کتابخانه تأثیر بگذارد. جدول 2 مقدار آداپتور توصیه شده برای مقادیر مختلف DNA ورودی را فهرست می کند.
جدول 2. مقدار آداپتور توصیه شده برای 100 pg-1 میکروگرم DNA ورودی
| DNA ورودی | تمرکز |
| 0.1 ng | |
| 1 نانوگرم | 0.5 میکرومولار |
| 10 نانوگرم | 1 میکرومولار |
| 25 نانوگرم | 2 میکرومولار |
| 100 ng ~ 1000 ng | 10 میکرومولار |
【توجه داشته باشید】：مقدار ادپتر را می توان با توجه به الزامات جدول بالا تنظیم کرد.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.