Hifair™ کیت پروب یک مرحله ای RT-qPCR V Multiplex (UDG به علاوه) یک کیت PCR کمی چندگانه مبتنی بر RNA به عنوان الگو است. در فرآیند آزمایش، رونویسی معکوس و PCR کمی در همان لوله انجام شد که عملیات آزمایشی را ساده کرد و خطر آلودگی را کاهش داد.

در این کیت، اولین رشته cDNA به طور موثر توسط Hifair مقاوم در برابر حرارت سنتز شد.^TM V ترانس کریپتاز معکوس و به صورت کمی توسط UNICON تقویت شد^TM HotStart Taq DNA Polymerase. این کیت عمدتاً حاوی بافر MP بهینه شده، مخلوط آنزیم‌ها و غیره است. محلول بافر از قبل حاوی منیزیم است²⁺ و dNTP. علاوه بر این، عواملی که می توانند به طور موثری تقویت غیر اختصاصی PCR را مهار کنند و راندمان تقویت چندین واکنش qPCR را بهبود بخشند، اضافه می شوند که می توانند کارایی تقویت را تضمین کنند و تا واکنش تقویت چندگانه را انجام دهند. سیستم dUTP/UDG برای جلوگیری موثر از خطر آلودگی آئروسل اضافه شد.

ویژگی ها

حساسیت بالا：سیستم بافر با دقت بهینه سازی شده، حساسیت تشخیص الگوهای کم غلظت را تا 250 کپی در میلی لیتر بهبود می بخشد.；

پایداری فوق العاده: محصول تست پایداری بلادرنگ را به مدت 18 ماه پشت سر گذاشته است.

سیستم ضد آلودگی dUP/UDG：سیستم ضد آلودگی dUTP/UDG برای کاهش آلودگی آئروسل محصولات به طور موثر، کاهش مثبت کاذب و اطمینان از نتایج معتبر معرفی شده است.；

پشتیبانی از برنامه سریع: سازگار با برنامه سریع، 40 دقیقه می تواند نتایج ایجاد کند.

اجزاء

توجه داشته باشید: 1) 2×هایفیر^TM بافر V MP مخفف است هیفر^TM V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer، که شامل dNTPs، dUTP، Mg می باشد2+، تثبیت کننده ها، تقویت کننده ها و موارد دیگر.

2) هیفیر^TM V آنزیم مخلوط عمدتا شامل هایفیر مقاوم در برابر حرارت^TM V رونوشت معکوس، UNICONTM HotStart Taq DNA پلیمرها و UDGase.

ذخیره سازی

تیاو محصول باید باشد ذخیره شده است در -25 درجه سانتیگراد ~ -15 درجه سانتیگراد برای 18 ماه.

دستورالعمل ها

ترکیب واکنش

توجه داشته باشید：حتما قبل از استفاده خوب مخلوط کنید، از ایجاد حباب بیش از حد ناشی از لرزش شدید اجتناب کنید.

الف) پرایمر/کاوشگر تمرکز: پرایمر مخلوط شامل پرایمر مالتی پلکس، بسته به موقعیت، غلظت بهینه پرایمر ممکن است بین 0.1 تا 1.0 میکرومولار باشد.مخلوط پروب شامل گروه فلورسنت تفاوت برچسب زدن پروب چندگانه، بسته به موقعیت غلظت پروب بهینه ممکن است بین 0.05 و 0 باشد.5 μM.

ج) رقیق سازی الگو: qPCR بسیار حساس است و توصیه می شود که قالب را رقیق کنید. مقدار Ct کنترلی بین 20 تا 35 مناسب است.

د) آماده‌سازی سیستم: جدا کردن سر با عنصر فیلتر. از آلودگی متقاطع و آلودگی آئروسل خودداری کنید.

پروتکل دوچرخه سواری بهینه شده

توجه داشته باشید：الف) ررونویسی همیشگی: دما می تواند 42 را انتخاب کنددرجه سانتی گراد یا 50درجه سانتی گراد به مدت 10-15 دقیقه.

ب) واکنش تقویت: درجه حرارت با توجه به مقدار Tm پرایمرهای طراحی شده تنظیم می شود.

ج) دریافت سیگنال فلورسانس: لطفاً رویه آزمایشی را مطابق با الزامات کتابچه راهنمای ابزار تنظیم کنید.

3. برنامه تجهیزات

تجهیزات با Rox：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™

تجهیزات با Low Rox：ABI 7500، 7500 Fast، ViiA™7، QuantStudio™ 3 و 5، QuantStudio™ 6،7،12k Flex

Stratagene MX3000P™، MX3005P™، MX4000P™

تجهیزات بدون Rox：

Bio-Rad CFX96™، CFX384™، iCycler iQ™، iQ™5، MyiQ™، MiniOpticon™، Opticon®، Opticon® 2، Chromo4™

اپندورف Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; کیاگن Corbett Rotor-Gene® Q، Rotor-Gene® 3000، Rotor-Gene® 6000

علم کاربردی روشه LightCycler® 480، LightCycler® 2.0، Lightcycler® 96

ترمو علمی PikoReal Cycler; قیفاووس SmartCycler®; ایلومینا Eco qPCR

یادداشت ها

لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود از تجهیزات حفاظتی لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی استفاده کنید!

لطفا از مواد مصرفی RNasefree استفاده کنید برای آزمایش

تست حساسیت

13650 ذخیره شده در دمای 20- درجه سانتیگراد به مدت 18 ماه (گروه آزمایش) و کسانی که در مدت زمان ماندگاری بودند (گروه کنترل) به طور همزمان برای رقت شیب (500 کپی در میلی لیتر، 250 کپی در میلی لیتر) شبه ویروس SARS-CoV-2 و ژن ORF مورد آزمایش قرار گرفتند. هشت چاه تکرار برای هر غلظت، با نرخ تشخیص 100٪ آزمایش شد. علاوه بر این، تفاوت معنی داری در شکل پیک منحنی تقویت و مقادیر Ct وجود نداشت.

تست پایداری در زمان واقعی

13650 در دمای 20- درجه سانتیگراد به مدت 18 ماه نگهداری می شود و آنهایی که در مدت زمان ماندگاری خود هستند. هر دو گروه به طور همزمان برای ژن ORF شبه ویروس SARS-CoV-2 و ژن N با غلظت 1000 کپی در میلی لیتر با 20 چاه تکراری مورد آزمایش قرار گرفتند. نرخ تشخیص برای هر دو 100٪ بود و تفاوت قابل توجهی در شکل منحنی های تقویت یا مقادیر Ct وجود نداشت.

شکل 1. Red: 13650 در مدت زمان ماندگاری آنها；آبی：13650 در دمای 20- درجه سانتیگراد به مدت 18 ماه نگهداری می شود.

عملکرد پایدار پس از چرخه های مکرر انجماد و ذوب

با قرار دادن معرف 13650 در 30 و 50 چرخه انجماد-ذوب با استفاده از یخ خشک، در کنار معرف‌هایی که به طور معمول در دمای 20- درجه سانتیگراد ذخیره می‌شوند، و همزمان با آزمایش ژن ORF شبه ویروس SARS-CoV-2، نتایج نشان داد که عملکرد 13650 reagents 13650 13650 uncycles freegent-off-aw، پس از چرخه فریز 5 بود.

شکل 2. قرمز: 13650 به طور معمول در دمای 20- درجه سانتیگراد ذخیره می شود. بنفش：13650 تا 30 چرخه انجماد و ذوب；سبز：13650 تا 50 سیکل انجماد و ذوب.

سازگار با پروتکل های استاندارد و سریع

با استفاده از 13650ES، ژن ORF و ژن N شبه ویروس SARS-CoV-2 تحت یک سیستم واکنش با هر دو پروتکل استاندارد و سریع شناسایی شدند. نتایج نشان داد که تحت یک سیستم 4-plex، هیچ تفاوتی در اشکال پیک منحنی تقویت و مقادیر Ct بین دو پروتکل وجود ندارد.

اسناد:

دفترچه راهنما