شرح
Tth DNA Polymerase یک DNA پلیمراز مقاوم در برابر حرارت است که از باکتری ترموفیل کشف شده است. ترموس ترموفیلوس HB8. در حضور Mg2+، این آنزیم فعالیت 5'-3' DNA پلیمراز و فعالیت اگزونوکلئاز 5'-3 را نشان می دهد، اما فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 3'-5 است، و به طور گسترده ای برای واکنش های تقویت PCR قابل استفاده است. در حضور Mn2+، آنزیم فعالیت ترانس کریپتاز معکوس قوی را در دمای 70-55 درجه سانتیگراد نشان می دهد و آن را برای واکنش های RT-PCR یک مرحله ای مناسب می کند.
مشخصات
تعریف واحد: یک واحد (U) فعالیت به‌عنوان مقدار آنزیمی تعریف می‌شود که 10 نانومول از نوکلئوتیدهای کل را در یک محصول نامحلول در اسید در 30 دقیقه در دمای 74 درجه سانتیگراد با استفاده از DNA اسپرم فعال‌شده ماهی آزاد به‌عنوان الگو/پرایمر ترکیب می‌کند.
جزء
| خیر | نام | اندازه | |
| 14607ES72 (250 U) | 14607ES80 (1250 U) | ||
| 14607-A | Tth DNA پلیمراز (5U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14607-B | 5×Tth RT-PCR بافر | 1 میلی لیتر | 4×1.25 میلی لیتر |
| 14607-C | 10×Tth PCR بافر (با Mg2+) | 500 μL | 2×1.25 میلی لیتر |
| 14607-D | 50 میلی‌مولار Mg (OAc) 2 | 250 μL | 1.25 میلی لیتر |
| 14607-E | مخلوط dNTP (هر کدام 10 میلی‌مولار) | 150 μL | 750 μL |
حمل و نقل و ذخیره سازی
حمل و نقلبا یخ خشک فروشگاه در -20 درجه سانتی گراد با ماندگاری 2 سال.
موارد احتیاط
1) اگر در هنگام ذوب مقدار کمی رسوب در بافر ظاهر شود، این یک پدیده طبیعی است. لطفا قبل از استفاده معکوس کرده و کاملا مخلوط کنید.
2) برای ایمنی و سلامتی خود، در حین کار از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.
3) این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است!
دستورالعمل ها
روش پیشنهادی واکنش PCR:
1.آماده سازی سیستم واکنش
| نام | حجم (μL) |
| 10×Tth PCR بافر (با Mg2+) | 5 |
| Tth DNA پلیمراز (5U/μL) | 0.5 |
| مخلوط dNTP (هر کدام 10 میلی‌مولار) | 1 |
| بالادست پرایمر 10μM | 2 |
| پایین دست پرایمر 10μM | 2 |
| DNA الگو | 50 صفحه - 1 میکروگرم |
| ddH2O | به 50 |
[توجه]: مقدار Tth DNA Polymerase، پرایمرهای بالادست و پایین دست، و مخلوط dNTP را می توان با توجه به نیازهای آزمایشی خاص تنظیم کرد.
2. راه اندازی چرخه
| مراحل | دما(ºC) | زمان | چرخه ها |
| پیش دناتوراسیون | 94 | 30 ثانیه-5 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 94 | 30 ثانیه |
35
|
| آنیل کردن | 50-70 | 30 ثانیه | |
| پسوند | 72 | 60 ثانیه در کیلوبایت | |
| پسوند نهایی | 72 | 10 دقیقه | 1 |
[توجه]: شرایط واکنش را می توان با توجه به نیازهای آزمایشی خاص تنظیم کرد.
روش واکنش RT-PCR توصیه شده:
1. آماده سازی سیستم واکنش
| نام | حجم (μL) |
| 5×Tth RT-PCR بافر | 10 |
| Tth DNA پلیمراز (5U/μL) | 1.5 |
| 50 میلی‌مولار Mg (OAc) 2 | 2.5 |
| مخلوط dNTP (هر کدام 10 میلی‌مولار) | 1.5 |
| بالادست پرایمر 10μM | 2 |
| پایین دست پرایمر 10μM | 2 |
| الگو RNA | 50 صفحه - 1 میکروگرم |
| ddH2O | به 50 |
[توجه]: مقدار Tth DNA Polymerase، پرایمرهای بالادست و پایین دست، و مخلوط dNTP را می توان با توجه به نیازهای آزمایشی خاص تنظیم کرد.
2.تنظیم چرخه
| مراحل | دما (ºC) | زمان | چرخه ها |
| رونویسی معکوس | 55-70 | 30 دقیقه | 1 |
| قبل ازدناتوره سازی | 94 | 30 ثانیه-5 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 94 | 30 ثانیه |
35
|
| آنیل کردن | 50-70 | 30 ثانیه | |
| پسوند | 72 | 60 ثانیه در کیلوبایت | |
| پسوند نهایی | 72 | 10 دقیقه | 1 |
[توجه]: شرایط واکنش را می توان با توجه به نیازهای آزمایشی خاص تنظیم کرد.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.