شرح
ArCas12a، مشتق شده از سیستم CRISPR از آگاتوباکتر رکتالیس باکتری و همچنین به عنوان Cpf1 شناخته می شود، یک پروتئین مونومر متشکل از 1263 اسید آمینه است. ArCas12a به‌عنوان عضو کلاس II (نوع V) سیستم CRISPR/Cas، تنها از طریق یک پروتئین اثرگذار منفرد عمل می‌کند و تفاوت‌های قابل‌توجهی با Cas9 نشان می‌دهد، مانند هدف قرار دادن موتیف‌های غنی از T، عدم نیاز به crRNA فعال‌کننده ترانس، تولید انتهای چسبنده پس از شکستن DNA دو رشته‌ای، مشارکت در فرآیند هسته‌ای DNA، مشارکت در فرآیند DNA دارای فعالیت.
ArCas12a فاقد دامنه HNH است و می تواند به طور مستقل از دامنه RuvC خود برای تشخیص ناحیه PAM غنی از تیمین (T) در انتهای 5' اسید نوکلئیک هدف تحت هدایت RNA CRISPR (crRNA) استفاده کند و باعث جدا شدن DNA هدف شود. این با موفقیت برای ویرایش ژنوم در بسیاری از پستانداران و گیاهان استفاده شده است. علاوه بر این، ArCas12a فعالیت ترانس برش را نشان می دهد، که قادر به برش بی رویه DNA تک رشته ای غیر هدف (ssDNA) در سیستم واکنش است.
در مقایسه با سایر LbCas12a/AsCas12a، ArCas12a سازگاری دمایی بالاتری را نشان می دهد (25-55oسی، آن را برای ویرایش ژنوم و کاربردهای تشخیص اسید نوکلئیک مناسب می کند.
ویژگی ها
محدوده دمای واکنش گسترده: فعالیت برش را در محدوده دمایی 25-55 نشان می دهدoسی
باقیمانده نوکلئاز کم: بدون اگزونوکلئاز، نیکاز یا RNase باقیمانده
فعالیت برش سیس: برش بسیار موثر DNA دو رشته ای در شرایط آزمایشگاهی
فعالیت ترانس برش: فعالیت ترانس برش بالا، مناسب برای تشخیص اسید نوکلئیک
برنامه های کاربردی
ویرایش ژن CRISPR/Cas
تشخیص و تشخیص بر اساس سیستم CRISPR/Cas
سایر کاربردهای تشخیص همراه با فناوری های تقویت اسید نوکلئیک همدما (RPA و LAMP) و غیره
مشخصات
| منبع | ژن Cpf1 از آگاتوباکتر رکتالیس از طریق بیان نوترکیب در بیان می شود E.coli |
| وزن مولکولی | 149 کیلو دالتون |
| دنباله PAM | TTTN یا TTTV |
| شرایط واکنش | 50 میلی‌مولار NaCl، 10 میلی‌مولار Tris-HCl، 10 میلی‌مولار MgCl2PH 7.9 @25oسی |
| تمرکز | 10 میکرومولار |
| خلوص | >95% (SDS-PAGE) |
| شرایط غیر فعال سازی | 85oسی، 5-10 دقیقه |
اجزاء
| اجزاء خیر | نام | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | هسته ArCas12a (10 μم) | 100 میکرولیتر | |
| 14702-B | 10×بافر واکنش ArCas12a | 1 میلی لیتر | 1 میلی لیتر |
حمل و نقل و ذخیره سازی
این محصول باید در دمای -25 تا -15 نگهداری شودoسی به مدت 2 سال
ارقام
شکل 1. تست فعالیت برش سیس ArCas12a: M: نشانگر. ج: الگوی DNA دو رشته ای (dsDNA)
توجه: تحت هدایت crRNA، می تواند به طور موثر dsDNA (600 جفت باز) را برای تولید دو قطعه (200 جفت باز + 400 جفت باز) جدا کند.
شکل 2. نتایج تست فعالیت ترانس برش ArCas12a
توجه: با استفاده از dsDNA به عنوان هدف، ArCas12a، crRNA، و یک پروب گزارشگر ssDNA (حاوی یک گروه گزارشگر فلورسنت) برای برش آزمایشگاهی اضافه شد. هنگامی که ArCas12a با crRNA و DNA هدف کمپلکس تشکیل می‌دهد، فعالیت trans-cleavage را فعال می‌کند و پروب گزارشگر ssDNA را قطع می‌کند و در نتیجه فلورسانس منتشر می‌کند.
اسناد:
برگه اطلاعات ایمنی
دفترچه راهنما
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.