شرح
هسته AapCas12b (همچنین به عنوان C2c1 شناخته می شود) یک اندونوکلئاز DNA است که با واسطه tracrRNA:crRNA (یا sgRNA)، مشتق شده از باکتری ترموفیل است. آلیسیکلوباسیلوس اسیدوفیلوس. در حضور یک توالی PAM (TTN) در DNA دو رشته‌ای هدف (dsDNA)، به طور خاص dsDNA هدف را می‌شکافد و باعث شکستگی دو رشته‌ای و ایجاد انتهای چسبنده می‌شود. AapCas12b می تواند به طور خاص اهداف DNA تک رشته ای را مستقل از توالی PAM بشکند. هر دو هدف DNA دو رشته ای و تک رشته ای می توانند فعالیت ترانس برش AapCas12b را فعال کنند. هنگامی که آنزیم AapCas12b یک کمپلکس سه تایی با sgRNA و DNA هدف تشکیل می‌دهد، برای فعالیت غیراختصاصی برش ssDNA فعال می‌شود و هر توالی دلخواه ssDNA را در سیستم قطع می‌کند. دمای بهینه واکنش برش برای AapCas12b 60 استoسیکه آن را نسبت به AacCas12b در برابر حرارت مقاوم‌تر می‌کند و برای استفاده با LAMP برای توسعه سیستم‌های تقویت همدما/تشخیص CRISPR-Cas مناسب‌تر است.
ویژگی ها
محدوده دمای واکنش گسترده: فعالیت برش را در محدوده دمایی 37 نشان می دهد~65oسی
باقیمانده نوکلئاز کم: بدون اگزونوکلئاز، نیکاز یا RNase باقیمانده
فعالیت برش سیس: برش بسیار موثر DNA دو رشته ای در شرایط آزمایشگاهی
فعالیت ترانس برش: فعالیت ترانس برش بالا، مناسب برای تشخیص اسید نوکلئیک
برنامه های کاربردی
ویرایش ژن CRISPR/Cas
تشخیص و تشخیص بر اساس سیستم CRISPR/Cas
سایر کاربردهای تشخیص همراه با فناوری های تقویت اسید نوکلئیک همدما (RPA و LAMP) و غیره
مشخصات
| وزن مولکولی | 130 کیلو دالتون |
| تمرکز | 10 میکرومولار |
| خلوص | >95% (SDS-PAGE) |
| تعریف واحد | مقدار آنزیم Cas12b مورد نیاز برای جدا کردن 1 pmol از پروب ssDNA در 1 دقیقه در 60oسی در حجم کل واکنش 20 μL، حاوی 1×بافر واکنش، به صورت 1 U تعریف می شود |
اجزاء
| اجزاء خیر | نام | 14808ES65 | 14808ES80 |
| 14808-A | هسته AapCas12b (10 μم) | 100 میکرولیتر | |
| 14808-B | 10×بافر واکنش | 1 میلی لیتر | 1 میلی لیتر |
کشتیپینگ و ذخیره سازی
این محصول باید در دمای -25 تا -15 نگهداری شودoسی به مدت 2 سال
ارقام
شکل 1. تأیید فعالیت برش سیس هسته AapCas12b
توجه: در 20 μسیستم واکنش L حاوی dsDNA هدف با یک توالی PAM، sgRNA، Cas12b و 1×بافر واکنش، مخلوط در 60 انکوبه شدoسی به مدت 30 دقیقه و سپس در 85 غیرفعال شدoسی به مدت 5 دقیقه نتایج الکتروفورز ژل آگارز نشان داد که سه دسته از AapCas12b Nuclease همگی قادر به جداسازی موثر dsDNA بودند، با کارایی برش قابل مقایسه با برند وارداتی T*.
شکل 2. نتایج تست فعالیت برش هسته ای AapCas12b
توجه: در 20 μسیستم واکنش L حاوی dsDNA هدف با یک توالی PAM، sgRNA، Cas12b، گزارش پروب فلورسنت ssDNA و 1×بافر واکنش، مخلوط در 60 انکوبه شدoسی به مدت 1 ساعت، و سیگنال فلورسانس هر 30 ثانیه جمع آوری شد. نتایج نشان داد که در حضور Target DNA، sgRNA و Cas12b با هم، کاوشگر فلورسنت Report ssDNA می‌تواند شکافته شود و در نتیجه سیگنال فلورسانس آزاد شود.
اسناد:
برگه اطلاعات ایمنی
دفترچه راهنما
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.