شرح
هیفرTM لیو آماده من کیت Multiplex One Step RT-qPCR(UDG plus) یک کیت PCR کمی چندگانه مبتنی بر RNA به عنوان الگو است. در فرآیند آزمایش، رونویسی معکوس و PCR کمی در همان لوله انجام شد که عملیات آزمایشی را ساده کرد و خطر آلودگی را کاهش داد.این طراحی منحصر به فرد بافر و آنزیم تضمین می کند که می توان از آن در تهیه و طراحی محصول سیستم های واکنش لیوفیلیزه RT-qPCR یک مرحله ای استفاده کرد..
در این کیت، اولین رشته cDNA به طور موثر توسط Hifair مقاوم در برابر حرارت سنتز شد.TM ترانس کریپتاز معکوس و به صورت کمی توسط Unicon تقویت شدTM HotStart Taq DNA Polymerase. کیت عمدتا شامل بهینه سازی شده است لبافر قابل یوفیلیزاسیون، مخلوط آنزیم ها و غیره. علاوه بر این، عواملی که می توانند به طور موثر تقویت PCR غیراختصاصی را مهار کنند و راندمان تقویت چندین واکنش qPCR را بهبود بخشند اضافه می شوند که می تواند کارایی تقویت را تضمین کند و تا واکنش تقویت چندگانه را انجام دهد.
این کیت مجهز شده است لyoprotectant که می تواند برای لیوفیلیزاسیون استفاده شود.
مشخصات
| اجزای شماره | 16645ES60 / 16645ES80 / 16645ES92 |
| اندازه | 100 T / 1000 تی / 10000 ت |
اجزاء
| نام | 16645ES60 (100T) | 16645ES80 (1000 تن) | 16645ES92 (10000 تن) | |
| 16645-الف | 4×HifairTM لیو بافر | 600 میکرولیتر | 6 میلی لیتر | 60 میلی لیتر |
| 16645-ب | هیفرTM مخلوط لیو آنزیم | 100 میکرولیتر | 1 میلی لیتر | 10 میلی لیتر |
| 16645-C | لیوپروتکتانت | 800 میکرولیتر | 8 میلی لیتر | 80 میلی لیتر |
ذخیره سازی
این محصول باید در دمای 25- ~ 15- درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری شود. باید از انجماد و ذوب مکرر خودداری شود.
دستورالعمل ها
1. ترکیب واکنش:
| اجزاء | حجم (میکرولیتر) | غلظت نهایی |
| 4× هایفرTM لیو بافر | 6 | 1× |
| هیفرTM مخلوط لیو آنزیم | 1 | - |
| لیوپروتکتانت | 8 | - |
| مخلوط پرایمر (10 میکرومولار) | 1 | |
| مخلوط پروب (10 میکرومولار) | 0.5 | 0.05-0.5 میکرومولار |
| الگوی RNA | 5 | - |
| DEPC H2O | تا 25 | - |
توجه داشته باشید：حتما قبل از استفاده خوب مخلوط کنید، از ایجاد حباب بیش از حد ناشی از لرزش شدید اجتناب کنید.
2. پروتکل دوچرخه سواری بهینه شده
(1) روش استاندارد تقویت
| مرحله واکنش | دما | زمان | چرخه | |
| 1 | رونویسی معکوس | 50 درجه سانتی گرادالف | 1 | |
| 2 | دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| 3 | واکنش تقویت | 95 درجه سانتی گراد |
| 45 سیکل |
| 60 درجه سانتی گرادب | 30 ثانیهج |
(2) برنامه تقویت سریع
|
| مرحله واکنش | دما | زمان | چرخه |
| 1 | رونویسی معکوس | 50 درجه سانتی گرادالف | 2 دقیقه | 1 |
| 2 | دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتی گراد | 2 ثانیه | 1 |
| 3 | واکنش تقویت | 95 درجه سانتی گراد |
| 45 سیکل |
| 60 درجه سانتی گرادب | 13 ثانیهج |
توجه:
الف) رونویسی معکوس: دما می تواند 42 درجه سانتیگراد یا 50 درجه سانتیگراد را انتخاب کند به مدت 10-15 دقیقه.
ب) واکنش تقویت: درجه حرارت با توجه به مقدار Tm پرایمرهای طراحی شده تنظیم می شود.
ج) دریافت سیگنال فلورسانس: لطفاً روش آزمایشی را مطابق با الزامات کتابچه راهنمای ابزار تنظیم کنید.
3. برنامه تجهیزات
تجهیزات با Rox：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
تجهیزات با Low Rox：ABI 7500، 7500 Fast، ViiA™7، QuantStudio™ 3 و 5، QuantStudio™ 6،7،12k Flex
Stratagene MX3000P™، MX3005P™، MX4000P™
تجهیزات بدون Rox：
Bio-Rad CFX96™، CFX384™، iCycler iQ™، iQ™5، MyiQ™، MiniOpticon™، Opticon®، Opticon® 2، Chromo4™
اپندورف Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; کیاگن Corbett Rotor-Gene® Q، Rotor-Gene® 3000، Rotor-Gene® 6000
علم کاربردی روشه LightCycler® 480، LightCycler® 2.0، Lightcycler® 96
ترمو علمی PikoReal Cycler; قیفاووس SmartCycler®; ایلومینا Eco qPCR
یادداشت ها
لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، PPE لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!
لطفا از مواد مصرفی RNasefree استفاده کنید برای آزمایش
این محصول برای تحقیق کنید فقط استفاده کنید!
روش لیوفیلیزاسیون
این کیت را می توان به طور مستقیم برای لیوفیلیزاسیون استفاده کرد، یا می توانید بر این اساس مواد کمکی را برای پرایمرهای مختلف بررسی کنید.روش استاندارد لیوفیلیزاسیون این معرف به شرح زیر است:
| فرآیند | دما | تنظیم زمان | مدت | وکیوم بار |
| پیش لیوفیلیزاسیون | -45 درجه سانتیگراد | 10 دقیقه | 60 دقیقه | —— |
| مرحله خشک کردن انجمادی اولیه | -45 ℃ | 10 دقیقه | 60 دقیقه | 0.01 بار |
| -40 ℃ | 10 دقیقه | 900 دقیقه | 0.01 بار | |
| -35 ℃ | 10 دقیقه | 60 دقیقه | 0.01 بار | |
| -30 ℃ | 20 دقیقه | 60 دقیقه | 0.01 بار | |
| -20 ℃ | 20 دقیقه | 60 دقیقه | 0.01 بار | |
| 0 ℃ | 20 دقیقه | 60 دقیقه | 0.01 بار | |
| تست افزایش فشار | ||||
| مرحله خشک کردن تحلیلی | 5 ℃ | 10 دقیقه | 20 دقیقه | 0.01 بار |
| 10 ℃ | 10 دقیقه | 20 دقیقه | 0.01 بار | |
| 15 ℃ | 10 دقیقه | 20 دقیقه | 0.01 بار | |
| 20 ℃ | 10 دقیقه | 20 دقیقه | 0.01 بار | |
| 25 ℃ | 10 دقیقه | 240 دقیقه | 0.01 بار | |
| تست افزایش فشار | ||||
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.