هیف NGS^TM UCF.ME دانه های انتخاب DNA بر اساس اصل SPRI (بی حرکتی معکوس فاز جامد) تهیه می شوند. و برای خالص سازی DNA و انتخاب اندازه در طول آماده سازی کتابخانه های توالی یابی نسل بعدی (NGS) قابل استفاده است. هیف NGS^TM UCF.ME دانه های انتخاب DNA با کیت های آماده سازی کتابخانه های مختلف DNA و RNA سازگار هستند. این محصول در یک مرکز فوق تمیز با سطح تمیزی بالا تولید می شود و می تواند برای مرحله خالص سازی DNA در طی فرآیندهای تشخیص پاتوژن استفاده شود.

مشخصات

اجزاء

ذخیره سازی

این محصول باید در 2~8℃ به مدت 18 ماه

حمل و نقل و ذخیره سازی

مهره ها همراه با بسته های یخ ارسال می شوند و می توان آنها را در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد به مدت یک سال نگهداری کرد.

دستورالعمل ها

• 1. آماده سازی

قبل از استفاده، دانه های انتخابی را حداقل به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق متعادل کنید.

• 2. انتخاب اندازه DNA

جریان عملیات انتخاب اندازه در شکل 1 نشان داده شده است و پروتکل به شرح زیر است.

شکل 1. نمودار جریان انتخاب اندازه DNA

2.1 دانه ها را با گرداب یا پیپت کردن هر بار قبل از استفاده به طور کامل مخلوط کنید.
2.2 دور اول مهره های انتخابی را به نمونه اضافه کنید (به جدول 1 مراجعه کنید). حداقل 10 بار با ورتکس کردن یا پیپت کردن به بالا و پایین مخلوط کنید.
2.3 در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه جوجه کشی کنید.
2.4 لوله را برای مدت کوتاهی به پایین بچرخانید و آن را روی پایه مغناطیسی قرار دهید. هنگامی که محلول شفاف شد (حدود 5 دقیقه)، مایع رویی را به یک لوله PCR جدید منتقل کنید.
2.5 دور دوم دانه های انتخابی را مطابق جدول 1 از مرحله 2.4 به نمونه اضافه کنید. حداقل 10 بار با گرداب یا پیپت کردن به بالا و پایین مخلوط کنید.
2.6 در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه جوجه کشی کنید.
2.7 لوله را برای مدت کوتاهی به پایین بچرخانید و آن را روی پایه مغناطیسی قرار دهید. وقتی محلول شفاف شد (حدود 5 دقیقه)، مایع رویی را آسپیره کرده و دور بریزید.
2.8 لوله را در پایه مغناطیسی نگه دارید و 200 میکرولیتر اتانول 80 درصد تازه آماده شده را بدون ایجاد مزاحمت در دانه ها به آن اضافه کنید و به مدت 30 ثانیه در دمای اتاق انکوبه کنید. اتانول را تنفس کرده و دور بریزید.
2.9 مرحله 2.8 را یک بار برای مجموع دو شستشو تکرار کنید.
2.10 باقیمانده اتانول را با نوک پیپت 10 میکرولیتری حذف کنید. لوله را در پایه مغناطیسی نگه دارید، مهره های انتخاب را با درب باز با هوا خشک کنید تا زمانی که ترک ها ظاهر شوند (حدود 5 دقیقه).
توجه:دانه‌های انتخابی را خشک کنید. این ممکن است منجر به بازیابی هدفDNA شود.
2.11 لوله را از پایه مغناطیسی خارج کنید. مقدار مناسبی از ddH2O (≥20 µL) را اضافه کنید و با گرداب یا پیپت کردن حداقل 10 بار به طور کامل مخلوط کنید.
2.12 در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه جوجه کشی کنید.
لوله را برای مدت کوتاهی به پایین بچرخانید و آن را روی پایه مغناطیسی قرار دهید. وقتی محلول شفاف شد (حدود 5 دقیقه)، 20 میکرولیتر از مایع رویی را به یک لوله جدید منتقل کنید.

• 3. شرایط توصیه شده برای انتخاب اندازه DNA

DNA تیموس گوساله توسط فراصوت قطعه قطعه شد تا قطعه 100-1000 جفت باز تهیه شود و دو دور انتخاب اندازه مطابق جدول 1 انجام شد. نتایج با استفاده از Bioanalyzer Agilent 2100 تجزیه و تحلیل شد (شکل 2).

جدول 1. شرایط توصیه شده برای انتخاب اندازه DNA

نکته: "×" در جدول حجم DNA نمونه را نشان می دهد. به عنوان مثال، اگر طول درج کتابخانه 250 جفت باز باشد و حجم DNA نمونه 100 میکرولیتر باشد، حجم دانه‌های مغناطیسی مورد استفاده در اولین دور مرتب‌سازی 0.80×100 μL=80 میکرولیتر است. حجم دانه های مغناطیسی مورد استفاده در دور دوم مرتب سازی 0.20× 100 میکرولیتر = 20 میکرولیتر است.

شکل 2. الکتروفروگرام تراشه DNA با حساسیت بالا Agilent 2100