کیت او مجهز به یک بافر لیز قدرتمند است که می‌تواند به سرعت نمونه‌ها (به عنوان مثال سلول‌ها، دم موش، گوش موش، انگشت موش، عضله و غیره) را برای آزادسازی DNA ژنومی لیز کند، و لیزات را می‌توان مستقیماً بدون خالص‌سازی به سیستم واکنش PCR اضافه کرد، که برای عملیات راحت است. علاوه بر این، این کیت به ورودی نمونه کم نیاز دارد، می توان از 5 میلی گرم بافت موش یا 1-5 میلی متر دم موش برای آزمایش استفاده کرد.

اجزاء

ذخیره سازی

19697-A (محلول Lysis) باید در ذخیره شود 2 ~ 8 درجه سانتیگراد برای 1 سال در صورت استفاده چند بار، لطفا در بسته بندی های جداگانه فریز کنید تا از آلودگی متقاطع جلوگیری شود. 19687-B (راه حل توقف) باید ذخیره شود -25~-16℃ برای 1 سال

دستورالعمل ها

انتشار DNA ژنومی موش

1. 5-10 میلی گرم از بافت حیوانی یا دم موش 1-5 میلی متری را در یک لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری گیره دهید.
2. 90 میکرولیتر بافر ML را به لوله سانتریفیوژ فوق اضافه کنید، به آرامی ورتکس کنید تا نمونه با لیز کاملاً نفوذ کند و برای مدت کوتاهی سانتریفیوژ کنید.
3. انکوباتور در دمای 95 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه در انکوباتور ترموستاتیک **.
4. 10 میکرولیتر بافر MT اضافه کنید، برای مخلوط کردن تلنگر بزنید و لیز را خاتمه دهید.
5. مرحله اختیاری: سانتریفیوژ در 12000 دور در دقیقه به مدت 2 دقیقه.
6. مایع رویی را به یک لوله سانتریفیوژ جدید منتقل کنید و در دمای 4 درجه سانتیگراد یا 20- درجه سانتیگراد نگهداری کنید یا مایع رویی را مستقیماً برای تقویت بعدی PCR بگیرید.

* بافت باید تا آنجا که ممکن است بریده شود تا واکنش لیز به آرامی انجام شود.

** انکوباسیون در دمای 95 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه به طور کلی برای اکثر نیازهای PCR کافی است. اگر مقدار بیشتری از DNA مورد نیاز باشد یا لیز نمونه مشکل باشد، زمان را می توان تا 30 دقیقه افزایش داد. بلوک بافت نیازی به لیز شدن کامل ندارد و باقیمانده را می توان در مرحله سانتریفیوژ بعدی حذف کرد.

آزادسازی DNA ژنومی سلولی

پس از کشت سلول های ترانسفکت شده در یک صفحه 48 چاهی به مدت 3 روز و رسیدن به تراکم سلولی حدود 70000 سلول در چاه، محیط را تا حد امکان کاملاً جدا کنید. سپس 90 لیتر بافر ML را مستقیماً به هر چاه اضافه کنید و هر چاهک را پیپت کنید. همه را به صفحه 96 چاهی PCR منتقل کنید. پس از درمان با دستگاه PCR در دمای 95 درجه سانتیگراد به مدت 5 تا 15 دقیقه و خنک شدن، 10 لیتر MT بافر اضافه کنید و به طور یکنواخت و کامل باد کنید. با استفاده از آنزیم با وفاداری بالا (Cat# 10164) یا آنزیم Taq، 0.5-2ul لیزات سلولی را به هر 50 ul سیستم واکنش PCR اضافه کنید و PCR را انجام دهید.

شکل 1. PCR مستقیم با لیز سلولی تحت درمان با 19697.

یادداشت ها

1. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
2. لطفاً برای ایمنی خود با عینک، روپوش آزمایشگاهی و دستکش یکبار مصرف کار کنید.
3. برای جلوگیری از آلودگی متقاطع بین نمونه ها، لازم است بعد از هر نمونه برداری، لبه دستگاه نمونه برداری یا قسمتی که در تماس مستقیم با نمونه است در محلول هیپوکلریت سدیم 2 درصد فرو برده، چندین بار شستشو داده و سپس قبل از استفاده مجدد، مایع باقیمانده را با دستمال کاغذی تمیز خشک کنید.برای راحتی آزمایش، می توان چندین دستگاه نمونه برداری را پس از استفاده به طور یکنواخت آماده و تمیز کرد تا اطمینان حاصل شود که هر نمونه با یک دستگاه نمونه برداری بدون آلودگی نمونه برداری می شود.
4. توصیه می شود از بافت های حیوانی تازه گرفته شده استفاده کنید. در مورد بافت‌های منجمد طولانی‌مدت، تا حد امکان از انجماد و ذوب مکرر خودداری شود، در غیر این صورت منجر به تخریب قالب و تأثیر بر راندمان PCR می‌شود.

اسناد:

دفترچه راهنما