دانه های Concanavalin A (ConA) میکروکره های پلیمری سوپرپارامغناطیس هستند که به طور کووالانسی با Concanavalin A جفت شده اند. (یک لکتین گیاهی مانوز/گلوکز متصل شونده جدا شده از بذر گیاهان غلات) روی سطح آنها. این مهره ها دارای چندین ویژگی های قابل توجه، از جمله تک پراکندگی و واکنش مغناطیسی قوی. زمانی که Ca²⁺ و Mg²⁺ یون‌ها وجود دارند، دانه‌های مغناطیسی ConA می‌توانند به طور موثر و سریع بیومولکول‌های مختلف مانند پلی‌ساکاریدها، گلیکوپروتئین‌ها و گلیکولیپیدها را با استفاده از میل ترکیبی بین ConA گلوبولین A و گروه‌های α-D-مانوز و α-D-گلوکز انتهایی جدا و خالص کنند.

دانه های مغناطیسی ConA روشی مناسب برای جداسازی یا تثبیت سلول ها ارائه می دهند و از حداقل اتلاف سلول در مراحل بعدی شستشو اطمینان می دهند. علاوه بر این، می توان از آنها برای جمع آوری و تثبیت هسته ها استفاده کرد. علاوه بر این، این دانه‌ها در تکنیک‌های نوآورانه مانند CUT & Run و CUT & Tag که رویکردهای انقلابی مورد استفاده در آزمایش‌های ChiP-seq هستند، کاربرد دارند.

به طور خلاصه، دانه‌های مغناطیسی ConA ابزار قدرتمندی برای خالص‌سازی کارآمد مولکول‌های زیستی، جداسازی و تثبیت سلولی راحت، جمع‌آوری هسته‌ها و کاربرد در تکنیک‌های آزمایشی پیشرفته هستند.

مشخصات

خصوصیات

شکل ها و جداول

جدول 1. دانه های Yeasen ConA نرخ جذب بالایی دارند. مقدار Concanavalin A (ConA) مورد استفاده متناسب با میکروسفرها برای اطمینان از حداکثر ظرفیت اتصال و در عین حال جلوگیری از تجمع بیش از حد دانه‌های مغناطیسی پس از اتصال سلولی در آزمایش‌های CUT&Tag تأیید شده است. به عنوان مثال، استفاده از 10 میکرولیتر از دانه های پوشش داده شده با ConA می تواند مقداری از سلول ها را معادل سطوح E7 با راندمان اتصال بیش از 98 درصد متصل کند.

شکل 1. دانه های Yeasen ConA پراکندگی بالایی را نشان می دهند. در فرآیند برچسب زدن مهره، یک درزگیر غیر بیولوژیکی برای اطمینان از بسته شدن کارآمد بدون تأثیر تغییرات دسته به دسته انتخاب شد. این امر مهر و موم عالی مهره‌های مغناطیسی را تضمین می‌کند، و تک پراکندگی بالای آن‌ها را در طول ذخیره‌سازی دانه‌های پوشش‌داده‌شده با ConA حفظ می‌کند، که برای اتصال کارآمد به مولکول‌های کربوهیدرات در آزمایش‌های بعدی مفید است.

شکل 2. توزیع سیگنال کروماتین CUT&Tag با استفاده از Yeasen Con A Beads.

ذخیره سازی

این محصول باید در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد به مدت 2 سال نگهداری شود.

دستورالعمل ها

عملیات زیر خالص سازی گلیکوپروتئین ها یا جداسازی سلول ها را به عنوان مثال انجام می دهد. CUT&Tag آزمایشات برای پروتکل Yeasen Cat# 12598ES را ببینید.

1. آماده سازی بافرها

1) توسط مشتری عرضه می شود

1. مواد مورد نیاز شامل: پایه مغناطیسی، لوله های اپندورف، لوله های PCR، پایه های مغناطیسی، ترموسایکلرها و غیره
2. را متعادل کنید مهره ها در دمای اتاق حداقل به مدت 30 دقیقه. دانه ها را با چرخاندن یا تکان دادن بطری مجدداً به طور کامل معلق کنید.

1. جابجایی نمونه ( نمونه برداری از سلول های پستانداران )

1. سلول های پستانداران را آماده کنید (1.0×10 ⁴~ 1.0×10 ⁵ سلول ها)، سانتریفیوژ (4℃، 600×g، 3 تا 5 دقیقه) و با دقت دور انداختن مایع رویی
2. 140 میکرولیتر بافر اتصال اضافه کنید، خوب مخلوط کنید و سلول ها را مجدداً معلق کنید، سانتریفیوژ کنید و جمع آوری کنید (4℃، 600×g، 3 تا 5 دقیقه)، با دقت دور انداختن مایع رویی
3. 90 میکرولیتر بافر اتصال اضافه کنید، خوب مخلوط کنید و سلول ها را دوباره معلق کنید.
   احتیاط: سلول‌های پستانداران کاملاً چسبنده را می‌توان با هضم جزئی با استفاده از آنزیمی مانند تریپسین به دست آورد. برای بافت‌های جانوری، سلول‌های گیاهی یا سلول‌های قارچی، به‌دست آوردن سلول‌های پراکنده یا پروتوپلاست‌ها اغلب نیاز به درمان‌های ویژه‌ای دارد که متناسب با ویژگی‌های خاص آنها باشد.

1. دانه های ConA را آماده کنید

1. مهره های ConA را به آرامی با پیپت بریزید تا کاملاً معلق شوند، در عدد 10 قرار دهید میکرولیتر از سوسپانسیون دانه ها در یک لوله سانتریفیوژ 200 میکرولیتری جدید.
2. 40 میکرولیتر بافر اتصال اضافه کنید، خوب مخلوط کنید و به مدت 1 دقیقه روی پایه مغناطیسی قرار دهید و پس از جذب دانه های مغناطیسی به دیواره جانبی لوله سانتریفیوژ، مایع رویی را دور بریزید.
3. 10 میکرولیتر بافر اتصال اضافه کنید، خوب مخلوط کنید و دانه های ConA را مجدداً معلق کنید.

1. صحافی نمونه

1. نمونه سلولی آماده شده را به دانه های از پیش تیمار شده اضافه کنید، به آرامی دانه های معلق را پیپت کنید، سپس در یک میکسر معکوس (دمای اتاق 30 دقیقه یا 4 درجه در طول شب) انکوبه کنید.
2. به مدت 1 دقیقه روی پایه مغناطیسی بایستید، صبر کنید تا دانه های مغناطیسی به دیواره جانبی لوله سانتریفیوژ جذب شوند، مایع رویی را با احتیاط دور بریزید.
3. اضافه کنید 500 میکرولیتر بافر شستشو به کمپلکس دانه های سلول-ConA و به آرامی پیپت کنید سپس مهره ها را دوباره معلق کنید به مدت 1 دقیقه روی پایه مغناطیسی بایستید، صبر کنید تا دانه های مغناطیسی به دیواره جانبی لوله سانتریفیوژ جذب شوند، مایع رویی را با احتیاط دور بریزید.
4. مرحله 3) را سه یا چهار بار دیگر تکرار کنید.

1. شستشو

1. برای گلیکوپروتئین ها، 50 تا 250 میکرولیتر بافر Elution اضافه کنید، دانه های معلق را به آرامی پیپت کنید، سپس در یک مخلوط کن معکوس (در دمای اتاق به مدت 10 تا 30 دقیقه) انکوبه کنید. پس از مخلوط معکوس، به مدت 1 دقیقه روی پایه مغناطیسی قرار دهید، مایع رویی را در یک لوله 1.5 میلی لیتری جدید جمع آوری کنید تا مرحله SDS-PAGE یا وسترن بلات انجام شود.
2. برای سلول، نیازی به شستشو نیست.

یادداشت ها

1. را متعادل کنید ConA دانه ها در دمای اتاق قبل از استفاده
2. از یخ زدن خودداری کنید، در غیر این صورت باعث تخریب مواد مهره یا از دست دادن فعالیت می شود.
3. ConA برای فعال بودن نیاز به حضور یون‌های Ca2+ و Mn2+ دارد، بنابراین باید از معرف‌های حاوی EDTA یا سایر شل‌کننده‌های یون فلزی در طول آزمایش اجتناب شود.
4. هنگامی که با سلول ها انکوبه می شوند، دانه های ConA ممکن است جمع شوند، که طبیعی است و بر استفاده طبیعی از دانه های مغناطیسی تأثیری ندارد.
5. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
6. لطفا برای ایمنی خود با کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف کار کنید.

دستی