شرح
ژل پلی آکریل آمید (ژل PAGE) اغلب برای الکتروفورز پروتئین برای درک جداسازی پروتئین استفاده می شود. این نوع ژل به طور کلی از ژل غلیظ و ژل جداسازی تشکیل شده است. اولی نقش تغلیظ نمونه های پروتئین را ایفا می کند، در حالی که دومی پروتئین های با اندازه های مختلف را با توجه به غلظت مونومر آکریل آمید و N,N-متیلن بی ساکریل آمید (متیلن آکریل آمید) عامل اتصال عرضی مورد استفاده در ژل جدا می کند.
این کیت انواع معرف های مورد نیاز برای آماده سازی سریع ژل PAGE را فراهم می کند. کاربران برای تهیه ژل فقط باید تجهیزات آماده سازی ژل خود را تهیه کنند که فرآیند تهیه ژل را بسیار ساده می کند. ژل تهیه شده توسط این کیت فقط برای دناتوره کردن الکتروفورز ژل PAGE قابل استفاده است. این مشخصات می تواند حدود 125 قطعه مینی ژل (محاسبه شده توسط ژل ضخامت 0.75 میلی متر) تهیه کند.
مشخصات
| غلظت ژل غلیظ SDS-PAGE | 4.2٪ |
| غلظت ژل جداسازی SDS-PAGE | 8% |
| محدوده جداسازی (kDa) | 30-200 |
| سیستم ژل | تریس گلیسین |
| غلظت ژل غلیظ SDS-PAGE | 4.2٪ |
اجزاء
| اجزای شماره | نام | 20324ES62 (125 مینی ژل) |
| 20324-الف | 8% - بافر ژل جداسازی | 250 میلی لیتر |
| 20324-B | 8٪ - محلول ژل جداسازی | 250 میلی لیتر |
| 20324-C | 8% - بافر ژل غلیظ رنگی | 80 میلی لیتر |
| 20324-D | 8٪ - محلول ژل غلیظ | 80 میلی لیتر |
| 20324-E | لیوان ژل را آماده کنید | 3 |
حمل و نقل و ذخیره سازی
این محصول با بسته یخ ارسال می شود و در 2 عدد قابل نگهداری است℃~ 8℃ به مدت 1 سال
دستورالعمل: توصیه می شود تعداد زیادی از قطعات ژل را در یک زمان پیکربندی نکنید تا از افزودن خیلی دیر محلول بالایی جلوگیری شود (حداکثر 2-3 قطعه توصیه می شود)
1. غلظت ژل مناسب را با توجه به وزن مولکولی پروتئین مورد نظر انتخاب کنید (به جدول 1 مراجعه کنید)
2. فرآیند ساخت ژل (به عنوان مثال یک قطعه مینی ژل 0.75/1.0/1.5 میلی متری را در نظر بگیرید)
2.1 حجم مساوی از بافر ژل جداسازی و محلول ژل جداسازی را بردارید و آنها را مخلوط کنید، یعنی به ترتیب 2.0/2.7/4.0 میلی لیتر از دو محلول را بگیرید.
2.2 0.1 گرم پرسولفات آمونیوم را وزن کرده و در 1 میلی لیتر آب دیونیزه حل کنید. مشتری باید خود پرسولفات آمونیوم را خریداری کند.
2.3 35/45/70 میکرولیتر APS را به محلول مخلوط در مرحله 1 اضافه کنید (میزان APS مصرفی را می توان به نصف کاهش داد اگر انجماد خیلی سریع باشد) و کاملاً مخلوط کنید.
2.4 محلول مرحله 2 را به صفحه شیشه ای ژل سازی تزریق کنید. توجه داشته باشید که ژل غلیظ باید ظرف 2 دقیقه پس از افزودن ژل جداسازی به داخل قالب ژل تزریق شود و ریختن ژل غلیظ باید به کندی انجام شود تا از مخلوط شدن ژل غلیظ و ژل جداسازی جلوگیری شود. اگر پیکربندی برای فرد مشکل باشد، می توان آن را برای پیکربندی ژل غلیظ پس از آب بندی با اتانول نیز تنظیم کرد.
2.5 تهیه ژل غلیظ: حجم مساوی از بافر ژل غلیظ و محلول ژل غلیظ را بگیرید، یعنی به ترتیب 0.5/0.75/1.0 میلی لیتر از دو محلول را بگیرید و سپس 10/13/18 میکرولیتر APS اضافه کنید و خوب مخلوط کنید.
2.6 آن را به صفحه شیشه ای ژل ساز تزریق کنید و دندانه های شانه را وارد کنید (برای وارد کردن دندانه های شانه به آرامی از نیروی بیش از حد استفاده نکنید).
2.7 پس از اینکه ژل غلیظ به مدت 15 دقیقه جامد شد، می توان دندان های شانه را جدا کرد و برای الکتروفورز استفاده کرد. توجه: لطفا سعی کنید از بافر الکتروفورز تازه تهیه شده استفاده کنید.
یادداشت ها
1. پیشنهاد می شود ولتاژ در حین الکتروفورز بین 100-120 ولت باشد در صورت نیاز به افزایش سرعت الکتروفورز می توان آن را تا 150 ولت افزایش داد.
2. قبل از پر کردن ژل، مطمئن شوید که محلول ژل را تا دمای اتاق متعادل کنید (مثلاً آن را برای چند دقیقه نگه دارید) تا به طور موثر از تشکیل حباب در ژل جلوگیری کنید.
3. مشتری باید خود پرسولفات آمونیوم را خریداری کند. توصیه می کنیم از محصول با Cat#A3678 از سیگما استفاده کنید.
4. مقدار محلول پرسولفات آمونیوم فقط برای مرجع است و مقدار واقعی را می توان با توجه به عادات و تجربه تجربی شخصی کم یا زیاد کرد. افزودن پرسولفات آمونیوم بیشتر می تواند سرعت ژل را تسریع کند و بالعکس. میزان انعقاد ژل PAGE ارتباط نزدیکی با دما و مقدار پرسولفات آمونیوم دارد.
5. مقدار مناسبی از جایگزین های TEMED به این محصول اضافه شده است. اگر نیاز به تسریع بیشتر در سرعت ژل باشد، می توان مقدار مناسبی از TEMED را در صورت نیاز قبل از توزیع اضافه کرد.
6. بین انجماد ژل و دما همبستگی مثبت و معناداری وجود دارد. در شرایط یکسان، هر چه دما بالاتر باشد، سرعت انجماد سریعتر است.
7.ژل غلیظ رنگی ممکن است در طول ذخیره سازی مقدار کمی بارش ایجاد کند که یک پدیده طبیعی است. لطفا با خیال راحت از آن استفاده کنید.
8. APS در -20 ذخیره شد℃. برای راحتی، APS که باز شده و در حال استفاده است را می توان در 4 ذخیره کرد℃.
9. لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، تجهیزات حفاظتی لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!
10. فقط برای استفاده تحقیقاتی!
جدول 1 محدوده جداسازی مرجع ژل SDS-PAGE با غلظت های مختلف
| غلظت ژل SDS-PAGE | محدوده جداسازی (kDa) |
| 8% | 30-200 |
| 10% | 20-80 |
| 12.5٪ | 15-60 |
| 15% | 10-45 |
اسناد:
برگه اطلاعات ایمنی
دفترچه راهنما
استنادها و مراجع:
[1] چن ایکس، ژانگ دی، سو ان، و همکاران. تجسم دینامیک RNA در سلول های زنده با RNA های فلورسنت روشن و پایدار. Nat Biotechnol. 2019؛ 37 (11): 1287-1293. doi:10.1038/s41587-019-0249-1(IF:31.864)
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.