شرح
معرف تشخیص Super ECL برای شناسایی آنتی بادی ها و آنتی ژن های مرتبط به طور مستقیم یا غیر مستقیم با پراکسیداز ترب کوهی (HRP) طراحی شده است. اصل معرف تشخیص Super ECL این است که پروتئین ها یا اسیدهای نوکلئیک پس از الکتروفورز به غشای حک شده منتقل می شوند و پروتئین های هدف روی غشاء توسط آنتی بادی اولیه و آنتی بادی ثانویه نشاندار شده با HRP متصل می شوند یا اسیدهای نوکلئیک روی غشاء به طور مستقیم یا غیرمستقیم توسط پروب های برچسب گذاری شده با HRP متصل می شوند. پس از شستشوی غشا، از محلول کار ECL تهیه شده توسط محصول برای انکوباسیون غشا در دمای اتاق به مدت چند دقیقه استفاده شد. غشای حک شده با پوشش پلاستیکی پیچیده شد و روی کاست قرار گرفتن در معرض اشعه ایکس ثابت شد. سپس فیلم اشعه ایکس در یک اتاق تاریک روی غشاء فشار داده می شود و برای چند ثانیه تا چند ساعت در معرض قرار می گیرد. پس از توسعه و تثبیت، نوارهای پروتئین یا اسید نوکلئیک را می توان به وضوح روی فیلم اشعه ایکس نشان داد. این کیت دارای یک سیستم زیرلایه درخشان منحصر به فرد است، Super ECL Detection Reagent حساس ترین معرف تشخیص ECL فلورسنت تجاری در حال حاضر است.
ویژگی ها
- حساسیت بالا و نسبت سیگنال به نویز بالا، می تواند آنتی ژن های درجه پایین را تشخیص دهد.
- به سرعت و روشن بدرخشید، نوار فیلم حک شده را می توان در زیر لامپ فلورسنت مشاهده کرد.
- مدت زمان طولانی لومینسانس، فلورسانس می تواند فیلم اشعه ایکس را برای بیش از 5 ساعت حساس کند، به ویژه برای تشخیص پروتئین یا اسید نوکلئیک مناسب است.
- نسبت رقت بالاتر آنتی بادی (1:2000 ~ 1:10000) می تواند برای صرفه جویی زیادی در آنتی بادی استفاده شود.
برنامه های کاربردی
- الایزا شیمی لومینسانس
- وسترن بلات
- Dot Blot-DNA/RNA
- ساترن بلات-DNA
- نورترن بلات-RNA
مشخصات
غلظت آنتی بادی توصیه شده | آنتی بادی اولیه (غلظت ذخیره سازی مایع 1mg/mL): 1:1000-1:10000 آنتی بادی ثانویه (غلظت ذخیره سازی مایع 1mg/mL): 1:2000-1:10000 |
مدت زمان سیگنال | < 12 ساعت |
خواص بستر | بستر شیمیایی |
نوع بستر | سوبسترای HRP (پراکسیداز ترب). |
حساسیت | آنتی ژن های درجه پایین |
اجزاء
اجزای شماره | نام | 36208ES60 (100 میلی لیتر) | 36208ES76 (500 میلی لیتر) |
36208-A | Super ECL Detection Reagent-Reagent A | 50 میلی لیتر | 250 میلی لیتر |
36208-B | معرف تشخیص Super ECL-Reagent B | 50 میلی لیتر | 250 میلی لیتر |
حمل و نقل و ذخیره سازی
محصول همراه با بسته یخ ارسال می شود و می توان آن را در دمای 2℃ ~ 8 درجه سانتیگراد به مدت یک سال دور از نور نگهداری کرد.
ارقام
شکل 1 مقایسه اثر تشخیص بین بستر Yeasen Super و بستر Pico از همان سطح مارک های دیگر
معرف Yeasen ECL اثر استفاده بهتری نسبت به سایر برندهای هم سطح محصولات دارد
[1] وانگ زی، لو زی، لین اس، و همکاران. سلولهای B بیانکننده لوسین-tRNA-سنتاز-2 به فرار ایمنی سرطان کولورکتال کمک میکنند. مصونیت. 2022؛ 55 (6): 1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] یائو جی، وو دی، ژانگ سی، و همکاران. ماکروفاژ IRX3 باعث چاقی ناشی از رژیم غذایی و التهاب متابولیک می شود. نات ایمونول. 2021؛ 22 (10): 1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y(IF:25.606)
[3] Zeng KW، Wang JK، Wang LC، و همکاران. مولکول کوچک از طریق هدف قرار دادن CK2 بدون تأثیر بر فعالیت کیناز معمولی، همجوشی میتوکندری را برای محافظت عصبی القا می کند [تصحیح منتشر شده در Signal Transduct Target Ther ظاهر می شود. 2021 مارس 12؛ 6 (1): 120]. هدف انتقال سیگنال در آنجا. 2021؛ 6 (1): 71. منتشر شده در 19 فوریه 2021. doi:10.1038/s41392-020-00447-6 (IF:18.187)
[4] Xiang L، Niu K، Peng Y، و همکاران. ساختار DNA G-quadruplex در تنظیم متابولیسم لیپید از طریق پروتئین اتصال دهنده acyl-CoA شرکت می کند [منتشر شده آنلاین قبل از چاپ، 24 ژوئن 2022]. Nucleic Acids Res. 2022؛ 50 (12): 6953-6967. doi:10.1093/nar/gkac527(IF:16.971)
[5] Wang W، Li K، Yang Z، Hou Q، Zhao WW، Sun Q. RNase H1C با پروتئین های اتصال دهنده ssDNA WHY1/3 و RecA1 recombinase برای انجام ترمیم آسیب DNA در کلروپلاست های Arabidopsis همکاری می کند. Nucleic Acids Res. 2021؛ 49 (12): 6771-6787. doi:10.1093/nar/gkab479(IF:16.971)
[6] Li T، Chen X، Qian Y، و همکاران. یک دستگاه اپتوژنتیک مبتنی بر BRET مصنوعی برای بیان ترانس ژن ضربانی که هموستاز گلوکز را در موشها ممکن میسازد. Nat Commun. 2021؛ 12 (1): 615. منتشر شده در 27 ژانویه 2021. doi:10.1038/s41467-021-20913-1(IF:14.919)
[7] Yuan H، Zhao L، Yuan Y، و همکاران. HBx WDR77 را سرکوب می کند تا تکثیر HBV را با تخریب WDR77 با واسطه DDB1 در کبد تقویت کند. ترانوستیک ها 2021؛ 11 (17): 8362-8378. منتشر شده در 25 ژوئیه 2021. doi:10.7150/thno.57531(IF:11.556)
[8] Ye G، Wen Z، Wen F، و همکاران. کرایوژل Ti<sub>2</sub>C رسانای الهام گرفته از صدف، بلوغ عملکردی کاردیومیوسیت ها را تقویت می کند و ترمیم انفارکتوس میوکارد را افزایش می دهد. ترانوستیک ها 2020؛ 10 (5): 2047-2066. منتشر شده در 12 ژانویه 2020. doi:10.7150/thno.38876(IF:11.556)
[9] He Y، Ye G، آهنگ C، و همکاران. غشاهای نانوفیبری رسانای الهام گرفته از صدف، انفارکتوس میوکارد را با افزایش عملکرد قلب و عروق مجدد ترمیم می کنند. ترانوستیک ها 2018؛ 8 (18): 5159-5177. منتشر شده در 6 اکتبر 2018. doi:10.7150/thno.27760(IF:11.556)
[10] Yang F، Xie HY، Yang LF، و همکاران.تثبیت MORC2 توسط استروژن و آنتی استروژن از طریق مسیر GPER1-PRKACA-CMA به تکثیر ناشی از استروژن و مقاومت غدد درون ریز سلول های سرطان پستان کمک می کند. اتوفاژی. 2020؛ 16 (6): 1061-1076. doi:10.1080/15548627.2019.1659609(IF:11.059)
[11] لی بی، هوانگ ن، وی اس، و همکاران. lncRNA TUG1 به عنوان یک ceRNA باعث افزایش واکنش پذیری راه هوایی ناشی از قرار گرفتن در معرض PM می شود. جی خطر ماتر. 2021؛ 416:125878. doi:10.1016/j.jhazmat.2021.125878(IF:10.588)
[12] وانگ زی، لیو سی، ژو دی، و همکاران. گرهگشایی اثرات همزمان نانوتوپوگرافی جهتیافته و ضد انعقاد پایدار در یک انتیما بیومیمتیک بر بازسازی عروق جدید. بیومواد. 2020؛ 231:119654. doi:10.1016/j.biomaterials.2019.119654(IF:10.273)
[13] Zou Y، Wang A، Huang L، و همکاران. روشن کننده متابولیسم NAD<sup>+</sup> در سلول های زنده و داخل Vivo با استفاده از سنسور فلورسنت کدگذاری شده ژنتیکی. Dev Cell. 2020؛ 53 (2): 240-252.e7. doi:10.1016/j.devcel.2020.02.017(IF:10.092)
[14] Lin S، Wen Z، Li S، و همکاران. LncRNA Neat1 پاسخ التهابی ماکروفاژ را ارتقا می دهد و به عنوان یک هدف درمانی در استئولیز ناشی از ذرات تیتانیوم عمل می کند. Acta Biomater. 2022؛ 142:345-360. doi:10.1016/j.actbio.2022.02.007(IF:8.947)
[15] Zhou Z، Zhang Q، Zhang M، و همکاران. بردارهای اتصال متقابل فعال شده و باربرگردان فعال شده با ATP برای تحویل siRNA و درمان سرطان. ترانوستیک ها 2018؛ 8 (17): 4604-4619. منتشر شده در 9 سپتامبر 2018. doi:10.7150/thno.26889(IF:8.537)
[16] Zhang YL، Deng L، Liao L، و همکاران. زیرواحد کمپلکسهای کروماتین BAP18 از طریق فعالسازی رونویسی انکوژن S100A9 باعث پیشرفت سهگانه منفی سرطان سینه میشود. سلول مرگ دیس. 2022؛ 13 (4): 408. منتشر شده در 28 آوریل 2022. doi:10.1038/s41419-022-04785-x(IF:8.469)
[17] Li F، Huang T، Tang Y، و همکاران. Utidelone رشد سلول های سرطانی کولورکتال را از طریق مسیر سیگنالینگ ROS/JNK مهار می کند. سلول مرگ دیس. 2021؛ 12 (4): 338. منتشر شده در 1 آوریل 2021. doi:10.1038/s41419-021-03619-6(IF:8.469)
[18] Dou R، Qian J، Wu W، و همکاران. سرکوب استروئید 5α ردوکتاز نوع I باعث ارتقای آپوپتوز سلولی و اتوفاژی از طریق مسیر PI3K/Akt/mTOR در مولتیپل میلوما می شود. سلول مرگ دیس. 2021؛ 12 (2): 206. منتشر شده در 24 فوریه 2021. doi:10.1038/s41419-021-03510-4(IF:8.469)
[19] Zhang J، Wang Y، Zheng Z، و همکاران. فشار اسمزی ناشی از یون و پروتئین نانوذرات درون سلولی، تورم آستروسیت ها و ادم مغز را در پاسخ به محرک های گلوتامات اصلاح می کند. ردوکس بیول. 2019؛ 21:101112. doi:10.1016/j.redox.2019.101112(IF:7.793)
[20] Chen R، Sun Y، Cui X، و همکاران. اتوفاژی باعث افزایش فیبروز آئورت از طریق مسیر سیگنالینگ IL-6/Jak1 در آرتریت تاکایاسو می شود. J خود ایمنی. 2019؛ 99:39-47. doi:10.1016/j.jaut.2019.01.010(IF:7.543)
[21] Cen Y، Zou X، Zhong Q، و همکاران. پاسخ Nrf2 با واسطه TIAR به استرس اکسیداتیو از طریق ناحیه ترجمه نشده 3 غیرکد کننده Nrf2 در Spodoptera litura واسطه می شود. رادیک آزاد بیول مد. 2022؛ 184: 17-29. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.03.016(IF:7.376)
[22] Hu X، Wang X، Xu Y، و همکاران. رسانایی الکتریکی روی نانوالیاف هم تراز، تمایز سلولهای بنیادی مزانشیمی به سلولهای شوان و بازسازی عصب محیطی آسیبدیده را تسهیل میکند. Adv Healthc Mater. 2020؛ 9 (11): e1901570. doi:10.1002/adhm.201901570(IF:7.367)
[23] Chenxu G، Minxuan X، Yuting Q، و همکاران. از دست دادن iRhom2 با سرکوب التهاب و استرس اکسیداتیو، آسیب کلیوی را در موشهای درازمدت در معرض PM2.5 کاهش میدهد. ردوکس بیول. 2018؛ 19:147-157. doi:10.1016/j.redox.2018.08.009(IF:7.126)
[24] یوان جی، جیانگ ایکس، لان اچ، و همکاران. تجزیه و تحلیل Multi-Omics ارزش درمانی MAL2 بر اساس داده کاوی در سرطان های انسانی. Front Cell Dev Biol. 2022; 9:736649.منتشر شده در 17 ژانویه 2022. doi:10.3389/fcell.2021.736649(IF:6.684)
[25] Xie X، Li D، Cui Y، Xie T، Cai J، Yao Y. دکورین از سلول های اپیتلیوم رنگدانه شبکیه در برابر استرس اکسیداتیو و آپوپتوز از طریق اتوفاژی تنظیم شده با AMPK-mTOR محافظت می کند. Oxid Med Cell Longev. 2022; 2022: 3955748. منتشر شده در 29 مارس 2022. doi:10.1155/2022/3955748(IF:6.543)
[26] ژائو زی، لی تی، دونگ ایکس، و همکاران. پروفایل متابولیک غیرهدفمند دمیلیناسیون ناشی از کوپریزون در بدن موش با استفاده از UPLC-Orbitrap/MS نشانگرهای زیستی متابولیک بالقوه اختلالات دمیلیناسیون CNS را نشان می دهد. Oxid Med Cell Longev. 2021; 2021: 7093844. منتشر شده در 14 سپتامبر 2021. doi:10.1155/2021/7093844(IF:6.543)
[27] Sun J، Li JY، Zhang LQ، و همکاران. فعال سازی Nrf2 درد نوروپاتیک ناشی از آسیب انقباض مزمن را از طریق القای بیوژنز میتوکندری با واسطه PGC-1α در طناب نخاعی کاهش می دهد. Oxid Med Cell Longev. 2021; 2021: 9577874. منتشر شده در 21 اکتبر 2021. doi:10.1155/2021/9577874(IF:6.543)
[28] Sun J، Li JY، Zhang LQ، و همکاران. فعال سازی Nrf2 درد نوروپاتیک ناشی از آسیب انقباض مزمن را از طریق القای بیوژنز میتوکندری با واسطه PGC-1α در طناب نخاعی کاهش می دهد. Oxid Med Cell Longev. 2021; 2021: 9577874. منتشر شده در 21 اکتبر 2021. doi:10.1155/2021/9577874(IF:6.543)
[29] Chen N، Ge MM، Li DY، و همکاران. آگونیست گیرنده β2 آدرنرژیک آلوداینیای مکانیکی را در درد نوروپاتیک ناشی از پاکلیتاکسل از طریق القای بیوژنز میتوکندری بهبود می بخشد. Biomed Pharmacother. 2021؛ 144:112331. doi:10.1016/j.biopha.2021.112331(IF:6.530)
[30] ژانگ سی، ژائو سی، چن ایکس، و همکاران. القای پیروپتوز ASC به واسطههای وابسته به گادرمین D یا کاسپاز 1/11 و IFNβ از ماکروفاژهای پیروپتوتیک نیاز دارد. سلول مرگ دیس. 2020؛ 11 (6): 470. منتشر شده در 18 ژوئن 2020. doi:10.1038/s41419-020-2664-0(IF:6.304)
[31] Wang J، Jin S، Fu W، Liang Y، Yang Y، Xu X. قرار گرفتن در معرض بلوغ با بیسفنول-A بر شناخت اجتماعی و وازوپرسین آرژنین در مغز موشهای نر تأثیر میگذارد. Ecotoxicol Environ Saf. 2021؛ 226:112843. doi:10.1016/j.ecoenv.2021.112843(IF:6.291)
[32] Chen X، He H، Xiao Y، و همکاران. CXCL10 تولید شده توسط سلول های سرطانی دهانه رحم با HPV مثبت، بیان اگزوزومی PDL1 توسط فیبروبلاست ها را از طریق مسیرهای CXCR3 و JAK-STAT تحریک می کند. اونکول جلو. 2021؛ 11:629350. منتشر شده در 6 آگوست 2021. doi:10.3389/fonc.2021.629350(IF:6.244)
[33] ژنگ ال، لیو کیو، لی آر، و همکاران. هدف قرار دادن MDK متاستاز ناشی از IFN-γ در سرطان با منشأهای مختلف را لغو می کند. اونکول جلو. 2022؛ 12:885656. منتشر شده در 7 ژوئن 2022. doi:10.3389/fonc.2022.885656(IF:6.244)
[34] دینگ دبلیو، فن وای، جیا دبلیو، و همکاران. FER تنظیم شده توسط miR-206 پیشرفت کارسینوم سلولی کبدی را از طریق سیگنال دهی NF-kB ترویج می کند. اونکول جلو. 2021؛ 11:683878. منتشر شده در 5 ژوئیه 2021. doi:10.3389/fonc.2021.683878(IF:6.244)
[35] Qiu J، Peng P، Xin M، و همکاران. استئولیز اطراف ایمپلنت ناشی از ذرات تیتانیوم با واسطه ZBTB20 با ترویج پاسخ های التهابی ماکروفاژها. Biomater Sci. 2020؛ 8 (11): 3147-3163. doi:10.1039/d0bm00147c(IF:6.183)
[36] Yuan HF، Zhao M، Zhao LN، و همکاران. PRMT5 بسته به دسوسینیلاسیون PRMT5 K387 با واسطه SIRT7 در تومورها، برنامه ریزی مجدد متابولیسم لیپید، رشد تومور و متاستاز را ارائه می دهد [منتشر شده آنلاین قبل از چاپ، 19 ژانویه 2022]. Acta Pharmacol Sin. 2022؛ 10.1038/s41401-021-00841-y. doi:10.1038/s41401-021-00841-y(IF:6.150)
[37] Zhao LN، Yuan HF، Wang YF، و همکاران. IFN-α رونویسی و تکثیر HBV را با ترویج de-2-hydroxyisobutyrylation هیستون H4K8 با واسطه HDAC3 بر روی مینی کروموزوم HBV cccDNA در کبد، مهار می کند. Acta Pharmacol Sin. 2022؛ 43 (6): 1484-1494. doi:10.1038/s41401-021-00765-7(IF:6.150)
[38] لی دی، دینگ جی، لیو تی ال، و همکاران.کاوشگر رادیویی دامنه اتصال گیرنده SARS-CoV-2: یک رویکرد غیر تهاجمی برای نقشه برداری آنزیم مبدل آنژیوتانسین 2 در موش [تصحیح منتشر شده در Acta Pharmacol Sin ظاهر می شود. 3 فوریه 2022؛:]. Acta Pharmacol Sin. 2022؛ 43 (7): 1749-1757. doi:10.1038/s41401-021-00809-y(IF:6.150)
[39] Zang CX، Wang L، Yang HY، و همکاران. HACE1 به طور منفی التهاب عصبی را از طریق همگانیسازی و تخریب Rac1 در مدلهای بیماری پارکینسون تنظیم میکند. Acta Pharmacol Sin. 2022؛ 43 (2): 285-294. doi:10.1038/s41401-021-00778-2(IF:6.150)
[40] Cai J، Chen Z، Wang J، و همکاران. circhHECTD1 با هدف قرار دادن miR-1256 و فعال کردن سیگنالینگ β-کاتنین/c-Myc، گلوتامینولیز را برای ترویج پیشرفت سرطان معده تسهیل می کند. سلول مرگ دیس. 2019؛ 10 (8): 576. منتشر شده در 2 اوت 2019. doi:10.1038/s41419-019-1814-8(IF:5.959)
[41] عثمان M، Li Y، Ke Y، و همکاران. کمبود Trappc9 انعطاف پذیری سلول های بنیادی را مختل می کند. Int J Mol Sci. 2022؛ 23 (9): 4900. منتشر شده در 28 آوریل 2022. doi:10.3390/ijms23094900(IF:5.924)
[42] Li J، Yuan J، Wang H، Zhang H، Zhang H. Arabidopsis COPPER TRANSPORTER 1 به روشی وابسته به پروتئازوم دچار تخریب می شود [تصحیح منتشر شده در J Exp Bot ظاهر می شود. 2021 اکتبر 26; 72 (20): 7337]. J Exp Bot. 2020؛ 71 (19): 6174-6186. doi:10.1093/jxb/eraa352(IF:5.908)
[43] Zhang X، Huo Z، Luan H، و همکاران. Scutellarin با افزایش اتوفاژی و سرکوب مسیر IRE1α/XBP1، تجمع چربی کبد را بهبود می بخشد. Phytother Res. 2022؛ 36 (1): 433-447. doi:10.1002/ptr.7344(IF:5.882)
[44] Pan Q، Li Z، Ju X، و همکاران. اشرشیاکلی کنترل های خود را بر بیان ژن وابسته به کربن به قوانین جهانی و خاص تقسیم می کند. میکروب بیوتکنول. 2021؛ 14 (3): 1084-1106. doi:10.1111/1751-7915.13776(IF:5.813)
[45] ژو سی، وانگ زی، کای جی، و همکاران. سیگنال دهی VDR از طریق آنزیم NAT2 از پیشرفت سرطان کولورکتال جلوگیری می کند. فارماکول جلو. 2021؛ 12:727704. منتشر شده در 16 نوامبر 2021. doi:10.3389/fphar.2021.727704(IF:5.811)
[46] جیانگ جی، جو جی، لو ال، و همکاران. کلسی تونین ماهی قزل آلا با فعال کردن گیرنده های آمیلین اثر ضد افسردگی دارد. فارماکول جلو. 2022؛ 13:826055. منتشر شده در 14 فوریه 2022. doi:10.3389/fphar.2022.826055(IF:5.811)
[47] Ma M، Fan AY، Liu Z، و همکاران. Baohuoside I از استئوکلاستوژنز جلوگیری می کند و در برابر از دست دادن استخوان ناشی از اواریکتومی محافظت می کند. فارماکول جلو. 2022؛ 13:874952. منتشر شده در 27 آوریل 2022. doi:10.3389/fphar.2022.874952(IF:5.811)
[48] Guo J، Zhu P، Ye Z، و همکاران. YRDC مقاومت لنواتینیب را در سلول های سرطان کبد از طریق تعدیل ترجمه KRAS واسطه می کند. فارماکول جلو. 2021؛ 12:744578. منتشر شده در 1 اکتبر 2021. doi:10.3389/fphar.2021.744578(IF:5.811)
[49] Zhou Z، Zhang M، Liu Y، و همکاران. پلی کاتیون های متقاطع کووالانسی برگشت پذیر با پایداری پیشرفته و رفتار پاسخگو به ATP برای بهبود تحویل siRNA. بیوماکرومولکول ها 2018؛ 19 (9): 3776-3787. doi:10.1021/acs.biomac.8b00922(IF:5.738)
[50] وانگ سی، ژانگ جی، آهنگ اس، و همکاران. تصویربرداری از کانون های صرع در مدل های موش از طریق استراتژی هدف گیری پروتئین-1 مرتبط با گیرنده لیپوپروتئین با چگالی کم. EBioMedicine. 2021؛ 63:103156. doi:10.1016/j.ebiom.2020.103156(IF:5.736)
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامههای کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.