کیت بستر شیمی‌تابنده پیشرفته ECL برای شناسایی آنتی‌بادی‌ها و آنتی‌ژن‌های مرتبط به‌طور مستقیم یا غیرمستقیم با پراکسیداز ترب کوهی (HRP) طراحی شده است. اصل کیت بستر شیمی‌تابنده پیشرفته ECL این است که پروتئین‌ها یا اسیدهای نوکلئیک پس از الکتروفورز به غشای حک شده منتقل می‌شوند و پروتئین‌های هدف روی غشاء توسط آنتی‌بادی اولیه و آنتی‌بادی ثانویه برچسب‌گذاری شده با HRP متصل می‌شوند، یا اسیدهای نوکلئیک روی غشا به طور مستقیم یا غیرمستقیم با برچسب‌های HRP متصل می‌شوند. پس از شستشوی غشا، از محلول کار ECL تهیه شده توسط محصول برای انکوباسیون غشا در دمای اتاق به مدت چند دقیقه استفاده شد. غشای حک شده با پوشش پلاستیکی پیچیده شد و روی کاست قرار گرفتن در معرض اشعه ایکس ثابت شد. سپس فیلم اشعه ایکس در یک اتاق تاریک روی غشاء فشار داده می شود و برای چند ثانیه تا چند ساعت در معرض قرار می گیرد. پس از توسعه و تثبیت، نوارهای پروتئین یا اسید نوکلئیک را می توان به وضوح روی فیلم اشعه ایکس نشان داد.

این کیت دارای یک سیستم زیرلایه درخشان منحصر به فرد است، کاهش پس‌زمینه نوردهی و در عین حال معرفی یک اکسیدان جدید، پایداری کیت را تا حد زیادی بهبود می‌بخشد و به آن اجازه می‌دهد تا یک سال در دمای اتاق پایدار بماند. علاوه بر اشعه ایکس، اسکن CCD فلورسنت نیز می تواند به طور مستقیم برای تشخیص WB و سیستم تشخیص ایمنی شیمیایی لومینسانس استفاده شود.

ویژگی ها

حساسیت بالا و نسبت سیگنال به نویز بالا، می تواند آنتی ژن های درجه متوسط ​​را تشخیص دهد.

به سرعت و روشن بدرخشید، نوار فیلم حک شده را می توان در زیر لامپ فلورسنت مشاهده کرد.

مخصوصاً برای تشخیص فراوانی هدف، نمونه‌های پروتئینی معمولی بالاتر است.

اکسیدان جدید، پایدار در دمای اتاق تا یک سال.

برنامه های کاربردی

الایزا شیمی لومینسانس

وسترن بلات

Dot Blot-DNA/RNA

ساترن بلات-DNA

نورترن بلات-RNA

مشخصات

اجزاء

حمل و نقل و ذخیره سازی

این محصول با دمای اتاق ارسال می شود و می توان آن را به مدت یک سال در دمای اتاق نگهداری کرد. در صورت عدم استفاده طولانی مدت، توصیه می شود در 2 ذخیره شود℃~ 8℃ برای تمدید مدت اعتبار

نکات: 36222-A باید دور از نور نگهداری شود!

دستورالعمل (مثلاً فیلم اشعه ایکس)

1. الکتروفورز معمولی، غشای انتقال، آنتی بادی نشاندار شده با HRP یا پروب اسید نوکلئیک نشاندار شده با HRP انکوباسیون و غشای شستشو.

نکات: محلول شب تاب ECL بستر رنگی HRP است، بنابراین سیستم تشخیص باید بر اساس آنتی بادی نشاندار شده با آنزیم HRP یا پروب اسید نوکلئیک باشد.

2. همزمان با شستشوی غشاء برای آخرین بار، محلول کاری شب تاب به صورت تازه تهیه شد (محلول کاری شب تاب 100-200 میکرولیتر/غشاء cm2): همان حجم معرف A و B را بگیرید، خوب مخلوط کنید تا بعداً استفاده کنید.

نکات: Reagent A و معرف B باید از نکات مختلفی استفاده کنند. توصیه می شود بلافاصله از مایع کار استفاده کنید. هنوز هم می توان بعد از چند ساعت در دمای اتاق استفاده کرد، اما حساسیت آن کمی کاهش می یابد.

3. برای بیرون آوردن غشا از موچین صاف استفاده کنید، آن را روی کاغذ صافی بگذارید تا لوسیون تخلیه شود، غشا را کاملا خشک نکنید. غشا را به طور کامل در محلول کاری شب تاب غوطه ور کنید، در تماس کافی با مایع کاری شب تاب. در دمای اتاق به مدت 1-2 دقیقه جوجه کشی کنید و بلافاصله برای قرار گرفتن در معرض قرص آماده شوید.

4. غشا را با موچین بردارید و روی کاغذ صافی قرار دهید تا مایع کاری شب تاب تخلیه شود. اما مایع شب تاب را نشویید.

5. یک تکه پوشش پلاستیکی بزرگتر از غشاء را روی سطح داخلی فیلم اشعه ایکس obscura قرار دهید. غشای حک شده را به بسته بندی پلاستیکی وصل کنید، پوشش پلاستیکی را کاملاً دور غشای حک شده تا بزنید و حباب گاز را بردارید و تا کنید، می توانید لبه پلاستیک اضافی را قطع کنید. از کاغذ صافی برای مکیدن مایع کار اضافی استفاده کنید. روکش پلاستیکی را که غشای حک شده را در ابسکرا می پوشاند، با نوار چسب به سمت بالا ثابت کنید.

6. یک قطعه فیلم اشعه ایکس از اتاق تاریک گرفته شد و روی غشای پیچیده شده قرار گرفت. فیلم به مدت 30 ثانیه - 2 دقیقه فشرده و در معرض دید قرار گرفت. سپس فیلم توسعه و رفع شد.

نکات: زمان نوردهی باید با توجه به شدت نوردهی تنظیم شود.اگر پس زمینه خیلی زیاد است، همزمان از دو فیلم اشعه ایکس استفاده کنید.

سایر روش های مواجهه

اگر استفاده از عکاسی CCD: غشاء را می توان در مایع کار قرار داد، پس از بوت با توجه به استفاده از دستورالعمل، فیلم را بردارید، عکس بگیرید. علاوه بر این، پارامترهای اندازه گیری دستگاه را می توان با توجه به وضعیت تنظیم کرد تا نسبت سیگنال به نویز را بهبود بخشد.

یادداشت ها

1. در انتقال غشا، آب بندی و جوجه کشی باید از ایجاد حباب اجتناب شود. علاوه بر این، پوشیدن دستکش از باقی ماندن اثر انگشت روی غشاء جلوگیری می کند و آن را تمیز نگه می دارد.

2. قرار گرفتن در معرض طولانی مدت یا پروتئین بیش از حد پس زمینه را عمیق تر می کند و باعث می شود تغییر قدرت باند رابطه خطی را از دست بدهد. نوردهی کم باندها را محو می کند.

3. هنگام بسته بندی غشای چاپ شده ممکن است مقداری نایلون پلاستیکی فلورسانس را خاموش کند. پوشش پلاستیکی با کیفیت بالا باید انتخاب شود.

4. از قرار دادن چندین غشا در یک جعبه غشای شستشو خودداری کنید، زیرا جذب متقابل یا اصطکاک ممکن است باعث ایجاد پس زمینه عمیق شود.

5. موقعیت و اندازه باندها روی فیلم را می توان با استفاده از نشانگرهای پروتئینی از پیش رنگ آمیزی شده قابل مشاهده و برچسب های نوردهی فلورسنت-اتورادیوگرافی به دقت تعیین کرد.

6. از سیستم بیوتین-آویدین استفاده کنید و از استفاده از درب شیر خودداری کنید که ممکن است باعث بالا رفتن بیش از حد زمینه شود.

7. ذرات اکسید فلز ممکن است باعث ایجاد لکه های دانه ای روی غشاء شوند. از استفاده از قیچی و موچین زنگ زده خودداری کنید. از موچین های تخت پلاستیکی استفاده کنید.

8. سدیم آزید (NaN3) می تواند فعالیت HRP را مهار کند، اگر بازیابی پروب یا آنتی بادی نشاندار HRP باید از استفاده از NaN3 در صورت لزوم، حداکثر 0.01٪ اجتناب شود.

9. این محصول با توجه به درمان شیمیایی رایج، سمیت خاصی ندارد.

10. لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، از PPE لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی استفاده کنید!

11. فقط برای استفاده تحقیقاتی!

اسناد:

برگه اطلاعات ایمنی

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

دفترچه راهنما

36222_Manual_HB221212_EN

استنادها و مراجع:

[1] He X، Li J، Zhou G، و همکاران. دروازه‌سازی ریتم‌های هیپوکامپ و حافظه توسط پلاستیسیته سیناپسی در نورون‌های بازدارنده نورون. 2021؛ 109 (6): 1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] وانگ ایکس، ژانگ اس، جین دی، و همکاران. آگونیست گیرنده μ-اپیوئید تشکیل سلول های تومور در گردش در سرطان مثانه را از طریق مسیر MOR/AKT/Slug تسهیل می کند: یک مطالعه جامع شامل کارآزمایی تصادفی کنترل شده.سرطان سرطان (لندن). 2023؛ 43 (3): 365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] نانوذرات Li Y، Zhou S، Song H، Yu T، Zheng X، Chu Q. CaCO3 که با KAE ترکیب شده‌اند تا درمان سرطان با اضافه بار کلسیم تقویت شده را فعال کنند. بیومواد. 2021؛ 277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[4] Xu Z، Xu J، Sun S، و همکاران. Mecheliolide باعث مرگ سلولی ایمونوژنیک ناشی از ROS در کارسینوم کبدی می شود. ردوکس بیول. 2022؛ 54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] Cai Z، Zhang Y، Zhang W، و همکاران. احتباس آرسنیک در گلبول های قرمز و اریتروفاگوسیتوز بیش از حد به وضعیت سلنیوم کم به دلیل اختلال در هموستاز ردوکس مرتبط است. ردوکس بیول. 2022؛ 52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Kaushik AC، Wu Q، Lin L، و همکاران. پروفایل ncRNA های اگزوزومی عفونت مایکوباکتریایی miRNA-185-5p را به عنوان یک بیومارکر جدید برای سل شناسایی کرد. بیوانفورم مختصر 2021؛ 22 (6): bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Hu P، Li H، Sun W، و همکاران. اختلال لیزوزومی مرتبط با کلسترول باعث مرگ سلولی بدخیمی خونی می شود: تجزیه و تحلیل پویا بر روی اثرات سیتوتوکسیک LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021؛ 11 (10): 3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Wang X، Ni J، You Y، و همکاران. حسگر LPS با واسطه SNX10 باعث اختلال عملکرد سد روده از طریق یک آبشار سیگنالینگ وابسته به کاسپاز 5 می شود. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] جیانگ ک، چن اچ، فانگ یی، و همکاران. ANGPTL1 اگزوزومی با تنظیم الگوی ترشح سلول های کوپفر و ممانعت از نشت عروقی ناشی از MMP9، متاستاز کبدی سرطان کولورکتال را کاهش می دهد. J Exp Clin Cancer Res. 2021؛ 40 (1): 21. منتشر شده در 7 ژانویه 2021. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] ژانگ اس، یانگ زی، بائو دبلیو، و همکاران. SNX10 (مرتب‌سازی نکسین 10) با کنترل تخریب اتوفاژیک SRC از شروع و پیشرفت سرطان کولورکتال جلوگیری می‌کند. اتوفاژی. 2020؛ 16 (4): 735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Liu L، Liang L، Yang C، Zhou Y، Chen Y. وزیکول های خارج سلولی Fusobacterium nucleatum سد روده را از طریق هدف قرار دادن مسیر مرگ سلولی با واسطه RIPK1 به خطر می اندازند. میکروب های روده 2021؛ 13 (1): 1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)