شرح
UltraNuclease، همچنین به عنوان یک اندونوکلئاز غیر محدود کننده، نوکلئاز وسیع الطیف شناخته می شود، یک اندونوکلئاز غیر اختصاصی مشتق شده از Serratia Marcescen است که پیوندهای فسفودی استر داخلی بین هر نوکلئوتید در اسیدهای نوکلئیک را هیدرولیز می کند تا الیگونوکلئوت های 5'-مونوفسفات از الیگونوکلئوت های 2-5 را تولید کند. این می تواند DNA و RNA را به اشکال مختلف (دو رشته ای، تک رشته ای، خطی، دایره ای، بومی یا دناتوره شده) تحت طیف وسیعی از شرایط (6 مولار اوره، 0.1 مولار گوانیدین HCl، 0.4 درصد تریتون X-100، 0.1 درصد SDS، 1 میلی مولار EDTAMS) تجزیه کند و به طور گسترده حذف شود. اسیدهای حاصل از محصولات بیولوژیکی UltraNuclease همچنین می تواند با روش های مربوطه پس از آن حذف شود.
این کیت از روش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم دوگانه آنتی بادی (ساندویچ الایزا) برای تشخیص بقایای UltraNuclease دناتوره شده و غیردناتوره شده استفاده می کند. ابتدا میکروپلیت را با آنتی بادی پلی کلونال خرگوش ضد UltraNuclease بپوشانید تا یک آنتی بادی فاز جامد تشکیل شود. دوم، استاندارد UltraNuclease و نمونه آزمایشی را به میکروپلیت آنتی بادی فاز جامد اضافه کنید، سپس آنتی بادی پلی کلونال Anti-UltraNuclease دارای برچسب بیوتین و در نهایت استرپتاویدین نشاندار شده با پراکسیداز ترب کوهی (SA-HRP) را اضافه کنید تا یک آنتی بادی + آنتی ژن + آنتی بادی - بیوتین + مجموعه SA-HRP تشکیل شود. پس از آن، بستر TMB برای مشاهده واکنش رنگ پس از شستشوی کمپلکس به کمپلکس اضافه شد. TMB تحت کاتالیز آنزیم HRP به آبی تبدیل می شود و در نهایت در حضور اسید به زرد تبدیل می شود و سایه رنگ با مقدار UltraNuclease در نمونه همبستگی مثبت دارد.
محدوده تشخیص کمیت این کیت 0.047-3 نانوگرم در میلی لیتر است. حد تشخیص پایین 23.5 pg/mL است.
ویژگی
- بسیار حساس: شناسایی کمتر از 23 pg/ml باقیمانده UltraNuclease در نمونه های بیولوژیکی در حال فرآیند و نهایی.
- دقت را تضمین می کند: باقیمانده های UltraNuclease را می توان با بازیابی 80٪ -110٪ به دقت شناسایی کرد.
- ویژگی: با YEASEN UltraNuclease همکاری کنید و می توانید باقیمانده ها را به دقت تشخیص دهید.
- پایدار: تفاوت بین لات به لات کم است، ویژگی کیت به مدت 6 روز زیر 37 درجه سانتیگراد تحت تأثیر قرار نمی گیرد.
- جمع آوری آسان سیگنال: با استفاده از سیستم Biotin-Streptavidin، سیگنال را می توان به طور پایدار بزرگ کرد.
- کیت کامل: تمام اجزای کلیدی در کیت ارائه شده است، استفاده از آن مقرون به صرفه است.
برنامه
- تست اولترا نوکلئاز باقیمانده در محصولات بیولوژیکی
مشخصات
| حساسیت | 23 pg/ml (محدوده 0.047~3 ng/ml) |
| زمان سنجش | <4 ساعت |
| اصل سنجش | سنجش ایمونوآنزیمتری دو سایتی |
| تقویت سیگنال | سیستم بیوتین-استرپتاویدین |
| تشخیص طول موج | 450 نانومتر |
اجزاء
| اجزای شماره | نام | 36701ES59 (96 T) |
| 36701-A | میکروپلیت های الایزا | 1 بشقاب |
| 36701-B | آنتی بادی تشخیص: آنتی بادی های ضد اولترا نوکلئاز خرگوش کونژوگه با بیوتین | 35 میکرولیتر (0.2 میلی گرم در میلی لیتر) |
| 36701-C | استاندارد: اولترا نوکلئاز | 1 ویال (500 نانوگرم در میلی لیتر) |
| 36701-D | استرپتاویدین کونژوگه با HRP | 10 میکرولیتر |
| 36701-E | بافر رقیق 1 | 45 میلی لیتر |
| 36701-F | 20× بافر شستشو | 50 میلی لیتر |
| 36701-G | بافر رقیق 2 | 30 میلی لیتر |
| 36701-H | TMB | 15 میلی لیتر |
| 36701-I | راه حل توقف | 10 میلی لیتر |
| 36701-J | فیلم آب بندی | 5 عدد |
حمل و نقل و ذخیره سازی
کیت UltraNuclease ELISA همراه با کیسه یخ ارسال می شود و می توان آن را در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. محصول باز نشده به مدت یک سال اعتبار دارد. پس از باز شدن معرف، برای نیم سال اعتبار دارد. هرگز این محصول را فریز نکنید.
ذخیره سازی معرف های آماده شده:
1. بافر شستشو و بافر رقیق شده را می توان در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد به مدت 1 هفته نگهداری کرد.
2. استاندارد 36701-C مایع است و در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری می شود.
3. آنتی بادی تشخیص آماده شده و بافر توقف را می توان در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد به مدت 1 ماه نگهداری کرد.
ارقام
- نمایش ویژگی
شکل 1. ویژگی کیت الایزا UltraNuclease در شکل بالا نشان داده شده است.
8 نمونه تقلید برای واکنش غیر اختصاصی با آنتی بادی های موجود در کیت تخمین زده شد. بین 8 نمونه و نمونه منفی تفاوت معنی داری وجود نداشت. (*: تفاوت معنی داری با نمونه منفی) NS: تفاوت معنی داری با نمونه منفی وجود ندارد.
- نمایشگر دقیق
الف)
| تمرکز (ng/ml) | 6 داده تکراری در همان صفحه | CV | |||||
| 3 | 2.412; | 2.390 | 2.323 | 2.367 | 2.476 | 2.291 | 2.53٪ |
| 1.5 | 1.780 | 1.883 | 1.884 | 1.908 | 1.876 | 1.883 | 2.19٪ |
| 0.75 | 1.123 | 1.215 | 1.166 | 1.18 | 1.140 | 1.109 | 3.12٪ |
| 0.375 | 0.691 | 0.706 | 0.708 | 0.722 | 0.722 | 0.679 | 2.21٪ |
| 0.1875 | 0.449 | 0.462 | 0.453 | 0.460 | 0.447 | 0.433 | 2.13٪ |
| 0.094 | 0.306 | 0.308 | 0.304 | 0.311 | 0.295 | 0.302 | 1.65٪ |
| 0.047 | 0.242 | 0.241 | 0.240 | 0.241 | 0.256 | 0.240 | 2.37٪ |
| 0 | 0.183 | 0.192 | 0.189 | 0.187 | 0.189 | 0.189 | 1.43٪ |
ب)
| متوسط دقت | |||
| Conc. | 1.5 نانوگرم در میلی لیتر | 0.375 نانوگرم در میلی لیتر | 0.094 نانوگرم در میلی لیتر |
| تحلیلگر 1 | 1.388 | 0.382 | 0.079 |
| تحلیلگر 2 | 1.458 | 0.363 | 0.068 |
| تحلیلگر 3 | 1.318 | 0.37 | 0.063 |
| میانگین | 1.388 | 0.372 | 0.07 |
| SD | 0.070 | 0.010 | 0.008 |
| CV | 5.04٪ | 2.59٪ | 11.69% |
شکل 2. دقت UCF.ME™ UltraNuclease ELISA به صورت فوق مورد سنجش قرار گرفت. طرح
6 مورد تکراری در هر غلظت روی منحنی استاندارد مورد آزمایش قرار گرفتند و همه درصد CV کمتر از 5 درصد بودند (شکل 2A). 3 تحلیلگر آزمایش UCF.ME UltraNuclease ELISA را انجام دادند و درصد CV کمتر از 15 درصد بود (شکل 2B).
- اعتبارسنجی دقت
الف)
ب)
| تمرکز | OD450 | نتیجه | ||||
| نانوگرم در میلی لیتر | تکرار 1 | تکرار 2 | تکرار 3 | میانگین | Conc. | بازیابی% |
| 3 | 2.271 | 2.222 | 2.287 | 2.260 | 2.950 | 98% |
| 1.5 | 1.495 | 1.488 | 1.514 | 1.499 | 1.540 | 103% |
| 0.750 | 0.868 | 0.856 | 0.890 | 0.871 | 0.735 | 98% |
| 0.375 | 0.537 | 0.525 | 0.522 | 0.528 | 0.358 | 95% |
| 0.188 | 0.373 | 0.369 | 0.389 | 0.377 | 0.201 | 107% |
| 0.093 | 0.261 | 0.255 | 0.258 | 0.258 | 0.082 | 88% |
| 0 | 0.184 | 0.195 | 0.187 | 0.189 | 0 | 0 |
شکل 3. دقت UCF.ME™ اولترا نوکلئاز الایزا بود به عنوان طرح زیر مورد سنجش قرار گرفت.
UltraNuclease در محلول‌های لیز سلولی 5 میکروگرم بر میلی‌لیتر (HEK293، E.coli، CHO، و Vero) به‌طور مستقل با یک کانکس میخ‌دار نهایی مشخص شد. از 1.5 نانوگرم در میلی لیتر. دقت در نمونه های سلولی مختلف نسبت به سایر فروشنده ها عالی بود (شکل 3A). UltraNuclease در یک نمونه واقعی (ارائه شده توسط مشتری) مشخص شد و به صورت سریال 2 برابر از 3ng/mL به 0.093ng/mL رقیق شده است. بازیابی سنبله همه بین 80٪ تا 110٪ بود (شکل 3B).
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.