شرح
RNA دو رشته ای (dsRNA) به عنوان یک محصول جانبی در طول رونویسی in vitro mRNA ظاهر می شود. این محصول جانبی دارای خواص ایمونوژنیک در بدن انسان است که قادر به تحریک پاسخ ایمنی و در نتیجه کاهش سطح mRNA است. این امر dsRNA را به یک ناخالصی فرآیندی مشکل‌ساز تبدیل می‌کند که نیاز به حذف کامل و کنترل دقیق حضور باقیمانده آن دارد.
برای رفع این نگرانی، کیت تشخیص الایزا RNA دو رشته ای (dsRNA) از اصول تجربی یک روش ایمونواسی مرتبط با آنزیم ساندویچ دو رشته ای (ELISA) برای تعیین کمیت dsRNA باقیمانده استفاده می کند. این کیت نه تنها در تشخیص dsRNA های معمولی، بلکه در تشخیص peudo UTP، N1-Me-peudo UTP نیز قابل استفاده است. و dsRNA های اصلاح شده با 5-OMe-UTP.
این روش شامل افزودن یک نمونه استاندارد و نمونه آزمایشی بر روی یک صفحه آنزیمی (که به عنوان 36717-A مشخص شده است) که قبلاً با آنتی بادی های anti-dsRNA پوشانده شده است، می باشد. متعاقبا، آنتی بادی‌های شناسایی dsRNA نشاندار شده با بیوتین (36717-F) به شکل رقیق اضافه می‌شوند. در نهایت، استرپتاویدین-HRP (SA-HRP) (36717-G) برای ایجاد مجموعه ای شامل آنتی بادی ها، آنتی ژن ها، بیوتین و SA-HRP معرفی می شود.
پس از شستشوی صفحه، افزودن محلول کروموژنیک TMB (36717-K) شروع به توسعه رنگ می کند. تحت تأثیر کاتالیز آنزیم HRP، TMB از بی رنگ به آبی تبدیل می شود، که سپس با استفاده از محلول توقف (36717-L) متوقف می شود. در نهایت، این تبدیل منجر به یک رنگ زرد می شود که شدت آن با مقدار dsRNA شناسایی شده در نمونه ارتباط مثبت دارد.
این کیت یک هدف همه کاره را انجام می دهد، بهینه سازی فرآیند خالص سازی محصول بیولوژیکی، کنترل ناخالصی در مراحل میانی، و آزمایش انتشار برای ارزیابی محصول نهایی.
پمحصول Vالیداسیون گزارش دهید
اجزاء
| خیر | نام | 36717ES48 | 36717ES96 |
| 36717-A | نوارهای میکروتیتر پوشش داده شده با dsRNA | 48 تی | 96 ت |
| 36717-B | STD 1: اصلاح نشده، 5 نانوگرم در میکرولیتر | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-C | STD 2: pUTP اصلاح شده، 5 نانوگرم در میکرولیتر | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-D | STD 3: N1-Me-pUTP اصلاح شده، 5 نانوگرم در میکرولیتر | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-E | STD 4: 5-OMe-UTP اصلاح شده، 5 نانوگرم در میکرولیتر | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-F | تشخیص آنتی بادی: بیوتین کونژوگه آنتی بادی (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-G | استرپتاویدین-HRP (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-H | بافر رقیق سازی 1 | 25 میلی لیتر | 50 میلی لیتر |
| 36717-I | بافر رقیق 2 | 15 میلی لیتر | 30 میلی لیتر |
| 36717-J | کنسانتره بافر شستشو (20×) | 20 میلی لیتر | 40 میلی لیتر |
| 36717-K | بستر TMB | 6 میلی لیتر | 12 میلی لیتر |
| 36717-L | راه حل توقف | 3 میلی لیتر | 6 میلی لیتر |
| 36717-M | مهر و موم بشقاب | 2 | 4 |
حمل و نقل و ذخیره سازی
کیت همراه با کیسه یخ ارسال می شود و می توان آن را در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. محصول باز نشده به مدت یک سال اعتبار دارد. پس از باز شدن معرف، برای نیم سال اعتبار دارد. هرگز این محصول را فریز نکنید.
دستورالعمل ها
1. آماده سازی قبل از آزمایش
1) مواد آزمایشی که در این کیت ارائه نشده است اما برای آزمایش مورد نیاز است:
الف نکات بدون RNase;
ب لوله سانتریفیوژ بدون RNase;
ج کاغذ بدون گرد و غبار؛
د صفحه پیش تصفیه نمونه بدون RNase;
ه. آب دیونیزه یا آب مقطر دوبل.
2) ابزار و تجهیزات مورد نیاز اما ارائه نشده:
الف خوان میکروپلیت چند منظوره (شامل حالت تشخیص طول موج دوگانه، پوشش 450 نانومتر و 650 نانومتر؛ قادر به استفاده از 450 نانومتر به عنوان طول موج تشخیص و 650 نانومتر به عنوان طول موج مرجع).
ب واشر صفحه تمام اتوماتیک، میکسر گرداب، میکسر با دمای ثابت، سانتریفیوژ؛
ج میکروپیپت های دقیق و میکروپیپت های چند کاناله با مشخصات مختلف؛
د تایمر، یخچال 4℃;
ه. تکان دهنده میکروپلیت.
2. تجزیه و تحلیل نتایج
الف اگر مقدار OD نمونه مورد آزمایش از مقدار OD در بالاترین نقطه منحنی استاندارد بیشتر شود، نمونه باید رقیق شده و مجددا اندازه گیری شود.
ب روش توسعه منحنی: با ترسیم غلظت استاندارد روی محور x و مقادیر جذب استاندارد مدرج مربوطه در محور y، یک منحنی استاندارد ایجاد کنید. ابزارهای مختلف نقشه کشی و نرم افزارهای آماری می توانند به تولید منحنی های استاندارد و تعیین غلظت نمونه ناشناخته کمک کنند. توصیه می شود برای این آزمایش از روش برازش چهار پارامتری یا پنج پارامتری استفاده شود.در نهایت با مراجعه به منحنی استاندارد و در نظر گرفتن ضریب رقت نمونه، مقدار باقیمانده dsRNA را در نمونه محاسبه کنید.
ج منحنی استاندارد ارائه شده یک مثال گویا (فقط برای مقاصد مرجع) است. محتوای نمونه واقعی باید با استفاده از یک منحنی استاندارد که به طور خاص برای همان استاندارد آزمایشی ایجاد شده است، تعیین شود.
3. نمودار جریان آزمایش
شکل 5 نمودار جریان آزمایش
4. عملکرد محصول
عملکرد این کیت به طور کامل ارزیابی شده است. برای جزئیات، لطفاً با پرسنل فنی تماس بگیرید تا گزارش تأیید عملکرد مربوطه را دریافت کنید.
5. یادداشت ها
- لطفاً قبل از استفاده از این کیت، این دستورالعمل را به دقت بخوانید.
- لطفاً از این محصول در مدت اعتبار استفاده کنید و مخلوط کردن معرف های مرتبط از دسته های مختلف ممنوع است.
- همه معرف ها باید قبل از استفاده به دمای اتاق برگردانده شوند.
- برای ایمنی و سلامتی خود، لطفا از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.
- این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی علمی است.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.