شرح
معرف ترانسفکشن جهانی Hieff Trans™ یک معرف ترانسفکشن لیپوزوم چند منظوره، راحت و کارآمد است که بر اساس آخرین فناوری نانو توسعه یافته است. این برای ترانسفکشن DNA، RNA و الیگونوکلئوتیدها، از جمله سلول های اولیه، مناسب است، سلول های ترانسفکشن دشوار، از جمله نورون ها، کارایی انتقال بالایی دارند. فرمول منحصربه‌فرد آن اجازه می‌دهد که مستقیماً به محیط اضافه شود و وجود سرم بر راندمان ترانسفکشن تأثیر نمی‌گذارد، که آسیب‌های ناشی از حذف سرم را به سلول‌ها کاهش می‌دهد. نیازی به حذف کمپلکس معرف ترانسفکشن اسید نوکلئیک یا جایگزینی با محیط تازه پس از ترانسفکشن نیست و همچنین می توان محیط تازه را پس از 6-4 ساعت با توجه به وضعیت مواد مغذی سلول ها جایگزین کرد.
اجزای محصول
| شماره کامپوننت | اجزاء | گربه#/اندازه | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | یونیورسال-A | 0.5 میلی لیتر | 1 میلی لیتر | 5×1 میلی لیتر |
| 40808-B | یونیورسال-بی | 0.5 میلی لیتر | 1 میلی لیتر | 5×1 میلی لیتر |
حمل و نقل و ذخیره سازی
این محصول با بسته های یخ ارسال می شود و می توان آن را در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد به مدت یک سال نگهداری کرد. یخ نزنید!
هشدارها
1) در حین عمل ترانسفکشن بهتر است که تلاقی سلول به 90-70 درصد برسد و تراکم آبکاری ویژه با توجه به وضعیت سلول ها تعیین شود.
2) تهیه کمپلکس های ترانسفکشن نیازمند رقیق شدن DNA و معرف های ترانسفکشن در محیط بدون سرم است.
3) در طول ترانسفکشن نمی توان آنتی بیوتیک ها را به محیط اضافه کرد.
4) استفاده از DNA یا RNA با خلوص بالا به دستیابی به راندمان ترانسفکشن بالاتر کمک می کند و اندوتوکسین در پلاسمیدها دشمن ترانسفکشن است.
5) در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگهداری شود، مراقب باشید درب آن را به مدت طولانی مکرر باز نکنید.
6) غلظت اسید نوکلئیک و حجم معرف باید برای اولین استفاده بهینه شود تا حداکثر بازده انتقال حاصل شود.
7) این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی علمی است!
دستورالعمل ها
انتقال DNA
[توجه] مقدار معرف ترانسفکشن مورد استفاده تحت تأثیر نوع سلول و سایر شرایط آزمایشی است. توصیه می شود یک گرادیان برای بهینه سازی میزان استفاده بهینه برای اولین بار تنظیم کنید.
1) سلول ها پلات شده اند و تلاقی سلولی باید تا زمان ترانسفکشن 70 تا 90 درصد باشد.
2) محلول Universal-B را مطابق جدول زیر با محیط Opti-MEM رقیق کرده و به آرامی مخلوط کنید.
3) DNA را با محیط Opti-MEM رقیق کنید تا پیش مخلوط DNA بدست آید، سپس محلول Universal-A را اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید تا DNA رقیق شده بدست آید.
4) DNA رقیق شده را به محلول رقیق شده Universal-B (نسبت 1:1) اضافه کنید.
5) در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه جوجه کشی کنید.
6) کمپلکس DNA-لیپوزوم را به صورت قطره ای به سلول ها اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید.
7) در دمای 37 درجه سانتی گراد، انکوباتور CO2 5% به مدت 48-96 ساعت تا تجزیه و تحلیل بیان ژن انکوبه کنید.
انتقال siRNA
روش ترانسفکشن siRNA مانند ترانسفکشن DNA است، با این تفاوت که محلول Universal-A (مرحله 3) نیازی به افزودن محلول در هنگام رقیق کردن siRNA ندارد.
جدول 1 میزان ترانسفکشن در عروق مختلف کشت سلولی (فقط برای مرجع)
| عروق کشت سلولی | 96-خوب | 24-خوب | 6-چاه | |
| سلول های چسبنده | 1-4×104 | 0.5-2×105 | 0.25-1×106 | |
| محلول Universal-B را طبق جدول زیر با محیط Opti-MEM رقیق کرده و به آرامی مخلوط کنید. | رسانه Opti-MEM | 5 میکرولیتر | 25 میکرولیتر | 125 میکرولیتر |
| یونیورسال-بی | 0.2 میکرولیتر | 1 میکرولیتر | 5 میکرولیتر | |
| DNA را با محیط Opti-MEM رقیق کنید تا پیش مخلوط DNA بدست آید، سپس محلول Universal-A را اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید تا DNA رقیق شده بدست آید. | رسانه Opti-MEM | 5 میکرولیتر | 25 میکرولیتر | 125 میکرولیتر |
| DNA (0.5-5μg/μL) | 0.1 میکروگرم | 0.5 میکروگرم | 2.5 میکروگرم | |
| Universal-A (2 μL/μg DNA) | 0.2 میکرولیتر | 1 میکرولیتر | 5 میکرولیتر | |
| DNA رقیق شده را به محلول رقیق شده Universal-B (نسبت 1:1) اضافه کنید. | محلول DNA رقیق شده | 5 میکرولیتر | 25 میکرولیتر | 125 میکرولیتر |
| یونیورسال-بی | 5 میکرولیتر | 25 میکرولیتر | 125 میکرولیتر | |
| در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه جوجه کشی کنید. | ||||
| کمپلکس DNA-لیپوزوم | اجزاء (هر چاهک) | 96-خوب | 24-خوب | 6-چاه |
| Opti-MEM | 10 میکرولیتر | 50 میکرولیتر | 250 میکرولیتر | |
| DNA (0.5-5μg/μL) | 0.1 میکروگرم | 0.5 میکروگرم | 2.5 میکروگرم | |
| یونیورسال-بی | 0.2 میکرولیتر | 1 میکرولیتر | 5 میکرولیتر | |
| یونیورسال-A | 0.2 میکرولیتر | 1 میکرولیتر | 5 میکرولیتر | |
| کمپلکس DNA-لیپوزوم را به صورت قطره ای به سلول ها اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید. | کمپلکس DNA-لیپوزوم | 10 میکرولیتر | 50 میکرولیتر | 250 میکرولیتر |
[توجه] مقدار استفاده شده در جدول فقط برای مرجع است. مقدار خاصی از DNA و محلول Universal-B مورد استفاده باید با توجه به نوع سلول و سایر شرایط آزمایشی بهینه شود. توصیه می شود نسبت بین 1:0.5-1:5 حفظ شود.
را برگه اطلاعات ایمنی
(1) س: آیا هنگام تهیه کمپلکس معرف ترانسفکشن اسید نوکلئیک سرم وجود دارد؟
پاسخ: وجود سرم بر تشکیل لیپوزوم ها تأثیر می گذارد. هنگام تهیه کمپلکس های معرف ترانسفکشن اسید نوکلئیک، استفاده از محیط بدون سرم (معمولاً محیط MEM) توصیه می شود.
(2) س: آیا می توان معرف ترانسفکشن را منجمد کرد؟
پاسخ: این معرف باید در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگهداری شود و از بازکردن مکرر و طولانی درپوش خودداری شود، زیرا باز کردن طولانی مدت درپوش باعث اکسیداسیون لیپوزوم شده و راندمان ترانسفکشن را تحت تأثیر قرار می دهد.
(3) س: هنگام استفاده از معرف ترانسفکشن جهانی Hieff Trans™ به چه نکاتی باید توجه کنم؟
الف: 1) در حین عمل ترانسفکشن بهتر است تلاقی سلولی به 70-90% برسد و تراکم آبکاری ویژه با توجه به وضعیت سلول ها تعیین شود.
2) تهیه کمپلکس های ترانسفکشن نیازمند رقیق شدن DNA و معرف های ترانسفکشن در محیط بدون سرم است.
3) در طول ترانسفکشن نمی توان آنتی بیوتیک ها را به محیط اضافه کرد.
4) استفاده از DNA یا RNA با خلوص بالا به دستیابی به راندمان ترانسفکشن بالاتر کمک می کند و اندوتوکسین در پلاسمیدها دشمن ترانسفکشن است.
5) در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگهداری شود، مراقب باشید درب آن را به مدت طولانی مکرر باز نکنید.
6) غلظت اسید نوکلئیک و حجم معرف باید برای اولین استفاده بهینه شود تا بالاترین راندمان انتقال حاصل شود.
(4) س: آیا پس از ترانسفکشن باید خاتمه داده شود؟
ج: نیازی نیست. نیازی به حذف کمپلکس معرف ترانسفکشن اسید نوکلئیک یا جایگزینی با محیط تازه پس از ترانسفکشن نیست و همچنین می توان محیط تازه را پس از 6-4 ساعت با توجه به وضعیت مواد مغذی سلول ها جایگزین کرد.
(5) س: آیا می توان از معرف ترانسفکشن برای ترانسفکشن بسته بندی ناقل ویروسی استفاده کرد؟
ج: بله.کارایی بسته‌بندی ناقل ویروسی لزوماً به کارایی ترانسفکشن مربوط نیست، بلکه به انتخاب پلاسمیدهای بسته‌بندی و نسبت بین پلاسمیدها نیز مرتبط است.
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.