شرح
کیت سنجش گونه‌های اکسیژن واکنش‌پذیر از معرف 2'، 7'-دی کلروفلورسین دی استات (DCFDA) برای ارزیابی کمی گونه‌های اکسیژن فعال در نمونه‌های سلول زنده استفاده می‌کند. DCFDA غیر فلورسنت چربی دوست به راحتی از غشای سلولی از طریق انتشار غیرفعال و به دنبال آن داستیلاسیون عبور می کند. محصول دی اسیله شده یک دی کلروفلورسئین 2'،7' حساس به اکسیدان (DCHF) است. DCHF بعداً توسط ROS اکسید می شود و DCF را تشکیل می دهد. DCF بسیار فلورسنت است و با طیف‌سنجی فلورسانس یا فلوسیتومتری با تحریک/گسیل در nm 480/525 نانومتر شناسایی می‌شود. Rosup، یک مخلوط ترکیبی، یک القاء کننده ROS است و می تواند به عنوان یک کنترل مثبت استفاده شود.
اجزای محصول
| شماره جزء | اجزاء | مقدار | ذخیره سازی |
| 50101-A | DCFH-DA (10 میلی متر) | 100 میکرولیتر | -20 درجه سانتی گراد |
| 50101-B | روزاپ (100 میلی متر) | 1 میلی لیتر | -20 درجه سانتی گراد |
حمل و نقل و ذخیره سازی
این کیت به همراه کیسه یخ ارسال می شود. در دمای 20- درجه سانتیگراد بدون نور به مدت 1 سال نگهداری شود. از انجماد و ذوب مکرر خودداری کنید.
روش کاربرد
1. آماده سازی معرف
محلول DCFH-DA: قبل از باز کردن، به طور خلاصه با سرعت کم سانتریفیوژ کنید. با رقیق کردن 10 میلی مولار DCFH-DA در محیط عاری از سرم، یک محلول فعال DCFH-DA تهیه کنید تا غلظت نهایی 10 میکرومولار به دست آید.
[توجه]: DCFH-DA همچنین ممکن است در محیط های فاقد فنل قرمز رقیق شود. از محلول تازه تهیه شده DCFH-DA استفاده کنید، نگهداری طولانی مدت DCFH-DA رقیق شده توصیه نمی شود. غلظت دقیق DCFH-DA مورد نیاز به رده سلولی مورد استفاده بستگی دارد، اما محدوده شروع کلی 10-50 میکرومولار خواهد بود. برای سلول های خاص، اگر فلورسانس کنترل منفی (بدون پروب DCFH-DA) بسیار قوی است، DCFH-DA را به 2-5 میکرومولار رقیق کنید و زمان انکوباسیون را کوتاه کنید. مناسب
محلول Rosup: محلول کار Rosup 100 میکرومولار را با رقیق کردن 100 میلی مولار محلول استوک Rosup در محیط بدون سرم آماده کنید. به طور کلی، جوجه کشی با Rosup در دمای 37 ℃ به مدت 30 دقیقه تا 4 ساعت در تاریکی می تواند به طور قابل توجهی ROS را افزایش دهد.
[توجه]: زمان انکوباسیون Rosup به حساسیت رده سلولی بستگی دارد. به عنوان مثال، 30 دقیقه برای Hela و 1.5 ساعت برای MRC5. اگر افزایش ROS در 30 دقیقه مشاهده نشد، زمان القاء یا غلظت را می توان به طور مناسب افزایش داد. اگر ROS خیلی سریع افزایش یابد، زمان القاء یا غلظت را می توان به طور مناسب کاهش داد.
داروها: داروی مورد نظر را در محیط کامل با 10% FBS یا محلول مناسب دیگر به غلظت مورد نظر تهیه کنید.
2. پروتکل توصیه شده برای سلول های چسبنده
الف) آماده سازی سلول: روز قبل از آزمایش، سلول های چسبنده را در محیط های کشت سلولی استاندارد رشد دهید تا تلاقی سلولی در زمان آزمایش به 70 درصد برسد.
ب) القای دارو: محیط را حذف کنید. هر چاهک را با داروهای رقیق شده بدون سرم از قبل آماده شده پوشانده و برای مدت زمان مورد نظر در دمای 37 درجه سانتیگراد در تاریکی انکوبه کنید.
ج) (اختیاری) کنترل مثبت: چاه کنترل مثبت را با محلول Rosup از قبل آماده شده پوشانده و برای مدت زمان مورد نظر در دمای 37 درجه سانتیگراد در تاریکی انکوبه کنید.
[توجه]: برای سلول‌هایی با زمان تحریک کوتاه (معمولاً در عرض 2 ساعت)، می‌توان ابتدا کاوشگر را بارگیری کرد و سپس Rosup یا داروی مورد علاقه را اضافه کرد.
د) بارگذاری پروب ROS: تمام محیط را برداشته و سلول ها را با محیط بدون سرم برای 1-2 بار شستشو دهید. هر چاهک را با محلول DCFH-DA از قبل آماده شده بپوشانید. در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه در تاریکی انکوبه کنید.
ه) محیط را بردارید و سلول ها را 1-2 بار با محیط بدون سرم بشویید تا DCFH-DA آزاد حذف شود.
3. پروتکل توصیه شده برای سلول های معلق
الف) آماده سازی سلول: در روز آزمایش، سلول های سوسپانسیون را تا حدود 1.5 × 105 سلول در هر چاهک رشد دهید.
ب) القای دارو: سلول ها را با سانتریفیوژ در یک لوله مخروطی جمع آوری کرده و در مقدار مناسبی از داروهای رقیق شده بدون سرم که قبلا تهیه شده بود، مجدداً معلق کنید و برای مدت زمان مورد نظر در دمای 37 درجه سانتی گراد در تاریکی انکوبه کنید.
ج) (اختیاری) کنترل مثبت: سلولهای کنترل مثبت را با محلول Rosup از قبل آماده شده مجدداً معلق کرده و برای مدت زمان مورد نظر در دمای 37 درجه سانتیگراد در تاریکی انکوبه کنید.
د) بارگذاری پروب ROS: در یک لوله جدید جمع آوری کنید و سلول ها را با سانتریفیوژ دو بار در PBS شستشو دهید. سلول ها را با محلول DCFH-DA از قبل آماده شده با تراکم سلولی 106-2×106/1 در میلی لیتر معلق کرد. سپس در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه در تاریکی قرار دهید. برای اطمینان از تماس کامل بین پروب و سلول ها، لوله را هر 3-5 دقیقه معکوس کنید.
[توجه]: تراکم سلول باید مطابق روش تشخیص بعدی تنظیم شود. به عنوان مثال، برای فلوسایتومتری، تعداد سلول ها در یک لوله منفرد نباید کمتر از 104 در میلی لیتر یا بیشتر از 106 در میلی لیتر باشد.
ه) جمع آوری و شستشوی سلول ها با سانتریفیوژ دو بار با محیط بدون سرم برای حذف DCFH-DA آزاد.
4. تشخیص فلورسانس و تجزیه و تحلیل داده ها
اندازه گیری میکروسکوپ فلورسنت: میکروسکوپ سلول زنده را با یک مجموعه فیلتر مناسب برای فلورسین (FITC) با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس انجام دهید. سلول‌ها را برای روشنایی نمره‌گذاری کنید و بین نمونه‌ها و نمونه‌ها مقایسه کنید یا از روش‌های تحلیل تصویر برای مقایسه سیگنال‌ها بین عکس‌های دیجیتالی سلول‌ها استفاده کنید.
اندازه‌گیری فلوسایتومتری: سلولهای چسبنده باید با تریپسین جمع‌آوری شوند تا یک سوسپانسیون تک سلولی تهیه شود. برای سلول های سوسپانسیون، سلول ها به طور مستقیم جمع آوری می شوند. در حالت ایده آل، 10000 سلول باید در هر شرایط آزمایشی تجزیه و تحلیل شوند. سلول ها نباید در طول آزمایش بیش از حد متراکم باشند (<1 × 106 سلول در میلی لیتر). باقی مانده ها را حذف کنید و جمعیت سلولی مورد علاقه را با دروازه ای جدا کنید. با استفاده از میانگین شدت فلورسنت، تغییر برابری بین نمونه های شاهد و تیمار شده را با Ex/Em = 480/525 نانومتر تعیین کنید.
اندازه‌گیری میکروپلیت فلورسنت: صفحه را فوراً روی صفحه‌خوان فلورسانس در Ex/Em = 480/525 نانومتر در حالت نقطه پایانی در حضور رسانه اندازه‌گیری کنید. قرائت های خالی را از تمام اندازه گیری ها کم کنید و تغییر برابری را از کنترل سنجش تعیین کنید.
هشدارها
1. سلول ها را پس از انکوباسیون با DCFH-DA بشویید تا نویز پس زمینه کاهش یابد.
2. توصیه می شود فلورسانس را در اسرع وقت پس از انکوباسیون اندازه گیری کنید تا از خطاهای احتمالی جلوگیری شود.
3. برای ایمنی و سلامت خود، لطفاً برای عمل از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.
4. فقط برای استفاده تحقیقاتی!
[1] ژانگ ام و همکاران اجباری کردن سلولهای ایمنی توسط اگزوزوم مشتق از NK (LASNEO) خاموش‌کننده فعال با نور برای ریشه‌کنی تومور سینرژیک. Adv Sci (Weinh). 2022 Aug;9 (22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 4 ژوئن. IF: 16.806
[2] ژانگ دی و همکاران ریزحامل های خوراکی مبتنی بر ریزجلبک برای هموستاز میکروبیوتای روده و محافظت از روده در سرطان رادیوتراپی Nat Commun. 17 مارس 2022؛ 13 (1): 1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. IF: 14.919
[3] جیائو دی و همکاران BMSCهای تحریک‌شده با اکسید گرافن کاهش‌یافته زیست سازگار، از طریق ارتقاء استئوکلاستوژنز و رگ‌زایی، باعث تسریع در بازسازی استخوان و حرکت ارتودنسی دندان می‌شوند. Bioact Mater. 6 فوریه 2022; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. IF: 14.593
[4] گوو جی و همکاران شیمی درمانی انتخابی فضایی نانومکعب CuFe5O8 برای عفونت های مرتبط با ایمپلنت. نانو ACS. 2020 اکتبر 27; 14 (10): 13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 2020 Sep 22. PMID: 32931252. IF: 14.588
[5] یانگ سی و همکاران درمان فتودینامیک و فوتوترمال با واسطه Nanorod TiO2 با فسفر قرمز برای کارسینومای سلول کلیوی. کوچک. 2021 ژوئیه؛ 17 (30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 Jun 19. PMID: 34145768. IF：13.281
[6] شیائولو چن و همکاران نانوذرات تحویل تقویت‌کننده آبشاری محصور در شبکه‌های فلزی-فنولی که بر مقاومت دارویی سرطان از طریق گرسنگی/شیمی‌درمانی/شیمی‌درمانی ترکیبی غلبه می‌کنند. مجله مهندسی شیمی. آگوست 2022; 442:136221. IF: 13.273
[7] هائو دینگ و همکاران سلولهای بنیادی مزانشیمی محصور شده در یک هیدروژل تزریقی گونه‌های اکسیژن فعال - مهارکننده و تولید کننده O2 برای درمان سکته قلبی. مجله مهندسی شیمی. 2022.133511:1385-8947. IF: 13.273
[8] یو اچ و همکاران نانوکاتالیست آبشاری سه گانه با منبع اکسیژن فعال با لیزر و افزایش فتوترمال برای درمان کاتالیزوری موثر در برابر تومور هیپوکسیک. بیومواد. ژانویه 2022; 280:121308. PMID: 34896860. IF: 12.479
[9] سان دی و همکاران یک نانوفرمولاسیون مبتنی بر سیکلودکسترین به تحویل همزمان جین سنوزید Rg3 و کوئرستین برای شیمی-ایمونوتراپی در سرطان کولورکتال منجر می شود. Acta Pharm Sin B. 2022 Jan; 12 (1): 378-393. PMID: 35127393. IF: 11.614
[10] Xiong Y و همکاران. نانوذرات زیست پلیمری قابل فعال سازی خاص تومور که توسط پیش داروی نشاسته هیدروکسی اتیل برای درمان مشترک سرطان خود تقویت شده تثبیت شده اند. ترانوستیک ها 2022 ژانویه 1؛ 12 (2): 944-962. PMID: 34976222. IF: 11.556
[11] گائو جی و همکاران "نانو قایق" فوق مولکولی هدفمند میتوکندری که به طور همزمان متابولیسم انرژی دوگانه را برای شیمی درمانی انتخابی و هم افزایی تومور مهار می کند. ترانوستیک ها 2022 ژانویه 1؛ 12 (3): 1286-1302. PMID: 35154487. IF: 11.556
[12] ژونگ دی و همکاران کلسیم فسفات ریزجلبک های فتوسنتزی را برای مقابله با تومور هیپوکسیک با تعدیل درجا هیپوکسی و رادیو فوتوتراپی آبشاری مهندسی کرد. ترانوستیک ها 2021 ژانویه 22؛ 11 (8): 3580-3594. PMID: 33664849. IF: 11.556
[13] سان جی و همکاران سمیت سلولی خاکستر بادی سوزاندن زباله های جامد شهری تثبیت شده/جامد. جی خطر ماتر. 15 فوریه 2022؛ 424 (Pt A): 127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Epub 2021 Sep 29. PMID: 34879564. اگر: 10.588
[14] ژو سی و همکاران هیدروژل حساس به حرارت چند منظوره برای تعدیل ریزمحیط در استئوآرتریت با پلاریزاسیون ماکروفاژها و پاکسازی RONS. J نانوبیوتکنولوژی. 7 مه 2022؛ 20 (1): 221. IF: 10.435
[15] پان ایکس و همکاران نانوکره اکسید روی برای مهار سولفید هیدروژن و فروپتوز سرطان کولورکتال. J نانوبیوتکنولوژی. 2021 نوامبر 27; 19 (1): 392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. IF: 10.435
[16] او جی و همکاران نانوپوسته‌های طلا-نقره باعث بهبود زخم ناشی از عفونت باکتری‌های مقاوم به دارو می‌شوند و نظارت را از طریق تصویربرداری پراکندگی رامان بهبود یافته سطحی امکان‌پذیر می‌سازند. بیومواد. مارس 2020; 234:119763. PMID: 31978871. IF: 10.317
[17] چنگ کیو و همکاران نانودرمان‌ها با هموستاز ردوکس سلولی برای درمان فتودینامیک بسیار بهبود یافته تداخل می‌کنند. بیومواد. دسامبر 2019; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 Sep 17. PMID: 31557591. IF: 10.273
[18] ژونگ دی و همکاران α مکعب تجمع یافته با لیزر-Fe2O3@Au nanoکامپوزیت ها برای تصویربرداری رزونانس مغناطیسی و درمان هم افزایی پرتوهای فتوترمال/افزایش یافته بیومواد. اکتبر 2019; 219:119369. PMID: 31351244. IF: 10.273
[19] سان سی و همکاران حذف سلنوکسید استرس اکسیداتیو را برای بهبود اثر ضد تومور دستکاری می کند. بیومواد. دسامبر 2019; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 Sep 24. PMID: 31569018. IF: 10.273
پرداخت و امنیت
اطلاعات پرداخت شما با اطمینان پردازش می شود. ما جزئیات کارت اعتباری را ذخیره نمی کنیم و به اطلاعات کارت اعتباری شما دسترسی نداریم.
تحقیق
شما همچنین ممکن است دوست داشته باشید
پرسش
این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی است و برای استفاده درمانی یا تشخیصی در انسان یا حیوانات در نظر گرفته نشده است. محصولات و محتوا توسط پتنت ها، علائم تجاری، و حق چاپ متعلق به Yeasen Biotechnology محافظت می شوند. نمادهای علامت تجاری نشان دهنده کشور مبدا هستند، نه لزوما ثبت در همه مناطق.
برخی از برنامه‌های کاربردی ممکن است به حقوق مالکیت معنوی شخص ثالث دیگری نیاز داشته باشند.
Yeasen به علم اخلاق اختصاص داده شده است و معتقد است که تحقیقات ما باید به سؤالات مهم و در عین حال اطمینان از ایمنی و استانداردهای اخلاقی بپردازد.