Aureobasidin A که با نام های AbA، Basifungin، برومایسین A نیز شناخته می شود، یک آنتی بیوتیک پپتیدی استر حلقوی است که از قارچ رشته ای Aureobasidium Pullulans شماره R106 جدا شده است. توانایی ضد قارچی قوی دارد و یک مهارکننده اینوزیتول فسفریله سرامید سنتاز AUR1 است. حتی در غلظت های کمتر (0.1-0.5 میکروگرم در میلی لیتر) برای مخمر سمی است. گونه های قارچ حساس به اورئوباسیدین A شامل ساکارومایسس سرویزیه، Schizosaccharces pombe، Candida glabrata، Aspergillus nidulans و A. niger است. گونه های قارچی حساس به آن عبارتند از: مخمر دندانی (Saccharomyces cerevisiae)، Schizaccharomycambeaczoglass. (Candida glabrata)، آشیانه Aspergillus (Aspergillus nidulans) و Aspergillus niger (A. niger.). مکانیسم اثر به این صورت است که Aureobasidin A فعالیت اینوزیتول فسفورامیدیت (اینوزیتول فسفریل سرامید، IPC) سنتاز را که رشد قارچ به آن وابسته است، مهار می‌کند و در سنتز اسفنگولیپید دخالت می‌کند، بنابراین سویه را بیشتر می‌کشد. ژن‌های بیشتری که سنتازهای IPC را کد می‌کنند به‌عنوان ژن AUR 1 از Saccharomyces cerevisiae و ژن AURA از A. sinensis مورد مطالعه قرار گرفته‌اند که همسانی دارد. بی‌صدا کردن این ژن‌های کدکننده، سویه‌ها را نسبت به Aureobasidin A مانند ژن AUR 1-C مقاوم می‌کند.

Aureobasidin A به عنوان یک نشانگر انتخاب دارو برای غربالگری کلون های مثبت بسیار مناسب است. مقاومت Aureobasidin A نیز گزارشگر ایده آلی در مطالعات مخمر تک هیبریدی و دو هیبریدی است. این محصول محلول اورئوباسیدین A محلول در متانول با غلظت 1 میلی گرم در میلی لیتر می باشد.

ویژگی ها

خلوص≥97%

تولید استاندارد، با استفاده از حالت تولید انبوه کارخانه

برنامه های کاربردی

مطالعات دو هیبریدی مخمر

مطالعات مخمر یک هیبریدی

نشانگر انتخاب داروی مخمری دقیق

مقاومت Aureobasidin A یک گزارشگر ایده آل برای مطالعات هیبریداسیون مخمر است

مشخصات

اجزاء

حمل و نقل و ذخیره سازی

این اورئوباسیدین A(AbA) محصولات باید در -15℃ ~ -25℃ برای 2 سال

دستورالعمل ها

1. تمرکز کار

لطفاً برای غلظت خاص به ادبیات مربوطه مراجعه کنید و با توجه به شرایط آزمایشی خود (مانند هدف آزمایشی، نوع سلول، ویژگی‌های کشت و غیره) کاوش و بهینه‌سازی کنید.

2. آزمایش سلولی (آزمایش آزمایشگاهی)

Aureobasidin A رشد سلول های مخمر را از طریق مسمومیت با سرامید و محرومیت از اینوزیتول فسفریل سرامیدهای ضروری متوقف می کند.^[1].

تکرارهای پشت سر هم سه گانه از هر موتیف CArG-box سنتز شد. تمام قطعات DNA در ناقل Y1H pAbAi (Clontech، Mountain View، USA) با استفاده از مکان‌های محدودکننده مناسب کلون شدند. سپس، هر سازه pAbAi مونتاژ شده با BstbI خطی شد و طبق دستورالعمل سیستم تبدیل مخمر 2 (Clontech، Mountain View، ایالات متحده آمریکا) به سویه ساکارومایسس سرویزیه Y1HGold تبدیل شد. کلون‌های حامل قطعه DNA مورد نظر برای فعال‌سازی خودکار روی محیط حذف اوراسیل مصنوعی همراه با Aureobasidin A در غلظت 100 غربال‌گری شدند.–900 نانوگرم در میلی لیتر، همانطور که نشان داده شد (Clontech، Mountain View، ایالات متحده آمریکا)^[2].

فریم های خواندن باز (ORFs) ژن SlBES1 تکثیر و به پلاسمید pGBKT7-GAL4BD متصل شدند. ساختارهای همجوشی GAL4BD-SlBES1 بیشتر به سلول‌های مخمر طلایی Y2H تبدیل شدند. SD/-برای کشت ترانسفورماتورهای مخمر از صفحات محیطی Trp استفاده شد.این αفعالیت گالاکتوزیداز ترانسفورمنت ها توسط X شناسایی شد.α-gal و بیان AUR1-C توسط Aureobasidin A غربالگری شد^[3].

3. حداقل غلظت بازدارنده Aureobasidin برای مخمرهای مختلف

4. رویه های عملیاتی (برای سیستم تبدیل مخمر مقاوم به AbA)

1) 0.5 میلی لیتر از کشت مخمر یک شبه را به 50 میلی لیتر محیط YPD اضافه کنید (ترکیب: 1 لیتر محیط مایع حاوی 10 گرم عصاره مخمر، 20 گرم پلی پپتون، 20 گرم D-گلوکز؛ برای محیط جامد، 2٪ آگار اضافی اضافه کنید).

2) در 30 جوجه کشی کنید℃ تقریباً به مدت 6 ساعت، تا زمانی که OD660 1-2 شود. هنگام استفاده از دیپلوئید، OD660 را 2-4 اندازه بگیرید.

3) سانتریفیوژ در 1000×گرم به مدت 5 دقیقه.

4) گلوله را در 10 میلی‌لیتر محلول A (ترکیب: 100 میلی‌مولار استات لیتیوم، 10 میلی‌مولار Tris-HCl pH 7.5، 1 میلی‌مولار EDTA) معلق کنید، سپس در 1000 سانتریفیوژ کنید.×گرم به مدت 5 دقیقه.

5) Eگلوله را در محلول A معلق کنید تا OD660 به 150 برسد.

6) 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی را در یک لوله بریزید و در دمای 30 انکوبه کنید.℃ به مدت 1 ساعت

7) 5 میکروگرم از ناقل (DNA دایره ای یا خطی) و 150 میکروگرم DNA حامل (که در 100 گرم شده است) اضافه کنید.℃ به مدت 10 دقیقه و سپس به سرعت خنک می شود).

توجه: pAUR101 برای تبدیل به DNA خطی نیاز دارد. استفاده از DNA دایره ای باعث کاهش کارایی تبدیل می شود یا حتی ممکن است با شکست مواجه شود. pAUR112 و pAUR123 به DNA پلاسمید کامل برای تبدیل نیاز دارند.

8) 850 میکرولیتر محلول B (ترکیب: 40 گرم پلی اتیلن گلیکول 4000 را در 100 میلی لیتر محلول A حل کنید و خوب مخلوط کنید، قبل از استفاده تازه آماده کنید) و به آرامی مخلوط کنید.

9) در 30 جوجه کشی کنید℃ به مدت 30 دقیقه، سپس در 42℃ به مدت 15 دقیقه

10) به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید.

11) با سرعت 5000 دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید و گلوله را مجدداً در 5 میلی لیتر محیط YPD معلق کنید.

12) در 30 جوجه کشی کنید℃ به مدت 6 ساعت تا یک شب.

13) سانتریفیوژ را در 5000-10000 دور در دقیقه انجام دهید و گلوله را مجدداً در 1-10 میلی لیتر NaCl 0.9% معلق کنید.

14) 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی را روی صفحات محیطی انتخابی YPD (حاوی غلظت معینی از AbA، بسته به نوع سویه) قرار دهید.در 30 جوجه کشی کنید℃ به مدت 3-4 روز تا زمانی که تحول کامل شود.

15) ترانسفورماتورهای مثبت را انتخاب کنید، و/یا کارایی تبدیل را تعیین کنید (که به صورت تعداد کلنی های تبدیل شده در هر میکروگرم DNA پلاسمید بیان می شود).

اسناد:

برگه اطلاعات ایمنی

60231_MSDS_HB220420_EN.pdf

دفترچه راهنما

60231_دستی_HB250116_EN.pdf

ارقام

شکل 1. نمودار رشد صفحه مخمر

کرنش تجربی:GS115

مقدار مصرف: 0.05 میکروگرم در میلی لیتر،0.1 میکروگرم در میلی لیتر،0.5 میکروگرم در میلی لیتر،1 میکروگرم در میلی لیتر

درمان: 3-5 روزساعت 30℃

ردیف بالا محصول yeasen و ردیف پایین نام تجاری T * است.