La technologie d'amplification isotherme des acides nucléiques peut être classée en plusieurs types en fonction de différents principes d'amplification. La méthode la plus courante et la plus largement appliquée est la technologie d'amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) développée par des chercheurs japonais, dont Notomi, en 2000. La caractéristique technique de LAMP est la conception de quatre amorces ciblant six régions du gène cible, en utilisant une ADN polymérase de type Bst à déplacement de brin pour conduire la réaction d'amplification à une température constante de 60 à 65 °C. Cela permet d'obtenir une amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) de 109-1010-amplification multipliée par 1 en 15 à 60 minutes.
L'ADN polymérase Bst est l'enzyme centrale de la technologie d'amplification isotherme LAMP. Elle possède une forte stabilité thermique, une activité de déplacement de brin et une activité polymérase, permettant une amplification rapide, efficace et spécifique du modèle dans des conditions de température constante. Contrairement à la PCR, qui nécessite des cycles de dénaturation thermique pour l'amplification, l'expérience LAMP entière peut être réalisée en une heure sans avoir besoin de tels cycles.
Avantages du produit
Enzyme sans glycérol, adaptée à la lyophilisation
Transport à température ambiante, réduction des coûts
Forte activité de déplacement de brin, sensible et stable
Réhydratation rapide, facile à utiliser
Faits saillants des performances
01 Application de la méthode du colorant fluorescent
1、Haute sensibilité et bonne spécificité
Dans le système d'amplification par colorant fluorescent RT-LAMP, les performances d'amplification du gâteau de poudre lyophilisé 14405ES sont cohérentes avec celles de l'enzyme Bst liquide (y compris le glycérol et sans glycérol), et les deux peuvent détecter 100 % à une sensibilité de 50 copies/T. La spécificité est bonne, sans détection dans 48 puits de NTC (contrôle de modèle négatif).
2、Bonne stabilité thermique accélérée
Dans le système d'amplification par colorant fluorescent RT-LAMP, la poudre lyophilisée a été soumise à des traitements de stockage à 45 °C pendant 7 jours, 45 °C pendant 15 jours et à température ambiante pendant 19 jours, respectivement. Après accélération thermique, les performances du produit sont restées cohérentes avec celles de la version liquide de l'enzyme Bst sans glycérol, et aucun pic n'a été observé dans le NTC (témoin de modèle négatif).
3、Prend en charge le gel après l'accélération
Dans le système d'amplification par colorant fluorescent RT-LAMP, la poudre lyophilisée a été soumise à des traitements de stockage à 45 °C pendant 7 jours et à 45 °C pendant 15 jours, respectivement. La poudre lyophilisée après le traitement d'accélération thermique a ensuite été soumise à un deuxième cycle de lyophilisation (comprenant une seule enzyme et des réactifs RT-LAMP). Les expériences montrent qu'après le traitement accéléré et la deuxième lyophilisation, les performances du produit restent cohérentes avec celles de la version liquide de l'enzyme Bst sans glycérol, et aucun pic n'a été observé dans le NTC (contrôle de modèle négatif). La stabilité du produit est bonne, ce qui permet une lyophilisation secondaire et une accélération après lyophilisation secondaire.
02 Application de la méthode colorimétrique pH
1、Haute sensibilité et bonne spécificité
Dans le système d'amplification colorimétrique pH RT-LAMP, la sensibilité d'amplification du gâteau de poudre lyophilisée 14405ES peut atteindre 50 copies/T (taux de détection de 100 %), et la spécificité est bonne, sans détection dans 24 puits de NTC (Negative Template Control).
2、Bonne stabilité thermique accélérée
Dans le système d'amplification colorimétrique pH RT-LAMP, la stabilité accélérée thermiquement de la poudre lyophilisée 14405ES a été étudiée à 45 °C pendant 15 jours, la stabilité après lyophilisation secondaire après accélération (réhydratation après accélération à 45 °C pendant 7 jours) et la stabilité au stockage après réhydratation (stockée à -20 °C pendant 7 jours après réhydratation). Les expériences indiquent que le produit 14405ES présente une bonne stabilité, sans impact sur les performances du produit après accélération thermique, et supporte la lyophilisation secondaire après accélération.
Recommandations de produits phares
| Type de produit | Fonction du produit | Nom du produit | Numéro d'article |
| Mélange de lampes RT | Colorant fluorescent | LAMPE RT Colorant Essai Kit (UDG) Plus) | 13762ES |
| Indicateur de pH | LAMPE RT pH Sensible Colorant Trousse | 13906ES | |
| Indicateur de pH lyophilisable | LAMPE RT pH Sensible Colorant Chromogène Version Lyophilisable Trousse | 13920ES | |
| Enzyme BST | Glycérol | Hieff® Bst Plus ADN Polymérase (40 (U/μL) | 14402ES |
| Sans glycérol | Lyophilisé Bst Plus ADN Polymérase (60 U/μL, sans glycérol) | 14405ES | |
| Tampon | Tampon basique (sans colorants, etc.) | 10× Hieff® Bst Plus ADN Polymérase Tampon | 15441ES |