Points d'attention

1. Méthode de conservation : Conservation stable à température ambiante pendant 3 à 6 mois ; pour des périodes plus longues, conserver à 4°C ou -20°C.
2. Le marqueur ADN convient à l'analyse des bandes d'ADN dans l'électrophorèse sur gel d'agarose et n'est pas recommandé pour une utilisation dans l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide.
3. Sélection de la concentration du gel et de la solution tampon :

Concentration d'agarose	Plage de séparation efficace (pb)	Mémoire tampon recommandée
0,5%	2 000 à 50 000	1×TAE
0,8%	800-10 000	1×TAE
1,0%	400-8 000	1×TAE
1,2%	300-7 000	1×TAE
1,5%	200-3 000	1×TAE/0,5×TBE
2,0%	100-2 000	1×TAE/0,5×TBE
3,0%	25-1 000	0,5 × TBE

【Remarque】 : pour les gros fragments, choisissez un gel à faible concentration et utilisez un système tampon TAE pour l'électrophorèse ; pour les petits fragments, choisissez un gel à haute concentration et utilisez un système tampon TBE pour l'électrophorèse.

4. Sélection de colorants d'acides nucléiques :

L'EB (bromure d'éthidium) est un colorant fluorescent très sensible dont la longueur d'onde d'excitation maximale est de 302 nm, qui peut être utilisé pour observer les acides nucléiques dans les gels d'agarose et de polyacrylamide. L'EB s'intercale avec les bases des acides nucléiques et est connu pour être toxique.

YeaRed (Cat#10202ES76) et YeaGreen (Cat#10204ES76) sont de nouveaux colorants d'acide nucléique non toxiques avec une structure moléculaire huileuse unique qui ne peut pas pénétrer les membranes cellulaires pour entrer dans les cellules, ne sont pas facilement volatils ou sublimables et ne sont donc pas inhalés par les humains, garantissant la sécurité de l'expérimentateur.Les résultats du test d'Ames montrent également que YeaRed et YeaGreen ne présentent aucune mutagénicité aux concentrations de coloration sur gel, ce qui en fait une alternative sûre et non toxique à l'EB hautement cancérigène. De plus, YeaRed présente les mêmes caractéristiques spectrales que l'EB, il peut donc parfaitement remplacer l'EB sans modifier le système d'imagerie existant.

Questions et réponses

Q1 : Pourquoi les bandes de poids moléculaire élevé du marqueur ADN traînent-elles et ne se séparent-elles pas bien ?

A1 : Le colorant d'acide nucléique ne se lie pas suffisamment au marqueur d'ADN. Étant donné que les bandes de poids moléculaire élevé nécessitent plus de colorant d'acide nucléique, si le colorant n'est pas saturé, les bandes de poids moléculaire élevé sont plus sensibles aux effets de migration, ce qui entraîne un glissement et une mauvaise séparation. Il est recommandé de réduire la quantité de marqueur d'ADN utilisée (il peut être dilué avec de l'eau 5 fois, puis 8 à 10 μL peuvent être chargés) ou d'augmenter la concentration du colorant d'acide nucléique.

Q2 : Pourquoi n’y a-t-il pas de bandes ou des bandes faibles pour l’ADN ?

A2:

1. Charge d’ADN insuffisante, augmenter la quantité chargée ;
2. La bande d’ADN est épuisée dans le gel ;
3. La bande d’ADN est masquée par le colorant de suivi ;
4. Aucun colorant d’acide nucléique n’a été ajouté au gel ;
5. Le gel d'agarose a été laissé trop longtemps, il est recommandé de le préparer et de l'utiliser immédiatement.

Q3 : Pourquoi les bandes de marqueurs ADN sont-elles diffuses ?

A3:

1. Dégradation partielle de l’ADN, vérifier si les conditions de stockage sont trop chaudes ;
2. La tension pendant l'électrophorèse est trop faible, ce qui provoque la diffusion des bandes d'ADN. Il est recommandé de faire fonctionner le gel à 110 V-130 V. V pendant plus de 45 min;
3. La concentration du gel d'agarose n'est pas appropriée, préparez selon la concentration de gel recommandée dans le manuel ;
4. La qualité du gel d'agarose est médiocre, il est recommandé d'en préparer un nouveau.

Q4 : Pourquoi les bandes d'échantillons semblent-elles être de tailles différentes par rapport aux bandes de marqueurs ADN ?

A4:

1. La migration de l'ADN n'est pas seulement liée à la taille réelle, mais aussi à sa combinaison avec des protéines, l'état ionique, la structure de l'ADN, le gel et d'autres facteurs. La vitesse de migration électrophorétique des acides nucléiques est liée au rapport ADN/colorant, et lorsque la quantité de colorant d'acide nucléique est insuffisante, elle peut entraîner des erreurs de vitesse de migration plus importantes ;
2. Si l’échantillon contient une concentration élevée d’ions sel, cela peut également provoquer des erreurs de migration importantes ;
3. Si la quantité d'échantillon chargé diffère considérablement de la quantité de bandes de marqueurs ADN ou si les volumes diffèrent considérablement, cela peut également entraîner des erreurs de migration plus importantes.

Informations de commande

Orientation produit	Nom du produit	Numéro de produit	Caractéristiques
Marqueur ADN	Marqueur ADN GoldBand DL2000	10501ES60/80	100 T/10×100 T
	Marqueur ADN GoldBand DL5000	10504ES60/80	100 T/10×100 T
	Échelle d'ADN GoldBand 100 bp	10507ES60/80	100 T/10×100 T
	Échelle d'ADN GoldBand 1 kb	10510ES60/80	100 T/10×100 T