L'électrophorèse des protéines est une technique d'analyse des protéines. Les protéines sont chargées négativement ou positivement dans un tampon et se déplacent vers l'anode dans un champ électrique appelé électrophorèse. Différentes molécules de protéines ont des mobilités électrophorétiques différentes. Une partie très importante de l'électrophorèse des protéines est la préparation du gel. La préparation conventionnelle du gel prend souvent plusieurs heures et pose également des problèmes tels que des fuites de liquide, un gel irrégulier et des bulles d'air. En plus des problèmes de préparation, les réactifs des matières premières auront également une certaine toxicité, ce qui endommagera le corps du distributeur de colle, et l'apparition de colle préfabriquée peut résoudre ces problèmes. Alors, quel est le principe de base de l'électrophorèse des protéines et quelle est la fonction et le principe du gel préfabriqué ?

1. Quel est le principe de base de l’électrophorèse des protéines ?
2. Quelle est la fonction et le principe de la colle préfabriquée ?
3. Introduction de la colle préfabriquée fournie par Yeasen
4. FAQ
5. Détails du produit

1. Quel est le principe de base de l’électrophorèse des protéines ?

La plupart des macromolécules biologiques, telles que les protéines et les acides nucléiques, possèdent des groupes cationiques et anioniques, appelés zwitterions. La méthode d'électrophorèse de zone dans laquelle les particules sont dispersées dans la solution et le gel d'amidon, le gel d'agar ou d'agarose, le gel de polyacrylamide, etc. comme support est appelée électrophorèse sur gel. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide est une méthode d'électrophorèse dans laquelle le support est un gel de polyacrylamide. On pense que la taille des pores du gel de polyacrylamide est contrôlée pour polymériser et que les protéines sont séparées par l'action d'un tamis moléculaire similaire.

L'électrophorèse des protéines comprend deux formes, l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide natif (Native-PAGE) et l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide-dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE). La PAGE native maintient les protéines intactes pendant l'électrophorèse et les sépare selon un gradient basé sur leur poids moléculaire, leur forme et la charge qui les accompagne. D'autre part, la SDS-PAGE sépare les protéines en fonction du poids moléculaire de leurs sous-unités. Le SDS est un détergent anionique. En tant qu'agent dénaturant et solubilisant, il peut rompre les liaisons hydrogène intramoléculaires et intermoléculaires, replier les molécules et détruire les structures secondaires et tertiaires des molécules de protéines. En tant qu'agent réducteur puissant, le mercaptoéthanol, le dithiothréitol, peut rompre les liaisons disulfures entre les résidus de cystéine. Après avoir ajouté l'agent réducteur et le SDS à l'échantillon et au gel, les molécules sont dépolymérisées en chaînes polypeptidiques, et les chaînes latérales d'acides aminés dépolymérisées et le SDS sont combinés en micelles protéine-SDS. La charge négative des micelles protéine-SDS dépasse la charge d'origine de la protéine, éliminant ainsi la différence de charge et la différence structurelle entre les différentes molécules. La mobilité de la protéine dépend uniquement de la masse moléculaire de la protéine, et la masse moléculaire de la protéine peut être déterminée en la comparant à une norme de masse moléculaire connue.

2. Quelle est la fonction et le principe de la colle préfabriquée ?

Par rapport aux gels traditionnels coulés à la main, les gels protéiques précoulés peut éviter le contact avec un grand nombre de réactifs toxiques, économiser beaucoup de temps et résoudre efficacement le problème des grandes différences dans les gels coulés à la main.

Le gel est composé de deux couches de gel différentes, la couche supérieure est un gel d'empilement et la couche inférieure est un gel de séparation. Le gel d'empilement est également connu sous le nom de gel d'empilement.La concentration du gel est relativement faible et la taille des pores est relativement grande. L'échantillon est ajouté au gel d'empilement et concentré dans une zone étroite grâce à la migration du gel à grande taille de pores. Le gel de séparation, également appelé gel d'électrophorèse, a généralement une petite taille de pores et la sélection de la concentration de gel appropriée peut permettre de bien séparer les composants de l'échantillon.

Les gels de séparation peuvent être divisés en gels fixes et gels à gradient. La concentration de polyacrylamide est de 8 %, 10 %, 12 %, 15 %, 4 % à 12 % et 4 % à 20 %. Les quatre premiers sont des gels prémoulés à concentration fixe et les deux derniers sont des gels à gradient. Les concentrations représentent la plage de poids moléculaires des protéines isolées. Les gradients de gel sont formés par des mélangeurs à gradient. Une solution d'acrylamide à haute concentration est ajoutée à la plaque de verre, puis la concentration de la solution diminue dans un gradient et la taille des pores du gel est plus grande en haut et plus petite en bas. Le gel fixateur ne peut séparer que les protéines dans sa plage de séparation, ni trop grande ni trop petite. Les gels à gradient n'ont pas cette limitation, où les grosses molécules sont séparées en haut et les petites molécules en bas. Comme la taille des pores du gel à gradient diminue progressivement, il a un effet de concentration sur la protéine à proximité de la taille des pores que la protéine ne peut pas pénétrer, de sorte qu'une zone très étroite se forme après l'électrophorèse. Les protéines ayant de faibles différences de poids moléculaire ne peuvent souvent pas être séparées sur des gels fixes, mais peuvent être séparées sur des gels à gradient.

3. Introduction de la colle préfabriquée fournie par Yeasen

YEASEN Gel de protéines préfabriqué Plus contient Concentration en gradient et concentration fixe, une variété de concentrations différentes peuvent répondre aux besoins de différentes électrophorèses de protéines. Il est préparé par un processus de préparation de gel unique et a un excellent effet électrophorétique. Il est compatible avec tous les types de cuves d'électrophorèse du marché (Bio-RAD, Tanon, Life, etc.) et présente les avantages d'une grande adaptabilité, d'une haute résolution, d'une grande stabilité, de bandes claires et uniformes, etc.

3.1 YEASEN Gel de protéines préfabriqué Plus mise à niveau vers une planche en plastique, meilleure qualité !

Facile à utiliser : prêt à l'emploi ; retirez le ruban adhésif du bas de la plaque en plastique

Large gamme d'applications : compatible avec les protéines dénaturées et les protéines naturelles

Bande transparente : le traitement spécial des plaques en plastique réduit considérablement l'adsorption des protéines

Gain de temps : l'expérience peut être réalisée en 18 minutes au plus vite

Assurance qualité: assurance stricte de stabilité inter-lots

Longue durée de conservation : peut être stocké à 4℃ pendant 12 mois

3.2 Les paramètres suivants peuvent vous aider à choisir la série de gel appropriée

Système tampon d'électrophorèse : tampon de migration de protéines dénaturées ou tampon de migration de protéines naturelles

Nombre de puits et chargement de l'échantillon : 10 ou 15 puits, la taille maximale de l'échantillon était respectivement de 70 μL et 40 μL

concentration du gel : 8 %, 10 %, 12 %, 15 %, 4 %-12 %, 4 %-20 %

Tableau 1.Concentration du gel et plage de séparation linéaire

3.3 Les données montrent

Figure 1. Les données montrent

Figure 2. Les données montrent

4. FAQ

Q1 : Le préfabriqué doit-il gel être placé à 4℃ ? Est-ce important de le laisser à température ambiante pendant un certain temps ?

UN: Recommandé à 4 ℃, peut être conservé pendant 12 mois. Ne pas conserver à une température inférieure à 0 ℃, peut être conservé à température ambiante (25 ℃) pendant 30 jours.

Q2 : Comment choisir entre une concentration en gradient et une concentration fixe ? Quel est le poids moléculaire minimum de la protéine séparée par prémoulage gel?

A : La taille de la séparation des protéines par le préfabriqué gel est lié à sa concentration, et la plage de séparation correspondante est indiquée dans la figure ci-dessus.

Préfabriqué à concentration fixe gel a une meilleure résolution. Concentration de gradient préfabriquée gel a une plage de séparation plus large et une gamme d'applications plus large ; Clients devraient choisir la concentration appropriée en fonction de leurs propres besoins.

Nos préfabriqués à pente de 4 à 20 % gel (Cat#36250, Cat#36256) dispose d'une large plage de séparation pour des protéines aussi faibles que 3,5 kDa.

Figure 3. Préfabriqué à gradient données sur le gel

Q3 : Le préfabriqué gel dois-je être équipé de mon tampon spécial ? Peux-tu fabriquer ton tampon ?

A : Tampon spécial YEASEN (Cat#36236, Cat#36237) et préfabriqué l'applicabilité du gel est meilleure. Ne pas mélanger avec d'autres tampons. Le tampon peut être préparé en achetant des réactifs, mais les clients il faut utiliser notre formule, qui peut être trouvée dans le préfabriqué concerné mode d'emploi du gel.

Q4 : Comment faire la distinction entre le gel séparateur et gel concentré ? Est-ce nécessaire pour l'électrophorèse sous tension sectionnelle ?

R : Les deux composants sont les mêmes, mais la concentration n'est pas la même, l'œil nu ne peut pas faire la distinction ; La hauteur de la colle concentrée est de 1,5 cm.

Non, l'électrophorèse à 150 V est recommandée et 30 à 40 minutes sont nécessaires pour terminer l'expérience.

Q5 : Votre préfabriqué gel adapté à tous les types de cuves d'électrophorèse du marché ?

R : Oui, nos préfabriqués gel convient à tous les types de cuves d'électrophorèse du marché,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra System) et Tanon VE180 (Notez l'assemblage inversé de la bande d'étanchéité) ;

Mini-cellule Life Technology Novex (utilisée avec un déflecteur spécial) ;

Autre largeur de plaque de gel dans une cuve d'électrophorèse de 10 cm.

5. Détails du produit

Les produits fournis par Yeasen sont les suivants :

Tableau 2.Détails du produit