—Allumez votre membrane blot, au bout de vos doigts !
Les réactifs ECL, connus sous le nom de substrats chimioluminescents pour la peroxydase de raifort (HRP), sont actuellement les réactifs les plus sensibles utilisés dans la détection par Western blot. Les problèmes courants rencontrés avec les réactifs ECL sur le marché comprennent l'extinction, un bruit de fond élevé, l'instabilité et la difficulté de détecter les protéines en faible abondance, ce qui peut affecter les résultats expérimentaux finaux.
Yeasen Biotech a réuni des chercheurs scientifiques exceptionnels dans le domaine de l'immunodétection. En contrôlant strictement la qualité des matières premières de luminol et en améliorant continuellement la formulation des activateurs et des stabilisateurs, nous avons développé quatre types de réactifs ECL pour répondre aux besoins de différentes expériences. Il s'agit notamment de produits améliorés, ultra-sensibles, durables et ultra-haute sensibilité. Ils répondent non seulement aux exigences de détection des protéines cibles de faible à forte abondance, mais améliorent également l'intensité de la luminescence sans affecter l'expérience, ce qui permet d'obtenir des images plus claires.
Caractéristiques du produit
- Sensibilité exceptionnelle — Détection d’antigènes à des niveaux allant du picogramme au femtogramme.
- Rapport signal/bruit plus élevé — Les substrats luminescents précis réduisent le bruit de fond.
- Anticorps plus efficaces — Systèmes de substrats optimisés pour une affinité de liaison d’anticorps plus élevée.
- Rapport qualité-prix élevé — Des performances supérieures à un prix inférieur.
- Excellente stabilité — Les nouveaux oxydants assurent un stockage stable à 4°C jusqu’à un an.
Principe du produit
Le principe de base de la détection par réactif ECL est la luminescence issue des réactions d'oxydation : le luminol, principal composant du substrat luminescent, est oxydé par H2O2 dans des conditions alcalines par la catalyse de la peroxydase de raifort (HRP), formant un intermédiaire excité d'acide 3-amino-phtalique. Lorsqu'il revient à l'état fondamental, des photons sont émis, avec une longueur d'onde d'émission maximale de 425 nm. Ces signaux photoniques peuvent être capturés par des films à rayons X ou des dispositifs d'imagerie CCD.
Guide de sélection
Yeasen propose actuellement quatre types de produits ECL, chacun avec ses caractéristiques uniques, pour répondre pleinement aux besoins des applications d'immunoblotting des utilisateurs.
Alors, quel produit choisir pour votre expérience ?
Tableau 1.Guide de sélection des réactifs ECL
| Yeasen | ECL amélioré Type amélioré | Super ECL Type ultra-sensible | SuperDura Type durable | MaxiSignal Type à très haute sensibilité |
| Échantillons applicables | Cible avec une abondance élevée, échantillons de protéines de routine | Cible à faible abondance, échantillons limités | Cible à faible abondance, échantillons limités | Cible avec une abondance extrêmement faible, échantillons précieux |
| Sensibilité de détection | Niveau de picogramme moyen | Niveau de picogramme faible | Niveau femtogramme moyen | Faible niveau de femtogramme |
| Durée du signal | < 2 h | < 12 h | < 24 h | < 8 h |
| Système de détection applicable | Tous les réactifs conviennent aux films à rayons X et aux appareils d'imagerie CCD | |||
| Concentration de dilution d'anticorps primaire | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10 000 | 1:1000-1:50 000 | 1:5000-1:100 000 |
| Concentration de dilution d'anticorps secondaires | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10 000
| 1:50 000-1:250 000 | 1:100 000-1:500 000 |
| Membrane recommandée | Membrane NC | Membrane NC ou membrane PVDF | Membrane NC ou membrane PVDF | Membrane NC ou membrane PVDF |
| Stabilité de stockage | Température ambiante pendant 1 an | 4°C pendant 1 an, température ambiante pendant six mois | ||
| Avantages | Signal le plus fort parmi le même niveau de sensibilité | Rapport qualité/prix le plus élevé, adapté à la plupart des expériences WB | Durée de signal la plus longue, extrêmement adaptée aux expositions multiples | Excellente sensibilité, extrêmement adaptée à la détection de traces de protéines |
Remarque : la concentration de dilution d’anticorps recommandée est basée sur une concentration de stock d’anticorps de 1 mg/mL.
Application du produit
Les réactifs Yeasen ECL ont de meilleurs effets d'utilisation par rapport aux produits d'autres marques au même niveau.
Figure 1. Comparaison des effets de détection entre le substrat ultra-sensible Yeasen ECL Super et le substrat équivalent Pico de la marque T.
Figure 2. Comparaison des effets de détection entre le substrat à très haute sensibilité Yeasen ECL MaxiSignal et le substrat équivalent d'autres marques West Femto.
Figure 3.Comparaison des effets de détection entre le substrat durable Yeasen ECL SuperDura et le substrat équivalent d'autres marques West Dura.
Littérature publiée
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Les cellules B exprimant la leucine-ARNt-synthase-2 contribuent à l'immuno-évasion du cancer colorectal. Immunité. 2022 ; 55(6) : 1067-1081.e8. doi : 10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF : 43.474)
[2] Wu Z , Liu D , Pan D , et al.Structure et ingénierie d'Acidibacillus sulfuroxidansCas12f1[J] miniature.Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Le macrophage IRX3 favorise l'obésité et l'inflammation métabolique induites par l'alimentation. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (SI:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Gating des rythmes hippocampiques et de la mémoire par plasticité synaptique dans les interneurones inhibiteurs. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Avantage de prix
Figure 7.Comparaison des prix des produits Yeasen ECL avec ceux d'autres marques du même niveau
Questions fréquemment posées
| Problèmes rencontrés | Analyse des causes | Solutions recommandées |
| Le film a des images inversées | Le film a des images inversées | Le film a des images inversées |
| Le film présente des bandes brunes ou jaunes | ||
| Extinction de la fluorescence | Le temps de fonctionnement est trop long, la membrane sèche progressivement | Empêcher le dessèchement de la membrane |
| Contamination du film plastique, du révélateur ou du fixateur | Développer de bonnes habitudes expérimentales | |
| HRP insuffisant dans le système réactionnel | Augmenter le matériel marqué HRP | |
| Pas de bandes ou signal faible sur le film | Faible efficacité de transfert | Améliorer l'efficacité du transfert, utiliser un marqueur pré-coloré pour le jugement |
| Antigène/anticorps insuffisant ou incompatible | Augmenter la quantité d'antigène/anticorps ou sélectionner l'antigène/anticorps approprié | |
| Problèmes liés aux films radiographiques | Si le film radiographique est complètement noir (non transparent) après l'exposition, cela indique que le film est entièrement exposé ; utilisez un nouveau film radiographique | |
| Problèmes de développeur/réparateur | Pré-exposer un film pour vérifier ; s'il y a des problèmes, remplacer par un nouveau révélateur/fixateur | |
| HRP excessif dans le système réactionnel | Diluer le matériel marqué HRP | |
| Contexte élevé | Concentrations d'anticorps primaires et secondaires trop élevées | Réduire la concentration d’anticorps, prolonger le temps de blocage |
| Anticorps non nettoyés à fond | Augmenter le nombre de lavages | |
| Blocage incomplet | Optimiser les conditions de blocage | |
| Mauvais agent de blocage utilisé | Utiliser un agent de blocage différent | |
| Surexposition | Réduire le temps d'exposition | |
| Faible spécificité des anticorps | Remplacer par des anticorps de haute qualité | |
| HRP excessif dans le système réactionnel | Diluer le matériel marqué HRP | |
| Bandes avec des espaces vides | Forte concentration d'antigène et d'anticorps secondaire | Diluez l'échantillon et réexécutez le gel, ou refroidissez la solution chromogène mélangée et appliquez-la sur la membrane pour un développement rapide immédiat. |
| Forme de bande irrégulière | Bulles d'air lors du transfert ou hydratation inégale avec du méthanol (pour les membranes PVDF) | Optimiser les conditions de transfert. |
| Spots de cinéma | Agrégats de matériaux marqués HRP | Filtrer le matériau marqué HRP avec une membrane de 0,2 μm |
| Bandes non spécifiques | HRP excessif dans le système réactionnel | Diluer le matériel marqué HRP |
| SDS provoquant une liaison protéique non spécifique | Ne pas utiliser de SDS dans la procédure expérimentale | |
| Faible spécificité des anticorps | Remplacer par des anticorps de haute qualité | |
| Blocage inadéquat | Augmentez le temps de blocage ou utilisez un agent de blocage différent |
Informations de commande
| Nom du produit | Numéro de produit | Spécification |
| Réactif de détection Super ECL | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Kit de substrat chimioluminescent ECL amélioré | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| Substrat à durée prolongée SuperSignal SuperDura | 36223ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |
| Substrat à sensibilité maximale SuperSignal MaxiSignal | 36224ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |