रुमेटीइड गठिया (आरए) एक पुरानी सूजन वाली संयुक्त बीमारी है, जो लगातार सिनोवाइटिस, प्रणालीगत सूजन और हड्डियों और उपास्थि के क्षरण की विशेषता है, जो अंततः संयुक्त एंकिलोसिस और विकृति का कारण बन सकती है। आरए पशु मॉडल का व्यापक रूप से रोगजनन और उपचारात्मक तरीकों के अध्ययन के लिए उपयोग किया जाता है। आरए एटियलजि, रोगजनन, प्रभावित करने वाले कारकों और नए चिकित्सीय लक्ष्यों के अनुसंधान और नए उपचारों के मूल्यांकन के अध्ययन के लिए विभिन्न पशु मॉडल स्थापित किए गए हैं।

आरए पशु मॉडल को मोटे तौर पर दो श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है: प्रेरित और ट्रांसजेनिक मॉडल। आम प्रेरित मॉडल में कोलेजन-प्रेरित गठिया (सीआईए) और एडजुवेंट-प्रेरित गठिया (एए) शामिल हैं, जबकि ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में मानव टीएनएफ-α ट्रांसजेनिक मॉडल आदि शामिल हैं।

1940 के दशक में जूल्स फ्रंड द्वारा आविष्कृत फ्रंड का एडजुवेंट, एक तेल-में-पानी एंटीजन इमल्शन है जो एंटीजन जलीय घोल को एक तेल एजेंट के साथ मिलाकर और एक पायसीकारक जोड़कर बनाया जाता है। यह पशु प्रयोगों में सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला एडजुवेंट है।

फ्रायंड एडजुवेंट को माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस युक्त पूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट (सीएफए) और माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस रहित अपूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट (आईएफए) में विभाजित किया गया है। इनका उपयोग मुख्य रूप से चूहों में कोलेजन-प्रेरित गठिया (सीआईए) और एडजुवेंट-प्रेरित गठिया (एए) मॉडल को प्रेरित करने के लिए किया जाता है।

चित्र 1. मानव रुमेटी गठिया

चित्र 2. माउस रुमेटॉइड गठिया

1 कोलेजन-प्रेरित गठिया (सी.आई.ए.) (केवल संदर्भ के लिए)

1.1 माउस मॉडल

सीआईए मॉडल सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किए जाने वाले आरए माउस मॉडल में से एक है। जानवरों को हेटेरोलॉगस टाइप II कोलेजन से प्रतिरक्षित करने से संयुक्त उपास्थि में टाइप II कोलेजन के खिलाफ एक ऑटोइम्यून प्रतिक्रिया उत्पन्न हो सकती है, जिसमें पॉलीआर्टिकुलर परिधीय गठिया की नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँ होती हैं।

मॉडल निर्माण विधि: बोवाइन टाइप II कोलेजन (CII) को ग्लेशियल एसिटिक एसिड में 4°C पर रात भर घोला जाता है। फिर, हीट-किलेड माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस (BCG) को लिक्विड पैराफिन में डालकर कम्प्लीट फ्रेंड एडजुवेंट (CFA) तैयार किया जाता है। दोनों को मिलाकर इमल्सीफाई किया जाता है, जिससे टाइप II कोलेजन इमल्शन तैयार होता है। इस इमल्शन को माउस की पूंछ के बेस पर 0.1-0.2 mL की मात्रा में त्वचा के नीचे इंजेक्ट किया जाता है, ताकि सूजन पैदा हो सके। शुरुआती टीकाकरण के 21वें दिन, टाइप II कोलेजन इमल्शन के 0.1-0.2 mL का बूस्टर इंजेक्शन पेट के अंदर दिया जाता है। पहले टीकाकरण के बाद, चूहों में स्थानीय सूजन संबंधी प्रतिक्रियाएं होंगी जो लगभग एक सप्ताह में ठीक हो जाती हैं; एडजुवेंट के बाद, चूहों में 24वें दिन से जोड़ों में सूजन शुरू हो जाएगी, जो पिछले पैरों से आगे के पैरों और फिर पूंछ तक बढ़ जाएगी।

1.2 चूहा मॉडल

मॉडल निर्माण विधि: बोवाइन टाइप II कोलेजन (CII) को बराबर मात्रा में इनकम्प्लीट फ्रायंड एडजुवेंट (IFA) के साथ मिलाया जाता है और इमल्सीफाइड किया जाता है। पहले दिन, चूहों को कई जगहों पर इंट्राडर्मली इंजेक्शन दिया जाता है, और एक सप्ताह बाद, उन्हें इंट्रापेरिटोनियल बूस्ट मिलता है। मॉडल दूसरे टीकाकरण के 3-7 दिनों के भीतर प्राप्त किया जाता है। संवेदीकरण के सात दिन बाद, टखने के जोड़ थोड़े सूजे हुए और लाल हो जाएंगे, और 3 सप्ताह के बाद लक्षण खराब हो जाएंगे, त्वचा पर अल्सर होने की संभावना है; 5-6 सप्ताह के बाद, रोग संबंधी परिवर्तन और भी खराब हो जाते हैं, संयुक्त उपास्थि और सबकॉन्ड्रल हड्डी पैनस द्वारा नष्ट हो जाती है।

2 एडजुवेंट-प्रेरित गठिया (एए) (केवल संदर्भ के लिए)

एए मॉडल सबसे व्यापक रूप से प्रयुक्त चूहा आरए मॉडल है, जिसके दो प्रकार हैं: अपूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट (आईएफए) और पूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट (सीएफए)।

मॉडल निर्माण विधि: चूहों को सूजन उत्पन्न करने के लिए त्वचा के अन्दर इंजेक्शन दिया जाता है।मॉडल में आम तौर पर प्रेरण के 10-20 दिनों के बाद लगातार सूजन के लक्षण दिखाई देते हैं, जो 20 दिनों के आसपास चरम पर होते हैं। सूजन मुख्य रूप से टखने के जोड़ में होती है, जो फुटपैड और पूरे पैर को प्रभावित कर सकती है। जोड़ों की सूजन के लक्षण नैदानिक ​​आरए रोगियों के समान हैं, लेकिन प्रतिरक्षा शिथिलता की घटनाएं हो सकती हैं।

3 कोलेजन-प्रेरित गठिया (CIA) मॉडलिंग चरण (केवल संदर्भ के लिए)

• गोजातीय प्रकार II कोलेजन (CII) को 2 mg/mL की सांद्रता पर ग्लेशियल एसिटिक एसिड के घोल में घोला जाता है और 4°C पर रात भर रखा जाता है।
• अपूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट को 2-5 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता में गर्मी से मारे गए माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस के साथ पूरक किया जाता है। यिशेंग बायोलॉजी द्वारा प्रदान किए गए 60718ES पूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट में माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की सांद्रता 10 मिलीग्राम/एमएल से कम है।
• बोवाइन टाइप II कोलेजन एसिटिक एसिड घोल को कम्प्लीट फ्रायंड एडजुवेंट के साथ बराबर मात्रा में मिलाया जाता है और पायसीकृत किया जाता है।
• प्रत्येक प्रायोगिक चूहे को पीठ पर 4-6 इंजेक्शन दिए गए, जिनकी कुल मात्रा 0.1-0.2 मिली. थी।
• तीन सप्ताह बाद, अपूर्ण फ्रायंड एडजुवेंट को बराबर मात्रा में गोजातीय प्रकार II कोलेजन एसिटिक एसिड समाधान के साथ मिश्रित किया जाता है और पायसीकृत किया जाता है, और प्रत्येक चूहे को पूंछ के आधार पर 3-5 चमड़े के नीचे इंजेक्शन दिए जाते हैं, जिनकी कुल मात्रा 0.1-0.2 एमएल होती है।

4 एडजुवेंट-प्रेरित गठिया (एए) मॉडलिंग चरण (केवल संदर्भ के लिए)

• प्रयोगात्मक और नियंत्रण समूहों की सेटिंग को ध्यान में रखते हुए प्रासंगिक अभिकर्मकों को तैयार करें।
• अवलोकन और रिकॉर्डिंग: आम तौर पर, 80% से ज़्यादा चूहों में दूसरे टीकाकरण के 7-12 दिन बाद गठिया के लक्षण दिखते हैं। नैदानिक ​​लक्षणों को चूहे के जोड़ की लालिमा और गतिविधि के आधार पर वर्गीकृत किया जाता है, और प्रयोग से पहले और प्रयोग के बाद 3, 5, 7 और 12वें दिन अवलोकन रिकॉर्ड किए जाते हैं, ग्रेडिंग मानदंड इस प्रकार हैं:

तालिका नंबर एक स्कोरिंग मानदंड

एसमुख्य	एसलक्षण
0	गतिविधि सामान्य थी, एरिथेमा और सूजन का कोई लक्षण नहीं था।
1	गतिविधि सामान्य थी, केवल त्वचा पर लालिमा थी तथा कोई विशेष सूजन नहीं थी।
2	गतिविधि थोड़ी प्रभावित होती है, पंजे, पैर के पैड या घुटने के जोड़ में लालिमा होती है।
3	गतिविधि प्रभावित, पंजे की उंगलियों और जोड़ों में थोड़ी विकृति और सूजन।
4	गति अवरुद्ध हो जाती है, पैर की उंगलियां और जोड़ गंभीर रूप से लाल और सूजे हुए, कठोर या विकृत हो जाते हैं।

• माउस माप: प्रयोग से पहले और बाद में माउस के पिछले अंग के जोड़ का आयतन मापने के लिए माउस पंजा आयतन मीटर का उपयोग करें। प्रत्येक माउस के पिछले पैर के घुटने के जोड़ के नीचे लगभग 5 मिमी की मात्रा को तीन बार मापें, औसत मान रिकॉर्ड करें, और आयतन जोड़ की लालिमा और सूजन की डिग्री के अनुपात में हो। जांच हर तीन दिन में की जाती है।
• पैथोलॉजिकल जांच: प्रायोगिक और नियंत्रण समूहों से चूहे लें, त्वचा को हटाएँ, 48 घंटे से अधिक समय तक 4% फॉर्मेल्डिहाइड के साथ स्थिर करें, 2 घंटे के लिए 5% नाइट्रिक एसिड के साथ डीकैल्सीफाई करें, ज़ाइलीन में डुबोएँ, और पैराफिन में एम्बेड करें। 6 मिमी सेक्शन बनाएं, HE के साथ दाग दें, और पैथोलॉजिकल निदान के लिए स्कोरिंग मानक स्थापित करने के लिए एक पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के साथ निरीक्षण करें।

5 प्रायोगिक मामले की छवियाँ (साहित्य से उद्धृत)