आणविक निदान मानव शरीर के भीतर अंतर्जात जीन या बहिर्जात (रोगज़नक़) जीन की उपस्थिति, दोष या असामान्य अभिव्यक्ति की जाँच करके, निदान सामग्री के रूप में डीएनए, आरएनए या प्रोटीन अणुओं का उपयोग करके मानव स्थितियों या रोगों का विशिष्ट निदान करने की एक विधि और प्रक्रिया है। मुख्य आणविक निदान तकनीकों में पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर), फ्लोरोसेंस इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (एफआईएसएच), जीन चिप्स और जीन अनुक्रमण तकनीकें शामिल हैं। हाइब्रिडाइजेशन और हाई-थ्रूपुट अनुक्रमण तकनीकों की तुलना में, पीसीआर तकनीक के प्राथमिक लाभ इसकी उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता, संचालन में आसानी और प्रसार में आसानी हैं। जबकि पीसीआर तकनीक में जीन की संख्या में कुछ सीमाएँ हैं, जो यह पता लगा सकती है, अल्पावधि में, यह आणविक निदान में मुख्यधारा की तकनीक बनी रहेगी।

एंजाइम कच्चे माल के क्षेत्र में वर्षों के अनुभव के साथ, येसेन बायोटेक आईवीडी कंपनियों, तीसरे पक्ष के परीक्षण संस्थानों और अनुसंधान संगठनों को उच्च गुणवत्ता वाले और लागत प्रभावी आणविक नैदानिक पीसीआर कच्चे माल प्रदान कर रहा है। इनमें रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, आरएनएएस अवरोधक, टैक डीएनए पॉलीमरेज़, यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेस (यूडीजी/यूएनजी एंजाइम), टैक एंजाइम एंटीबॉडी, डीएनटीपी, साथ ही सिस्टम-अनुकूलित क्यूपीसीआर/आरटी-क्यूपीसीआर प्रीमिक्स समाधान जैसे एकल घटक शामिल हैं, जो नैदानिक/गैर-नैदानिक नैदानिक किट के विकास के लिए बेहतर प्रदर्शन और स्थिर एंजाइम कच्चे माल की पेशकश करते हैं।

आणविक नैदानिक पीसीआर प्रवर्धन कार्यप्रवाह और कच्चे माल का अवलोकन

1、कोर एंजाइम सामग्री-टैक डीएनए पोलीमरेज़

अनुप्रयोग परीक्षण क्षेत्रों के विस्तार और बाजार की मांग में वृद्धि के साथ, वाइल्ड-टाइप टैक डीएनए पॉलीमरेज़ अब आवश्यकताओं को पूरी तरह से पूरा नहीं कर सकता है। येसेन के ज़ाइमएडिटर™ एंजाइम संशोधन प्लेटफ़ॉर्म ने विभिन्न अनुप्रयोग आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए टैक डीएनए पॉलीमरेज़ को व्यापक और दिशात्मक रूप से संशोधित किया है, जो प्री-मिक्स्ड, अवरोधक-प्रतिरोधी, अल्ट्रा-क्लीन और अन्य अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हॉट-स्टार्ट टैक डीएनए पॉलीमरेज़ की एक श्रृंखला लॉन्च करता है।

बेहतर स्थिरता: प्राइमर और जांच युक्त एक पूर्ण प्रीमिक्स समाधान में तैयार, 7 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर उपचार के बाद, कम सांद्रता का पता लगाने में कोई परिवर्तन नहीं होता है।

चित्र 1: HBV न्यूक्लिक एसिड को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, 10726ES के साथ एक qPCR पूर्ण प्रीमिक्स घोल तैयार किया गया, और टेम्पलेट को छोड़कर सभी घटकों को 7 दिनों के लिए 37°C पर त्वरित स्थिरता के लिए परीक्षण किया गया। परिणामों से पता चला कि उच्च, मध्यम और निम्न सांद्रता पर Ct मान और प्रतिदीप्ति मान में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुआ, जो दर्शाता है कि 10726ES के साथ तैयार प्रीमिक्स घोल का प्रदर्शन स्थिर है।

कम मेज़बान जीडीएनए अवशेष: अवशिष्ट ई. कोली जीनोमिक डीएनए प्रति 100 यू में 0.5 प्रतियों से कम है।

चित्र 2: ई. कोली जीनोमिक डीएनए की रैखिक सीमा: 30 fg/μL से 300 pg/μL, सहसंबंध गुणांक R2 0.9999 के साथ। (बी) हिएफ़ यूसीएफ.एमई® सेंसिटिव टैक डीएनए पॉलीमरेज़ के तीन बैचों में अवशिष्ट ई. कोली जीनोमिक डीएनए 100 यू प्रति 0.5 प्रतियों से कम है।

2、कोर एंजाइम सामग्री-रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस

RT-qPCR प्रतिक्रिया के प्रमुख घटकों में से एक के रूप में, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस में तेज़ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन गति, उच्च संश्लेषण उपज और बेहतर गर्मी प्रतिरोध होना चाहिए। RT-qPCR के लिए अधिक उपयुक्त रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस प्राप्त करने के लिए, येसेन बायोटेक ने आनुवंशिक संशोधन के माध्यम से M-MLV पर आधारित रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की हाईफ़ेयर® श्रृंखला विकसित की है।इन एंजाइमों में कम RNaseH सक्रियता, उच्च तापीय स्थिरता, तथा मजबूत सतत संश्लेषण क्षमताएं होती हैं।

यह 58 डिग्री सेल्सियस के प्रतिक्रिया तापमान को झेल सकता है और जटिल आरएनए टेम्पलेट्स के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए उपयुक्त है

चित्र 3: हाईफ़ेयर® वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और आयातित ब्रांड टी* रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस को 55°C और 58°C पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया ताकि अवशिष्ट एंजाइम गतिविधि का पता लगाया जा सके। परिणाम बताते हैं कि हाईफ़ेयर® वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस 58°C पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करने के बाद 70% गतिविधि बनाए रखता है, जो आयातित ब्रांड से काफी अधिक है।

अन्य ब्रांडों की तुलना में RT-qPCR में बेहतर पहचान दर, पहचान सीमा 1 pg से 1 μg तक

चित्र 4: 1 पीजी से 1 μg (7 ग्रेडिएंट) तक की सांद्रता पर 293T सेल कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, qPCR (कैट#11142), V*, और T* के लिए Hifair® V वन-स्टेप RT-gDNA पाचन सुपरमिक्स का उपयोग करके रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया। परिणामी cDNA को फिर मात्रात्मक विश्लेषण के लिए qPCR के अधीन किया गया। परिणाम बताते हैं कि 11142ES की संवेदनशीलता 1 पीजी तक पहुँच सकती है, जिसकी पहचान दर प्रतिस्पर्धी उत्पादों की तुलना में बेहतर है।

3、अन्य एंजाइम और एंजाइम अवरोधक: आरएनेज अवरोधक, यूडीजी एंजाइम

येसेन बायोटेक कई तरह के एंजाइम और एंजाइम अवरोधक प्रदान करता है जिन्हें IVD औद्योगिक अनुप्रयोगों के लिए मान्य किया गया है, जिसमें RNase अवरोधक और UDG एंजाइम शामिल हैं, जो इन विट्रो डायग्नोस्टिक उत्पादों की एक विस्तृत श्रृंखला के विकास और उत्पादन के लिए उच्च गुणवत्ता वाले कच्चे माल के समाधानों का एक समृद्ध चयन प्रदान करते हैं। इन एंजाइम-संबंधी उत्पादों का व्यापक रूप से आणविक पहचान लक्ष्य उत्पादों की सुरक्षा में उपयोग किया जाता है।

आरएनएसे अवरोधक:येसेन ई. कोलाई के भीतर घुलनशील रूप में पुनः संयोजक माउस/पोर्सिन आरएनेज अवरोधकों को व्यक्त और शुद्ध करता है, जो पॉलीमरेज़ की गतिविधि को दबाए बिना विभिन्न प्रकार के आरएनेज (आरएनेज ए, बी, सी) को व्यापक रूप से बाधित कर सकता है। इन अवरोधकों को आरटी-पीसीआर/क्यूपीसीआर, आरएनए-सीक्यू, सीडीएनए क्लोनिंग और लाइब्रेरी निर्माण जैसे कई अनुप्रयोगों में व्यापक उपयोग के लिए मान्य किया गया है। पारंपरिक आरएनेज अवरोधकों के अलावा, येसेन ने यूसीएफ.एमई® अल्ट्रा-लो अवशेष प्रौद्योगिकी के साथ संसाधित आरएनेज अवरोधक भी विकसित किए हैं, जिनमें कम मेजबान अवशेष हैं और पृष्ठभूमि बैक्टीरिया के लिए सख्त आवश्यकताओं वाले अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हैं, जो रोगजनक पहचान में पृष्ठभूमि बैक्टीरिया के हस्तक्षेप के समाधान में सहायता करते हैं और पहचान की सटीकता को बढ़ाते हैं।

यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज़ (यूडीजी/यूएनजी एंजाइम):यूरेसिल-डीएनए ग्लाइकोसिलेस (यूडीजी एंजाइम), जब डीयूटीपी के साथ संयोजन में उपयोग किया जाता है, तो एक पीसीआर संदूषण रोकथाम प्रणाली स्थापित कर सकता है। यिशेंग का थर्मोलेबल, कम यूडीजी एंजाइम निष्क्रियता के बाद पारंपरिक यूडीजी एंजाइमों की अवशिष्ट गतिविधि से बच सकता है, जो कमरे के तापमान पर डीयू-युक्त प्रवर्धन उत्पादों के क्षरण का कारण बन सकता है। यह आणविक एंजाइमों में मौजूद पृष्ठभूमि बैक्टीरिया के कारण पीसीआर परिणामों में गलत सकारात्मकता को भी रोकता है। यह संक्रामक रोगजनकों की सटीक पहचान करने और संक्रमण और संक्रामक रोगों के नैदानिक निदान में सहायता करने के लिए महत्वपूर्ण है।

टैक डीएनए पोलीमरेज़ एंटीबॉडी:गैर-विशिष्ट प्रवर्धन पीसीआर के प्रदर्शन को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करने वाले प्रमुख मुद्दों में से एक है, और हॉट स्टार्ट तकनीक गैर-विशिष्ट प्रवर्धन को प्रभावी रूप से कम कर सकती है। एंटीबॉडी के साथ संशोधित हॉट स्टार्ट एंजाइम में उच्च सीलिंग दक्षता और उत्कृष्ट प्रदर्शन होता है, जो एंजाइम गतिविधि की तेज़ रिलीज़ दर के साथ कमरे के तापमान पर स्थिर होता है।यिशेंग बायोटेक द्वारा विकसित दोहरे एंटीबॉडी हॉट स्टार्ट टैक एंजाइम न केवल टैक एंजाइम की 5'→3' पॉलीमरेज़ गतिविधि को सील करता है, बल्कि साथ ही साथ 5'→3' एक्सोन्यूक्लिएज गतिविधि को भी सील करता है। यह दोहरा दृष्टिकोण गलत युग्मन या प्राइमर डिमर्स के कारण होने वाले गैर-विशिष्ट प्रवर्धन को प्रभावी ढंग से रोकता है और जांच या प्राइमर के क्षरण के कारण गैर-विशिष्ट संकेतों की पीढ़ी को भी रोकता है, जिससे अभिकर्मकों की स्थिरता दोगुनी हो जाती है।

4、यूनिवर्सल हाई-परफॉरमेंस वन ट्यूब qPCR मास्टर मिक्स

येसेन बायोटेक उच्च गुणवत्ता वाले qPCR अभिकर्मकों की पेशकश करता है, जिसमें उच्च प्रदर्शन वाले हॉट-स्टार्ट टैक पॉलीमरेज़ को एक अनुकूलित बफर सिस्टम के साथ जोड़ा जाता है। कंपनी यूनिवर्सल मास्टर मिक्स, ऑल-इन-वन मास्टर मिक्स, जीनोटाइपिंग मास्टर मिक्स और फ्रीज-ड्राइड मास्टर मिक्स सहित कई तरह के उत्पाद प्रदान करती है। इन अभिकर्मकों की विशेषता उनके उपयोग में आसानी, उच्च संवेदनशीलता और मजबूत स्थिरता है, जो आपके आणविक नैदानिक उत्पादों के विकास को गति प्रदान करते हैं।

अच्छी बहुमुखी प्रतिभायह कई प्रकार के मल्टीपल प्राइमर और जांच के लिए उपयुक्त है (40 से अधिक विभिन्न प्रकार के लक्ष्यों को सत्यापित किया गया है), और इसमें उत्कृष्ट प्रवर्धन प्रदर्शन है;
एल सुपर पूर्ण प्रीमिक्स स्थिरता: 14 दिनों के लिए 37℃ पर स्थिर, 28 दिनों के लिए 4℃ पर, 50 बार दोहराया गया जमाना और पिघलाना;

उच्च संवेदनशीलता और अच्छी विशिष्टता: संवेदनशीलता 0.25 प्रतिलिपि/μL का पता लगा सकती है, और 48 छिद्रों की विशिष्टता में कोई नकारात्मक शिखर नहीं है;
त्वरित कार्यक्रम का समर्थन करें:तेजी से कार्यक्रम के साथ संगत, 30min परिणाम का उत्पादन कर सकते हैं;
डीयूपी/यूडीजी प्रदूषण रोधी प्रणाली: एयरोसोल प्रदूषण को प्रभावी ढंग से रोकने के लिए डीयूटीपी/यूडीजी प्रदूषण रोधी प्रणाली शुरू की गई है;
बहु-प्लेटफ़ॉर्म और बहु-प्रणाली अनुप्रयोग: बायो-रेड सीएफएक्स96, एबीआई क्यू5, 7500, स्लैन, तियानलोंग, आदि।

चित्र 5: ऑल-इन-वन प्री-मिक्स्ड अभिकर्मक के स्थिरता अध्ययन के आधार पर, 16710ES को तीन अलग-अलग तरीकों (4°C, 37°C, और फ्रीज-थॉ चक्र) में उपचारित किया गया। प्रायोगिक समूहों को क्रमशः 7 दिनों के लिए 4°C और 37°C पर उपचारित किया गया, और 50 फ्रीज-थॉ चक्रों के अधीन किया गया, जबकि नियंत्रण समूह (-20°C पर संग्रहीत) को चार मल्टीप्लेक्स प्रवर्धन प्रणालियों (समूह 1, 2, और 4 क्वाड्रुप्लेक्स प्रवर्धन प्रणाली हैं, और समूह 3 एक ट्रिपलक्स प्रवर्धन प्रणाली है) के तहत स्थिरता के लिए मूल्यांकन किया गया था। परिणामों ने प्रदर्शित किया कि प्रायोगिक और नियंत्रण समूहों के बीच Ct मानों (ΔCt) का विचलन ±0.5 के भीतर था, और प्रतिदीप्ति मान विचलन 15% के भीतर था, जिससे साबित होता है कि येसेन के ऑल-इन-वन प्री-मिक्स्ड अभिकर्मक में मल्टीप्लेक्स प्रवर्धन में उत्कृष्ट स्थिरता है।

5、यूनिवर्सल हाई-परफॉरमेंस RT-qPCR मास्टर मिक्स

वन-स्टेप RT-qPCR अभिकर्मक रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और हॉट-स्टार्ट एंजाइम के बेहतर प्रदर्शन को एकीकृत करते हैं, जो एक अनुकूलित बफरिंग सिस्टम द्वारा पूरक होते हैं, जिससे सिंगल-डिजिट कॉपी टेम्प्लेट का तेजी से और संवेदनशील पता लगाना संभव होता है। श्वसन रोग, पशु महामारी और अनुसंधान प्रणालियों सहित विभिन्न ग्राहक बाजारों द्वारा मान्य, ये अभिकर्मक विभिन्न अनुप्रयोग दिशाओं की जरूरतों को पूरा कर सकते हैं।

अच्छी बहुमुखी प्रतिभायह रोगजनक सूक्ष्मजीवों, मानव जीनोम, पौधों और अन्य प्रजातियों के न्यूक्लिक एसिड के qPCR प्रवर्धन और पता लगाने के लिए उपयुक्त है;
उच्च संवेदनशीलता：सावधानीपूर्वक अनुकूलित बफर सिस्टम 250 प्रतियां/एमएल तक कम सांद्रता टेम्पलेट्स की पहचान संवेदनशीलता में सुधार करता है;
डीयूपी/यूडीजी प्रदूषण विरोधी प्रणाली：dUTP/हीट-लैबाइल UDG प्रदूषण-रोधी प्रणाली को उत्पादों के एरोसोल प्रदूषण को कुशलतापूर्वक कम करने, झूठे सकारात्मक को कम करने और प्रामाणिक परिणाम सुनिश्चित करने के लिए पेश किया गया है;
त्वरित कार्यक्रम का समर्थन करें: तेजी से कार्यक्रम के साथ संगत, 40min परिणाम का उत्पादन कर सकते हैं;
सुपर स्थिरता: 14 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर स्थिर रखें, 10 बार दोहराया गया जमाना और पिघलना।

पता लगाने की संवेदनशीलता का मूल्यांकन

चित्र 6: येसेन के RT-qPCR प्रीमिक्स (16630ES) और सप्लायर-A के एक तुलनीय उत्पाद का उपयोग करते हुए, चार रोगजनक लक्ष्यों का एक साथ पता लगाया गया (ह्यूमन पैराइन्फ्लुएंजा वायरस HPIV2, ह्यूमन पैराइन्फ्लुएंजा वायरस HPIV4, रेस्पिरेटरी सिन्सिटियल वायरस HRVA, और राइनोवायरस RSVA)। परिणामों ने संकेत दिया कि 16630ES की पहचान संवेदनशीलता सप्लायर-A की तुलना में अधिक थी।

उत्पाद अनुशंसा

产品类型	产品名称	货号
पीसीआर एंजाइम श्रृंखला	हाईफ़ यूनिकॉन® हॉटस्टार्ट ई-टैक डीएनए पॉलीमरेज़, 5 यू/μL	10726ईएस
	हाईफ़ेयर® V रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस(200 U/μL)	11300ईएस
	यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज़ (यूडीजी/यूएनजी), हीट-लैबाइल, 1 यू/μL	10303ईएस
	म्यूरिन आरएनेज़ अवरोधक(40 U/µL)	10603ईएस
	dNTP मिश्रण (25 mM प्रत्येक)	10125ईएस
अल्ट्रा-क्लीन पीसीआर एकल एंजाइम श्रृंखला अल्ट्रा-लो होस्ट अवशेष के साथ	Hieff UCF.ME® हॉटस्टार्ट सेंसिटिव टैक डीएनए पॉलीमरेज़ (5 U/μL)	14314ईएस
	हाईफ़ेयर UCF.ME® V रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 U/μL)	14608ईएस
	UCF.ME® यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज़ (UDG/UNG), ऊष्मा-अस्थिर, 1 U/μL	14466ईएस
	यूसीएफ.ME® म्यूरिन RNase अवरोधक(40 U/µL)	14672ईएस
लियो-रेडी पीसीआर मोनोएंजाइम श्रृंखला	Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA पॉलीमरेज़, ग्लिसरॉल-मुक्त (5U/μL)	14316ईएस
	हाईफ़ेयर® V रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, ग्लिसरॉल-मुक्त(600 U/μL)	11301ईएस
	यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेस (यूडीजी), हीट-लैबाइल (1 यू/μL, ग्लिसरॉल-मुक्त)	10707ईएस
	म्यूरिन आरएनसे अवरोधक(200 यू/µएल,ग्लिसरोल-मुक्त)	10703ईएस
RT-qPCR मास्टर मिक्स	हाईफ़ेयर® C203P1 मल्टीप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR जांच किट (UDG प्लस)	16630ईएस
	हाईफ़ेयर® V मल्टीप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR जांच किट (UDG प्लस)	11899ईएस
	हाईफ़ेयर® लियो मल्टीप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR किट	11831ईएस
qPCR मास्टर मिक्स	Hieff Unicon® यूनिवर्सल TaqMan प्रो U+ qPCR मिक्स（एक ट्यूब）	16710ईएस
	Hieff Unicon® यूनिवर्सल TaqMan मल्टीप्लेक्स qPCR मास्टर मिक्स (UDG प्लस)	13891ईएस
	Hieff Unicon® सुपरप्रो Ⅰ TaqMan qPCR मास्टर मिक्स（UDG प्लस）	11827ईएस
	Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR मास्टर मिक्स（UDG प्लस）	11853ईएस
	Hieff Unicon® यूनिवर्सल TaqMan मल्टीप्लेक्स qPCR मास्टर मिक्स (UDG प्लस)	11893ईएस

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