हाल के वर्षों में, आणविक जीव विज्ञान तकनीकों के तेजी से विकास के साथ, न्यूक्लिक एसिड-आधारित निदान पद्धतियों को बड़े पैमाने पर स्थापित किया गया है और मानव रोगों के प्रयोगशाला परीक्षण में व्यापक रूप से लागू किया गया है। अन्य न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन तकनीकों की तुलना में, आइसोथर्मल प्रवर्धन तेज़, कुशल और विशिष्ट होने के लाभ प्रदान करता है, और इसके लिए विशेष उपकरणों की आवश्यकता नहीं होती है। इसलिए, इसके उद्भव के बाद से, इसे कई विद्वानों द्वारा एक ऐसी पहचान विधि के रूप में माना जाता है जो संभावित रूप से पीसीआर को टक्कर दे सकती है।

परिणामस्वरूप, यह माना जाता है कि आइसोथर्मल प्रवर्धन प्रौद्योगिकी पर आधारित नैदानिक ​​उपकरणों और किटों का विकास और अनुप्रयोग, आणविक निदान में पॉइंट-ऑफ-केयर परीक्षण (पीओसीटी) के लिए एक नई दिशा का प्रतिनिधित्व करेगा।

मुख्यधारा के आइसोथर्मल प्रवर्धन प्रौद्योगिकियों के सिद्धांतों का परिचय

1、लूप-मध्यस्थ आइसोथर्मल प्रवर्धन

(लैम्प) प्रौद्योगिकी

सिद्धांत:लूप-मध्यस्थ आइसोथर्मल प्रवर्धन (LAMP) Bst DNA पॉलीमरेज़ का उपयोग करता है, जिसमें स्ट्रैंड विस्थापन गतिविधि होती है। यह लक्ष्य जीन के छह क्षेत्रों को लक्षित करते हुए चार प्रकार के विशिष्ट प्राइमरों को डिज़ाइन करता है, जिससे आइसोथर्मल स्थितियों के तहत लक्ष्य अनुक्रम का कुशल, तेज़ और विशिष्ट प्रवर्धन संभव होता है। प्रवर्धन 60-65 डिग्री सेल्सियस के निरंतर तापमान पर किया जा सकता है, और 15-60 मिनट के भीतर, 10 का न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन होता है⁹ 10 तक¹⁰ समय प्राप्त किया जा सकता है।

लाभ और अनुप्रयोग:इस कारण इसकी तीव्र प्रतिक्रिया, उच्च विशिष्टता, सरल और संचालित करने में आसान उपकरण, और परिणाम जिनकी व्याख्या करना आसान है, आइसोथर्मल प्रवर्धन का उपयोग किसका पता लगाने में किया गया है रोगजनक बैक्टीरिया, परजीवी, वायरस, रोग और आनुवंशिक रूप से संशोधित उत्पाद. नैदानिक ​​संक्रामक रोग निदान, पर्यावरण निगरानी, ​​खाद्य सुरक्षा और अन्य क्षेत्रों में भी इसका व्यापक रूप से उपयोग किए जाने की उम्मीद है। यह आणविक पॉइंट-ऑफ-केयर परीक्षण के लिए उपयुक्त एक आदर्श विधि बन गई है (पीओसीटी) प्लेटफॉर्म पर उपलब्ध है।

वर्गीकरण:एलएएमपी पहचान विधियों को कई प्रकारों में वर्गीकृत किया गया है, जिनमें टर्बिडिमेट्री, पीएच सूचक विधियां, फ्लोरोसेंट डाई विधियां (जैसे एनएचबी, कैल्सीन, एसवाईबीआर ग्रीन, साइटो, आदि) और फ्लोरोसेंट जांच विधियां शामिल हैं।

2、रीकॉम्बिनेज पॉलीमरेज़ एम्प्लीफिकेशन (RPA) तकनीक

सिद्धांत:रीकॉम्बिनेज एंजाइम, जब प्राइमर से बंधा होता है, तो एक प्रोटीन-डीएनए कॉम्प्लेक्स बनाता है जो डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए के भीतर समजातीय अनुक्रमों की खोज कर सकता है। एक बार जब प्राइमर समजातीय अनुक्रमों का पता लगा लेते हैं, तो एक स्ट्रैंड एक्सचेंज प्रतिक्रिया होती है, जिससे डीएनए संश्लेषण का निर्माण और आरंभ होता है, जो टेम्पलेट पर लक्ष्य क्षेत्र को तेजी से बढ़ाता है। विस्थापित डीएनए स्ट्रैंड आगे के विस्थापन को रोकने के लिए सिंगल-स्ट्रैंड बाइंडिंग (एसएसबी) प्रोटीन से बंध जाता है। इस प्रणाली में, संश्लेषण घटना दो विरोधी प्राइमरों द्वारा शुरू की जाती है, जो मुख्य रूप से रीकॉम्बिनेज, बीएसयू एंजाइम और एसएसबी प्रोटीन की गतिविधियों पर निर्भर करती है। यह तकनीक 37 से 42 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 10-30 मिनट के भीतर रुचि के लक्ष्य का तेजी से पता लगा सकती है।

लाभ और अनुप्रयोग:आरपीए का दावा उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता, विशेष उपकरणों पर कम निर्भरता, और विभिन्न पहचान प्रारूपों को एकीकृत करने की क्षमता। यह जमीनी स्तर पर और फील्ड सेटिंग्स में पॉइंट-ऑफ-केयर परीक्षण के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है। RPA को इन विट्रो डायग्नोस्टिक्स, पशु रोगों, खाद्य सुरक्षा, जैव सुरक्षा, कृषि और अन्य क्षेत्रों में व्यापक रूप से लागू किया जा सकता है।

वर्गीकरण:आरपीए पहचान विधियों को कई प्रकारों में वर्गीकृत किया गया है, जिनमें जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस, ईएक्सओ जांच विधि, एफपीजी जांच विधि, पार्श्व प्रवाह डिपस्टिक (एलएफ-आरपीए), और फ्लोक्यूलेशन विश्लेषण आदि शामिल हैं।

उत्पाद प्रदर्शन प्रदर्शन

01 पीएच संवेदनशील डाई आरटी-लैंप अभिकर्मक

पीएच संवेदनशील डाई आरटी-लैम्प 60-65 डिग्री सेल्सियस की आइसोथर्मल स्थितियों के तहत एक संवेदनशील संकेतक के रूप में एक दृश्य डाई का उपयोग करता है, एक स्थिर तापमान वाले पानी के स्नान या एक मानक पीसीआर मशीन का उपयोग करके एक-चरण आरएनए न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन को पूरा करने के लिए। केवल 30 मिनट में, प्रतिक्रिया के बाद रंग में परिवर्तन का उपयोग यह निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है कि क्या कोई रोगजनक संक्रमण मौजूद है, अधिक सहज परिणामों के साथ (सकारात्मक नारंगी-पीला है, नकारात्मक मैजेंटा है)। यह विधि बड़ी आबादी के तेजी से परीक्षण के लिए उपयुक्त है।

अनुशंसित उत्पाद：

आरटी-लैंप पीएच संवेदनशील डाईस्टफ किट（13906ES）
आरटी-लैंप पीएच संवेदनशील डाई क्रोमोजेनिक संस्करण फ्रीज-ड्रायबल किट (13920ES)

प्रदर्शन प्रदर्शन:

1.आरटी-लैंप/आरपीए मिश्रण चयन गाइड

उत्पाद वर्गीकरण	आरटी-लैंप मिश्रण			आरपीए मिश्रण
प्रोडक्ट का नाम	आरटी-लैंप डाई परख किट (यूडीजी प्लस)	आरटी-लैंप पीएच संवेदनशील डाईस्टफ किट	आरटी-लैंप पीएच संवेदनशील डाई क्रोमोजेनिक संस्करण फ्रीज-ड्रायबल किट	त्वरित फ्यूज एम्पलीफायर
उत्पाद आइटम नंबर	13762ईएस	13906ईएस	13920ईएस	16702ईएस
उत्पाद श्रेणी	प्रतिदीप्त रंग करना	पीएच संवेदनशील डाई	पीएच संवेदनशील डाई	जांच
उत्पाद घटक	2 घटक बफर, एंजाइम मिश्रण	3 घटक बफर, आरटी एंजाइम, बीएसटी एंजाइम	4 घटक बफर, आरटी एंजाइम, बीएसटी एंजाइम, लियोप्रोटेक्टेंट	4 घटक बफर、एंजाइम मिश्रण、मैग्नीशियम एसीटेट
फ़्रीज़-ड्राइंग समर्थित	नहीं	हाँ, बिना लियोप्रोटेक्टेंट के	हां, इसमें लियोप्रोटेक्टेंट शामिल है	नहीं

2.एलएएमपी/आरटी-एलएएमपी एंजाइम चयन गाइड

उत्पाद वर्गीकरण	बीएसटी एंजाइम		रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस		यूडीजी एंजाइम
प्रोडक्ट का नाम	बीएसटी प्लस	लियोफिलाइज्ड बीएसटी प्लस	Ⅲ रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस	III रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, ग्लिसरॉल-मुक्त	यूडीजी	यूडीजी,ग्लिसरोल-मुक्त
उत्पाद आइटम नंबर	14402ईएस	14405ईएस	11111ईएस	11297ईएस	14455ईएस	14001ईएस
एंजाइम गतिविधि	40 यू/μएल	60 यू/μएल	200 यू/μएल	600 यू/μएल	1 यू/μएल	1 यू/μएल
उत्पाद घटक	3 घटक	2 घटक	2 घटक	एकल घटक	अकेला- अवयव	एकल घटक
फ़्रीज़-ड्राइंग समर्थित	नहीं	हाँ	नहीं	हाँ	नहीं	हाँ

3、RPA एंजाइम चयन गाइड

उत्पाद वर्गीकरण	बीएसयू	टी4 एक्स	टी4 वाई	एसएसबी	सी.के.	एक्सो
प्रोडक्ट का नाम	बीएसयू	टी4 यूवीएसएक्स	टी4 यूवीएसवाई	जीपी 32	क्रिएटिन काइनेज	एक्सोन्यूक्लिऐस III
उत्पाद आइटम नंबर	11078ईएस	11079ईएस	11080ईएस	11081ईएस	14502ईएस	14525ईएस
एंजाइम गतिविधि	5 यू/μएल	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 यू/μएल
उत्पाद घटक	एकल घटक	एकल घटक	एकल घटक	एकल घटक	एकल घटक	2 घटक
फ़्रीज़-ड्राइंग समर्थित	नहीं	नहीं	नहीं	नहीं	नहीं	नहीं