परिचालन वातावरण में एरोसोल संदूषण पीसीआर परिणामों में झूठी सकारात्मकता का सबसे आम कारण है: अमेरिकी वैज्ञानिक लिंडाहल द्वारा ई. कोली और बैसिलस सबटिलिस में यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेस (यूडीजी) की अग्रणी खोज, और डीयूटीपी के साथ यूडीजी एंजाइम के उपयोग के माध्यम से पीसीआर संदूषण रोकथाम प्रणाली की स्थापना।

व्यावसायिक रूप से उपलब्ध यूडीजी एंजाइम मुख्य रूप से दो प्रकार के होते हैं: एस्चेरिचिया कोली और बैसिलस सबटिलिस से प्राप्त नियमित यूडीजी एंजाइम और साइक्रोफिलिक समुद्री बैक्टीरिया से प्राप्त थर्मोलेबल यूडीजी एंजाइम। नियमित यूडीजी एंजाइम अधिक गर्मी प्रतिरोध प्रदर्शित करते हैं, 10 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर उपचार के बाद भी यूरैसिल-डीएनए ग्लाइकोसिलेस गतिविधि की एक छोटी मात्रा को बनाए रखते हैं, जिससे डीयू युक्त लक्ष्य प्रवर्धन उत्पादों का क्षरण हो सकता है। इसके अतिरिक्त, आणविक एंजाइमों की पुनः संयोजक अभिव्यक्ति के लिए इंजीनियर बैक्टीरिया उपभेदों (जैसे ई. कोली) के उपयोग के कारण, इन एंजाइमों में अवशिष्ट मेजबान जीनोमिक डीएनए की एक निश्चित मात्रा होती है। विनिर्माण पर्यावरण और मानव स्रोतों के प्रभावों के साथ, आणविक एंजाइम उत्पाद डीएनए संदूषण के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं। रोगजनकों का पता लगाने के दौरान, दूषित डीएनए या तो कम-प्रचुरता वाले लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड को छिपा सकते हैं या उनके साथ पता लगाया जा सकता है, जिससे परिणामों की व्याख्या प्रभावित होती है।

येसेन यूसीएफ.एमई यूरेसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज (यूडीजी/यूएनजी), ऊष्मा-अस्थिर

विवरण

यूसीएफ.एमई यूरेसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेस (यूडीजी/यूएनजी), ऊष्मा-अस्थिर, 1 यू/μएल (कैट#14466ईएस) साइकोफिलिक समुद्री बैक्टीरिया से प्राप्त, यह एक अल्ट्रा-लो अवशिष्ट ताप-अस्थिर यूडीजी एंजाइम है जिसे यूसीएफ.एमई के रूप में जाना जाता है। इस उत्पाद का उपयोग कमरे के तापमान पर डीयू-युक्त प्रवर्धन उत्पादों को खराब करने से निष्क्रियता के बाद पारंपरिक यूडीजी एंजाइमों की अवशिष्ट गतिविधि को रोक सकता है। यह आणविक एंजाइमों में मौजूद पृष्ठभूमि बैक्टीरिया को पीसीआर परिणामों में गलत सकारात्मकता पैदा करने से भी रोकता है। इसलिए, संक्रामक रोगजनकों की सटीक पहचान करने और संक्रमणों और संक्रामक रोगों के नैदानिक ​​​​निदान में सहायता करने के लिए UCF.ME® अल्ट्रा-लो अवशिष्ट थर्मोलेबल यूडीजी एंजाइम की शुरूआत महत्वपूर्ण है।

उत्पाद लाभ

  • यूसीएफ.एमई का अति-निम्न अवशिष्ट - ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए अवशेष <0.1 प्रतियां/यू;
  • कम न्यूक्लिऐस अवशेष - कोई अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐस, निकिंग एंजाइम या आरएनेज़ नहीं;
  • मजबूत पाचन क्षमता - 0.05 यू/टी 105 प्रतियां/टी डीयू-डीएनए उत्पादों को पचा सकता है;
  • अच्छी तापलनीयता - 10 मिनट के लिए 50°C, 5 मिनट के लिए 55°C, या 5 मिनट के लिए 95°C की किसी भी स्थिति में पूर्ण निष्क्रियता;
  • RT-qPCR प्रतिक्रिया प्रणालियों के साथ संगत - उच्च इनपुट स्तरों (2U/20μL प्रतिक्रिया प्रणाली) पर भी पहचान प्रणाली पर कोई प्रभाव नहीं।

(1)प्रोटीन शुद्धता≥95%

आकृति 1. प्रोटीन शुद्धता (एसडीएस-पीएजीई) जांच परिणाम

(2)कम अवशिष्ट न्यूक्लिऐसेस: कोई अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐसेस, निकिंग एंजाइम या आरएनेज़ नहीं

आकृति 2. न्यूक्लिऐस अवशेष परीक्षण के परिणाम

(3)ई. कोली जीनोमिक डीएनए अवशेष < 0.1 प्रतियां/यू,अवशेष स्तर पारंपरिक अभिकर्मक की तुलना में काफी कम थे

आकृति 3. ई.कोली जीनोमिक डीएनए अवशेष परीक्षण के परिणाम

(4)उच्च पाचन क्षमता: 0.05 यू/टी डीयू-डीएनए उत्पादों की 10^5 प्रतियां/टी को पचाने के लिए पर्याप्त है।

आकृति 4. कुल 0.05 यू यूडीजी एंजाइम 10^5 प्रतियां/टी डीयू-डीएनए उत्पादों को पूरी तरह से पचा सकता है।

(5)पाचन क्षमता मजबूत है: 0.05 यू/टी डीयू-डीएनए उत्पादों की 10^5 प्रतियां/टी को पचाने के लिए पर्याप्त है।

    चित्र 5. 50℃,10min;55℃,5min;55℃,10min;95℃,5min ताप निष्क्रियता उपचार के बाद, 14466ES ने पाचन क्षमता खो दी।

    (6)आरटी-क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली के साथ संगत, उच्च इनपुट स्तरों (2यू/टी) पर भी पहचान प्रणाली पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है।

    चित्र 6. RT-qPCR मिश्रण ORF1ab और N जीन और 14466ES के दो प्राइमिंग जांच का उपयोग करके तैयार किया गया था। जब 14466ES को 2U/20μL की मात्रा में प्रतिक्रिया प्रणाली में इंजेक्ट किया गया, तो RT-qPCR का कोई अवरोध नहीं था प्रतिक्रिया।

    उत्पाद अनुशंसा — अल्ट्रा-लो अवशिष्ट पीसीआर एंजाइम कच्चे माल श्रृंखला

    उत्पाद स्थिति

    प्रोडक्ट का नाम

    बिल्ली

    संदूषण-रोकथाम ताप-अस्थिर यूडीजी

    UCF.ME यूरेसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेस (UDG/UNG), ऊष्मा-अस्थिर, 1 U/μL

    14466ईएस

    हॉट स्टार्ट टैक डीएनए पोलीमरेज़

    Hieff UCF.ME हॉटस्टार्ट सेंसिटिव टैक डीएनए पॉलीमरेज़ (5 U/μL)

    14314ईएस

    रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस

    हाईफेयर UCF.ME V रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 U/μL)

    14608ईएस

    म्यूरिन आरएनेज़ अवरोधक

    UCF.ME म्यूरिन RNase अवरोधक(40 U/μL)

    14672ईएस

    जाँच करना