आणविक निदान तकनीक अपनी असाधारण संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण विभिन्न पहचान विधियों से अलग है। हालाँकि, पारंपरिक तरल निदान अभिकर्मकों में उच्च परिवहन व्यय और सीमित शेल्फ़ लाइफ़ जैसी कमियाँ हैं, जो उनकी उपयोगिता को बाधित करती हैं। विकसित हो रही बाज़ार की ज़रूरतों और तकनीकी प्रगति के जवाब में, लाइओफ़िलाइज़्ड आणविक निदान परीक्षण अभिकर्मक उभरे हैं। फ़्रीज़-ड्राई उत्पाद पारंपरिक तरल परीक्षण अभिकर्मकों की तुलना में कई लाभ प्रदान करते हैं, जिनमें शामिल हैं:
- कमरे के तापमान पर स्थिर - त्रि-आयामी संरचना स्थिर है, जो कमरे के तापमान पर एंजाइम और प्रतिक्रिया प्रणाली की स्थिरता सुनिश्चित कर सकती है। रेफ्रिजरेटर या कोल्ड स्टोरेज में कोल्ड चेन परिवहन और भंडारण की कोई आवश्यकता नहीं है, जो उत्पादों के शेल्फ जीवन को बढ़ा सकता है।
- प्रयोग करने में आसान- बार-बार ठंडा करने और पिघलाने, तरल निकालने आदि की आवश्यकता नहीं।
- कम लागत- कोल्ड चेन परिवहन और फ्रोजन स्टोरेज की आवश्यकता नहीं, जिससे परिवहन और भंडारण लागत में प्रभावी रूप से कमी आएगी।
- उच्चा परिशुद्धि- अभिकर्मक तैयारी के दौरान संरचना त्रुटि को कम करने, संचालन समय को छोटा करने, तरल तैयारी के दौरान जैविक गतिविधि के नुकसान को रोकने और मौलिक रूप से परिशुद्धता में सुधार करने के लिए एक प्रतिक्रिया में एक फ्रीज-सूखे माइक्रोकोर का उपयोग किया जाता है।
- लचीला उपयोग- नमूना संख्या तक सीमित नहीं, एक नमूना भी लोड किया जा सकता है।
पारंपरिक आणविक एंजाइम या प्रीमिक्स में अक्सर क्रायोप्रोटेक्टिव एजेंट और स्टेबलाइज़र के रूप में ग्लिसरीन की उच्च सांद्रता शामिल होती है। हालाँकि, अभिकर्मक में ग्लिसरीन की उपस्थिति पानी की संरचनात्मक अखंडता को बाधित कर सकती है, जिससे पानी को प्रभावी ढंग से खत्म करना चुनौतीपूर्ण हो जाता है। यह बदले में, फ्रीज-ड्राई उत्पाद की संरचना और स्थिरता पर हानिकारक प्रभाव डालता है। इसलिए, फ्रीज-ड्राईिंग का विकल्प चुनते समय, ग्लिसरॉल-मुक्त अभिकर्मकों का चयन करना उचित है।
इसके अलावा, ऐसे अनुप्रयोगों में जो विशेष रूप से अभिकर्मक संरचना के प्रति संवेदनशील होते हैं, जैसे कि डिजिटल पीसीआर, उच्च सांद्रता वाले ग्लिसरीन-मुक्त एंजाइमों का उपयोग डिजिटल पीसीआर प्रतिक्रिया पर ग्लिसरॉल के प्रभाव को और कम कर सकता है। यह दृष्टिकोण न केवल हस्तक्षेप को कम करता है बल्कि डिजिटल पीसीआर डिटेक्शन अभिकर्मक प्रणाली को अनुकूलित करने की क्षमता को भी बढ़ाता है।
YEASEN ग्लिसरॉल-मुक्त आणविक एंजाइम समाधान
YEASEN ने एक व्यापक गैर-ग्लिसरीन आणविक एंजाइम अनुसंधान एवं विकास और उत्पादन मंच की स्थापना की है, और सामग्री चयन, पर्यावरण नियंत्रण, प्रक्रिया अनुकूलन और गुणवत्ता आश्वासन के माध्यम से कई ग्लिसरॉल-मुक्त आणविक एंजाइमों का बड़े पैमाने पर उत्पादन हासिल किया है।
- डायलिसिस प्रक्रिया का परीक्षण
ग्लिसरीन एंजाइम की निश्चित मात्रा के लिए डायलिसिस प्रक्रिया का अनुकूलन:
- विभिन्न आणविक एंजाइमों के लिए इष्टतम डायलिसिस बफर की स्क्रीनिंग;
- विभिन्न आणविक एंजाइमों के लिए स्थिर भंडारण समाधान की जांच करना, ताकि 4℃ या -20℃ पर दीर्घकालिक भंडारण संभव हो सके।
- स्पर्शरेखीय प्रवाह निस्पंदन प्रक्रिया प्रवर्धन
डायलिसिस प्रक्रिया स्क्रीनिंग के आधार पर, इष्टतम डायलिसिस बफर घटक और उनके इष्टतम भंडारण समाधान निर्धारित किए जा सकते हैं। इसके बाद, समाधान बफर प्रतिस्थापन के लिए स्पर्शरेखा प्रवाह निस्पंदन प्रक्रिया (जिसे यूएफडीएफ भी कहा जाता है) का उपयोग किया जा सकता है।
स्पर्शीय प्रवाह निस्पंदन प्रक्रिया के विकास में महत्वपूर्ण कारक भंडारण समाधान सूत्र, धुलाई और निस्पंदन समाधान सूत्र, साथ ही निस्पंदन के दौरान लागू ट्रांसमेम्ब्रेन दबाव और प्रवाह दर के चुनाव के इर्द-गिर्द घूमते हैं। YEASEN ने स्पर्शीय प्रवाह निस्पंदन के लिए एक मानकीकृत दृष्टिकोण स्थापित किया है, जो लक्ष्य आणविक एंजाइम में वांछित ग्लिसरीन सामग्री के आधार पर धुलाई और निस्पंदन मात्रा और समय मापदंडों के त्वरित निर्धारण को सक्षम बनाता है। यह दृष्टिकोण सामग्री और समय दोनों पर बचत करने में मदद करता है।
- गुणवत्ता नियंत्रण
ऊपर उल्लिखित विभिन्न तैयारी प्रक्रियाओं को विभिन्न मात्राओं और उत्पाद प्रकारों के लिए विविध आवश्यकताओं को समायोजित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। विभिन्न बैचों में और एक ही प्रक्रिया के भीतर उत्पाद स्थिरता का आकलन करने के लिए, YEASEN ने एक व्यापक प्रदर्शन पैरामीटर लक्षण वर्णन प्रणाली विकसित की है। यह प्रणाली कई दृष्टिकोणों से ग्लिसरॉल-मुक्त उपायों के प्रभाव का गहन मूल्यांकन करने की अनुमति देती है। लक्षण वर्णन विधियों में प्रोटीन परिमाणीकरण, एंजाइम गतिविधि मूल्यांकन (पुनर्प्राप्ति दर), ग्लिसरीन सामग्री विश्लेषण, सुरक्षात्मक एजेंट सामग्री मूल्यांकन और एंजाइम प्रदर्शन मूल्यांकन आदि शामिल हैं।
YEASEN ग्लिसरॉल-मुक्त आणविक एंजाइम उत्पाद
YEASEN ने ग्लिसरीन रहित एंजाइम बनाने के लिए ग्लिसरीन रहित आणविक एंजाइम तैयार करने की विधि अपनाई है, ताकि शुरुआत में ग्लिसरीन युक्त एंजाइमों से ग्लिसरीन रहित एंजाइम तैयार किए जा सकें। वर्तमान में, हम qPCR/RT-qPCR और LAMP/RT-LAMP अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त ग्लिसरॉल-मुक्त एंजाइम कच्चे माल की पर्याप्त मात्रा की आपूर्ति कर सकते हैं। इन कच्चे माल को डायग्नोस्टिक परीक्षण में फ्रीज-ड्राइंग के लिए डिज़ाइन किया गया है, जबकि वे अपने तरल समकक्षों के समान गुणवत्ता और प्रदर्शन के स्तर को बनाए रखते हैं।
ग्लिसरॉल मुक्त आणविक एंजाइम उत्पाद
qPCR प्रीमिक्स का उपयोग करके तैयार किया गया येसेन 14316ES ई-टैक डीएनए पॉलीमरेज़ और इसी ग्लिसरॉल मुक्त एंजाइम, क्रमशः, और 10 का टेम्पलेट5, 104 और 103 प्रतियों/एमएल को एक ही समय में प्रवर्धित किया गया। परिणामों से पता चला कि ग्लिसरॉल-मुक्त 14316ES का प्रवर्धन प्रभाव ग्लिसरीन-युक्त के समान था समकक्ष। 14316ES का त्वरित स्थिरता परीक्षण 37 डिग्री सेल्सियस पर किया गया था। परिणामों से पता चला कि 37 डिग्री सेल्सियस पर 54 दिनों के त्वरित उपचार के बाद 14316ES का विस्तार प्रदर्शन गैर-त्वरित नियंत्रण के अनुरूप था। उपरोक्त परिणामों से पता चला कि ग्लिसरॉल-मुक्त एंजाइम और ग्लिसरीन युक्त एंजाइम के प्रदर्शन में कोई अंतर नहीं था। समकक्ष, और स्थिरता अच्छी थी।
- RT-qPCR फ्रीज-ड्राइड उत्पाद: 25 दिनों के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर त्वरित, फ्रीज-ड्राइड उत्पादों में स्थिर आकृति विज्ञान और प्रदर्शन होता है
येसेन 14316ES को RT-qPCR प्रीमिक्स्ड घोल में तैयार किया गया, जिसे फ्रीज-ड्राई किया गया और 25 दिनों के लिए 50℃ पर त्वरित स्थिरता के लिए परीक्षण किया गया। उसी समय, 105, 104 और 103 नोवेल कोरोना वायरस स्यूडोवायरस टेम्पलेट की प्रतियों/एमएल को प्रवर्धित किया गया।परिणामों से पता चला कि उत्पाद की आकृति विज्ञान, सीटी मान और प्रतिदीप्ति मान में फ्रीज-ड्राइंग से पहले और बाद में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुआ, और फ्रीज-ड्राइंग उत्पाद में अच्छी स्थिरता थी।
चित्र 4: RT-qPCR फ़्रीज़-ड्राय उत्पादों का त्वरित स्थिरता परीक्षण डेटा- RT-LAMP फ्रीज-ड्राइड उत्पाद: 30 दिनों के लिए 45 डिग्री सेल्सियस पर त्वरित, फ्रीज-ड्राइड उत्पादों में स्थिर आकृति विज्ञान और प्रदर्शन होता है
RT-LAMP प्रीमिक्स YEASEN के साथ तैयार किया गया था 14405ईएस और 11297ES, और फ्रीज-ड्राइंग के बाद प्रदर्शन परीक्षण किया गया। सकारात्मक प्रतिक्रिया छेद नारंगी था और नकारात्मक प्रतिक्रिया छेद मैजेंटा था, जो बहुत विपरीत दिखा, और परिणाम स्पष्ट रूप से व्याख्या किया गया था। इसके अलावा, 45 डिग्री सेल्सियस पर त्वरण के 30 दिनों के बाद फ्रीज-सूखे उत्पादों की आकृति विज्ञान में काफी बदलाव नहीं आया। परिणामों से पता चला कि फ्रीज-सूखे उत्पाद आकार और प्रदर्शन में स्थिर थे।
उत्पाद की जानकारी
| वर्गीकरण | एनए एम इ | सूची क्रमांक. |
| qPCR/RT-qPCR के लिए ग्लिसरॉल-मुक्त एंजाइम उत्पाद | हाईफ़ेयर™ लियो मल्टीप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR किट -11831ES | 11831ईएस |
| 14316ईएस | ||
| 11301ईएस | ||
| 10707ईएस | ||
| 10703ईएस | ||
| RT-LAMP के लिए ग्लिसरॉल-मुक्त एंजाइम उत्पाद | हाईफ़ेयर® III रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, 600U/μl, ग्लिसरॉल-मुक्त | 11297ईएस |
| लियोफिलाइज्ड बीएसटी प्लस डीएनए पॉलीमरेज़ (60 यू/μL，ग्लिसरोल-मुक्त) | 14405ईएस |