ध्यान देने योग्य बातें

1. भंडारण विधि: कमरे के तापमान पर 3 से 6 महीने तक स्थिर भंडारण; लंबी अवधि के लिए, 4°C या -20°C पर स्टोर करें।
2. डीएनए मार्कर एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन में डीएनए बैंड का विश्लेषण करने के लिए उपयुक्त है और पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन में उपयोग के लिए अनुशंसित नहीं है।
3. जेल सांद्रता और बफर समाधान का चयन:

एगरोज़ सांद्रता	प्रभावी पृथक्करण सीमा (बीपी)	अनुशंसित बफर
0.5%	2,000-50,000	1×टीएई
0.8%	800-10,000	1×टीएई
1.0%	400-8,000	1×टीएई
1.2%	300-7,000	1×टीएई
1.5%	200-3,000	1×टीएई/0.5×टीबीई
2.0%	100-2,000	1×टीएई/0.5×टीबीई
3.0%	25-1,000	0.5×टीबीई

【नोट】: बड़े टुकड़ों के लिए, कम सांद्रता वाला जेल चुनें और वैद्युतकणसंचलन के लिए TAE बफर सिस्टम का उपयोग करें; छोटे टुकड़ों के लिए, उच्च सांद्रता वाला जेल चुनें और वैद्युतकणसंचलन के लिए TBE बफर सिस्टम का उपयोग करें।

4. न्यूक्लिक एसिड दागों का चयन:

ईबी (एथिडियम ब्रोमाइड) एक अत्यधिक संवेदनशील फ्लोरोसेंट डाई है जिसकी अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 302 एनएम है, जिसका उपयोग एगरोज़ और पॉलीएक्रिलामाइड जैल में न्यूक्लिक एसिड का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है। ईबी न्यूक्लिक एसिड में बेस के साथ जुड़ता है और इसे विषाक्त माना जाता है।

येरेड (कैट#10202ES76) और येग्रीन (कैट#10204ES76) नए गैर विषैले न्यूक्लिक एसिड रंग हैं, जिनमें अद्वितीय तैलीय आणविक संरचना होती है, जो कोशिका झिल्ली को भेदकर कोशिकाओं में प्रवेश नहीं कर सकते, आसानी से वाष्पशील या उर्ध्वपातित नहीं होते, और इस प्रकार मनुष्य द्वारा सांस के माध्यम से अंदर नहीं लिए जाते, जिससे प्रयोगकर्ता की सुरक्षा सुनिश्चित होती है।एम्स परीक्षण के परिणाम यह भी दर्शाते हैं कि येरेड और येग्रीन में जेल स्टेनिंग सांद्रता पर कोई उत्परिवर्तन नहीं है, जो उन्हें अत्यधिक कैंसरकारी ईबी के लिए एक सुरक्षित और गैर-विषाक्त विकल्प बनाता है। इसके अतिरिक्त, येरेड में ईबी के समान ही वर्णक्रमीय विशेषताएँ हैं, इसलिए यह मौजूदा इमेजिंग सिस्टम को बदले बिना ईबी को पूरी तरह से प्रतिस्थापित कर सकता है।

प्रश्नोत्तर

प्रश्न 1: डीएनए मार्कर के उच्च अणुभार बैंड क्यों खिंच जाते हैं और अच्छी तरह से अलग नहीं होते?

A1: न्यूक्लिक एसिड डाई डीएनए मार्कर के साथ पर्याप्त रूप से बंध नहीं पाती है। चूंकि उच्च आणविक भार बैंड को अधिक न्यूक्लिक एसिड डाई की आवश्यकता होती है, यदि डाई संतृप्त नहीं है, तो उच्च आणविक भार बैंड माइग्रेशन प्रभावों के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं, जिससे ड्रैगिंग और खराब पृथक्करण होता है। उपयोग किए जाने वाले डीएनए मार्कर की मात्रा को कम करने की सिफारिश की जाती है (इसे पानी से 5 गुना पतला किया जा सकता है और फिर 8-10 μL लोड किया जा सकता है) या न्यूक्लिक एसिड डाई की सांद्रता को बढ़ाने के लिए।

प्रश्न 2: डीएनए के लिए कोई बैंड या कमजोर बैंड क्यों नहीं होते?

उत्तर2:

1. अपर्याप्त डीएनए लोडिंग, लोड की गई मात्रा में वृद्धि;
2. डीएनए बैंड जेल से बाहर निकल गया है;
3. ट्रैकिंग डाई द्वारा डीएनए बैंड अस्पष्ट हो जाता है;
4. जेल में न्यूक्लिक एसिड डाई नहीं मिलाया गया;
5. यदि एगरोज़ जेल को बहुत लंबे समय तक छोड़ दिया गया है, तो इसे तुरंत तैयार करके उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

प्रश्न 3: डीएनए मार्कर बैंड बिखरे हुए क्यों होते हैं?

ए3:

1. डीएनए का आंशिक क्षरण, जाँच करें कि क्या भंडारण की स्थिति बहुत गर्म है;
2. इलेक्ट्रोफोरेसिस के दौरान वोल्टेज बहुत कम होता है, जिससे डीएनए बैंड फैल जाते हैं। जेल को 110V-130 पर चलाने की सलाह दी जाती है वी 45 मिनट से अधिक समय तक;
3. एगरोज़ जेल की सांद्रता उचित नहीं है, मैनुअल में अनुशंसित जेल सांद्रता के अनुसार तैयार करें;
4. एगरोज़ जेल की गुणवत्ता खराब है, इसलिए नया एगरोज़ जेल तैयार करने की सिफारिश की जाती है।

प्रश्न 4: डीएनए मार्कर बैंड की तुलना में नमूना बैंड अलग-अलग आकार के क्यों दिखाई देते हैं?

ए4:

1. डीएनए माइग्रेशन न केवल वास्तविक आकार से संबंधित है, बल्कि यह भी है कि यह प्रोटीन, आयन अवस्था, डीएनए संरचना, जेल और अन्य कारकों के साथ संयुक्त है या नहीं। न्यूक्लिक एसिड की इलेक्ट्रोफोरेटिक माइग्रेशन दर डीएनए/डाई के अनुपात से संबंधित है, और जब न्यूक्लिक एसिड डाई की मात्रा अपर्याप्त होती है, तो इससे बड़ी माइग्रेशन दर त्रुटियाँ हो सकती हैं;
2. यदि नमूने में नमक आयनों की उच्च सांद्रता है, तो यह महत्वपूर्ण माइग्रेशन त्रुटियों का भी कारण बन सकता है;
3. यदि लोड किए गए नमूने की मात्रा डीएनए मार्कर बैंड की मात्रा से काफी भिन्न है या यदि वॉल्यूम में काफी अंतर है, तो इससे बड़ी माइग्रेशन त्रुटियां भी हो सकती हैं।

आदेश की जानकारी

उत्पाद अभिविन्यास	प्रोडक्ट का नाम	उत्पाद संख्या	विशेष विवरण
डीएनए मार्कर	गोल्डबैंड DL2000 डीएनए मार्कर	10501ईएस60/80	100 टी/10×100 टी
	गोल्डबैंड DL5000 डीएनए मार्कर	10504ईएस60/80	100 टी/10×100 टी
	गोल्डबैंड 100बीपी डीएनए लैडर	10507ईएस60/80	100 टी/10×100 टी
	गोल्डबैंड 1 केबी डीएनए लैडर	10510ईएस60/80	100 टी/10×100 टी