—अपनी उंगलियों पर ही अपनी ब्लॉट झिल्ली को रोशन करें!
ईसीएल अभिकर्मक, जिन्हें हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) के लिए केमिलीलुमिनसेंट सब्सट्रेट के रूप में जाना जाता है, वर्तमान में वेस्टर्न ब्लॉटिंग डिटेक्शन में उपयोग किए जाने वाले सबसे संवेदनशील अभिकर्मक हैं। बाजार में ईसीएल अभिकर्मकों के साथ आम मुद्दों में शमन, उच्च पृष्ठभूमि, अस्थिरता और कम-प्रचुर मात्रा वाले प्रोटीन का पता लगाने में कठिनाई शामिल है, जो अंतिम प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं।
येसेन बायोटेक ने इम्यूनोडिटेक्शन के क्षेत्र में उत्कृष्ट वैज्ञानिक शोधकर्ताओं को इकट्ठा किया है। ल्यूमिनॉल कच्चे माल की गुणवत्ता को सख्ती से नियंत्रित करके और एन्हांसर और स्टेबलाइजर्स के निर्माण में लगातार सुधार करके, हमने विभिन्न प्रयोगों की जरूरतों को पूरा करने के लिए चार प्रकार के ईसीएल अभिकर्मकों का विकास किया है। इनमें संवर्धित, अति-संवेदनशील, टिकाऊ और अति-उच्च संवेदनशीलता वाले उत्पाद शामिल हैं। वे न केवल कम से उच्च बहुतायत से लक्ष्य प्रोटीन के लिए पता लगाने की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं, बल्कि प्रयोग को प्रभावित किए बिना ल्यूमिनेसेंस तीव्रता को भी बढ़ाते हैं, जिसके परिणामस्वरूप स्पष्ट छवियां मिलती हैं।
उत्पाद की विशेषताएँ
- शानदार संवेदनशीलता — पिकोग्राम से लेकर निम्न-फेमटोग्राम स्तर तक एंटीजन का पता लगाना।
- उच्च सिग्नल-टू-शोर अनुपात — सटीक ल्यूमिनसेंट सबस्ट्रेट्स पृष्ठभूमि शोर को कम करते हैं।
- अधिक एंटीबॉडी-कुशल — उच्च एंटीबॉडी बंधन आत्मीयता के लिए अनुकूलित सब्सट्रेट सिस्टम।
- उच्च लागत-प्रदर्शन अनुपात — कम कीमत पर उच्च प्रदर्शन.
- उत्कृष्ट स्थिरता — नए ऑक्सीडेंट एक वर्ष तक 4°C पर स्थिर भंडारण सुनिश्चित करते हैं।
उत्पाद सिद्धांत
ईसीएल अभिकर्मक पहचान का मुख्य सिद्धांत ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं से उत्पन्न होने वाली चमक है: ल्यूमिनोल, ल्यूमिनसेंट सब्सट्रेट का मुख्य घटक, हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) के उत्प्रेरक के माध्यम से क्षारीय परिस्थितियों में H2O2 द्वारा ऑक्सीकृत होता है, जिससे 3-एमिनो-फथालिक एसिड का एक उत्तेजित-अवस्था मध्यवर्ती बनता है। जब यह जमीनी अवस्था में लौटता है, तो फोटॉन उत्सर्जित होते हैं, जिनकी अधिकतम उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य 425 एनएम होती है। इन फोटॉन संकेतों को एक्स-रे फिल्म या सीसीडी इमेजिंग उपकरणों द्वारा कैप्चर किया जा सकता है।
चयन गाइड
येसेन वर्तमान में चार प्रकार के ईसीएल उत्पाद प्रदान करता है, जिनमें से प्रत्येक की अपनी अनूठी विशेषताएं हैं, ताकि उपयोगकर्ताओं की इम्यूनोब्लॉटिंग अनुप्रयोगों की आवश्यकताओं को पूरी तरह से पूरा किया जा सके।
तो, आपको अपने प्रयोग के लिए कौन सा उत्पाद चुनना चाहिए?
तालिका नंबर एक।ईसीएल अभिकर्मक चयन गाइड
| येसेन | उन्नत ईसीएल उन्नत प्रकार | सुपर ईसीएल अति संवेदनशील प्रकार | सुपरड्यूरा टिकाऊ प्रकार | मैक्सी सिग्नल अति-उच्च संवेदनशीलता प्रकार |
| लागू नमूने | उच्च प्रचुरता, नियमित प्रोटीन नमूनों के साथ लक्ष्य | कम प्रचुरता, सीमित नमूनों वाला लक्ष्य | कम प्रचुरता, सीमित नमूनों वाला लक्ष्य | अत्यंत कम प्रचुरता, बहुमूल्य नमूनों वाला लक्ष्य |
| पता लगाने की संवेदनशीलता | मध्यम पिकोग्राम स्तर | कम पिकोग्राम स्तर | मध्यम फेमटोग्राम स्तर | कम फेमटोग्राम स्तर |
| सिग्नल अवधि | < 2 घंटे | < 12 घंटे | < 24 घंटे | < 8 घंटे |
| लागू पहचान प्रणाली | सभी अभिकर्मक एक्स-रे फिल्म, सीसीडी इमेजिंग उपकरणों के लिए उपयुक्त हैं | |||
| प्राथमिक एंटीबॉडी कमजोरीकरण सांद्रता | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
| द्वितीयक एंटीबॉडी कमजोरीकरण सांद्रता | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000
| 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
| अनुशंसित झिल्ली | एनसी झिल्ली | एनसी झिल्ली या पीवीडीएफ झिल्ली | एनसी झिल्ली या पीवीडीएफ झिल्ली | एनसी झिल्ली या पीवीडीएफ झिल्ली |
| संग्रहण का स्थायित्व | 1 वर्ष के लिए कमरे का तापमान | एक वर्ष के लिए 4°C, आधे वर्ष के लिए कमरे का तापमान | ||
| लाभ | समान संवेदनशीलता स्तर के बीच सबसे मजबूत संकेत | उच्चतम लागत-प्रदर्शन अनुपात, अधिकांश WB प्रयोगों के लिए उपयुक्त | सबसे लंबी सिग्नल अवधि, एकाधिक एक्सपोज़र के लिए अत्यंत उपयुक्त | उत्कृष्ट संवेदनशीलता, ट्रेस प्रोटीन का पता लगाने के लिए अत्यंत उपयुक्त |
नोट: अनुशंसित एंटीबॉडी कमजोरीकरण सांद्रता 1 मिलीग्राम/एमएल की एंटीबॉडी स्टॉक सांद्रता पर आधारित है।
उत्पाद व्यवहार्यता
येसेन ईसीएल अभिकर्मकों का उपयोग प्रभाव समान स्तर के अन्य ब्रांडों के उत्पादों की तुलना में बेहतर है।
चित्र 1. यीसेन ईसीएल अल्ट्रा-सेंसिटिव सब्सट्रेट सुपर और ब्रांड टी के समकक्ष सब्सट्रेट पिको के बीच पता लगाने के प्रभावों की तुलना।
चित्र 2. यीसेन ईसीएल अल्ट्रा-हाई सेंसिटिविटी सब्सट्रेट मैक्सीसिगनल और अन्य ब्रांडों के समकक्ष सब्सट्रेट वेस्ट फेम्टो के बीच पता लगाने के प्रभावों की तुलना।
चित्र तीन।यीसेन ईसीएल ड्यूरेबल सब्सट्रेट सुपरड्यूरा और अन्य ब्रांडों के समकक्ष सब्सट्रेट वेस्ट ड्यूरा के बीच पता लगाने के प्रभावों की तुलना।
प्रकाशित साहित्य
[1]वांग जेड, लू जेड, लिन एस, एट अल. ल्यूसीन-टीआरएनए-सिंथेस-2-एक्सप्रेसिंग बी कोशिकाएं कोलोरेक्टल कैंसर इम्यूनोएवेशन में योगदान करती हैं। इम्युनिटी। 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] वू जेड, लियू डी, पैन डी, एट अल. मिनिएचर एसिडिबैसिलस सल्फ्यूरऑक्सीडेंस कैस12एफ1 की संरचना और इंजीनियरिंग [जे]। नेचर कैटेलिसिस, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] याओ जे, वू डी, झांग सी, एट अल. मैक्रोफेज आईआरएक्स3 आहार-प्रेरित मोटापे और चयापचय सूजन को बढ़ावा देता है। नैट इम्यूनोल। 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (आईएफ:25.606)
[4] हे एक्स, ली जे, झोउ जी, एट अल. निरोधात्मक इंटरन्यूरॉन में सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी द्वारा हिप्पोकैम्पल लय और स्मृति का गेटिंग। न्यूरॉन। 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
मूल्य लाभ
चित्र 7.येसेन ईसीएल उत्पादों की कीमत की तुलना उसी स्तर के अन्य ब्रांडों के उत्पादों के साथ
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्नों
| सामने आई समस्याएं | कारण विश्लेषण | अनुशंसित समाधान |
| फिल्म में उल्टी छवियां हैं | फिल्म में उल्टी छवियां हैं | फिल्म में उल्टी छवियां हैं |
| फिल्म में भूरे या पीले रंग की पट्टियाँ होती हैं | ||
| प्रतिदीप्ति शमन | ऑपरेशन का समय बहुत लंबा है, झिल्ली धीरे-धीरे सूखती है | झिल्ली को सूखने से रोकें |
| प्लास्टिक रैप, डेवलपर या फिक्सर का संदूषण | अच्छी प्रयोगात्मक आदतें विकसित करें | |
| प्रतिक्रिया प्रणाली में अपर्याप्त एचआरपी | एचआरपी-लेबल वाली सामग्री बढ़ाएँ | |
| फिल्म पर कोई बैंड या कमजोर सिग्नल नहीं | कम स्थानांतरण दक्षता | स्थानांतरण दक्षता में सुधार करें, निर्णय के लिए पूर्व-रंजित मार्कर का उपयोग करें |
| अपर्याप्त या बेमेल एंटीजन/एंटीबॉडी | एंटीजन/एंटीबॉडी की मात्रा बढ़ाएं या उपयुक्त एंटीजन/एंटीबॉडी का चयन करें | |
| एक्स-रे फिल्म संबंधी समस्याएं | यदि एक्सपोज़र के बाद एक्स-रे फिल्म पूरी तरह से काली हो (पारदर्शी नहीं), तो यह दर्शाता है कि फिल्म पूरी तरह से एक्सपोज़ हो गई है; एक नई एक्स-रे फिल्म का उपयोग करें | |
| डेवलपर/फिक्सर मुद्दे | जांच के लिए फिल्म को पहले से एक्सपोज़ कर लें; यदि कोई समस्या हो तो उसे नए डेवलपर/फिक्सर से बदल दें | |
| प्रतिक्रिया प्रणाली में अत्यधिक एचआरपी | तनु एचआरपी-लेबल सामग्री | |
| उच्च पृष्ठभूमि | प्राथमिक और द्वितीयक एंटीबॉडी सांद्रता बहुत अधिक | एंटीबॉडी सांद्रता कम करें, अवरोधन समय बढ़ाएँ |
| एंटीबॉडीज़ को अच्छी तरह से साफ़ नहीं किया गया | धुलाई की संख्या बढ़ाएँ | |
| अपूर्ण अवरोधन | अवरोधन स्थितियों को अनुकूलित करें | |
| गलत अवरोधक एजेंट का उपयोग किया गया | किसी भिन्न अवरोधक एजेंट का उपयोग करें | |
| ओवरएक्सपोजर | एक्सपोज़र का समय कम करें | |
| ख़राब एंटीबॉडी विशिष्टता | उच्च गुणवत्ता वाले एंटीबॉडी से प्रतिस्थापित करें | |
| प्रतिक्रिया प्रणाली में अत्यधिक एचआरपी | तनु एचआरपी-लेबल सामग्री | |
| रिक्त स्थानों वाले बैंड | एंटीजन और द्वितीयक एंटीबॉडी की उच्च सांद्रता | नमूने को पतला करें और जेल को पुनः चलायें, या मिश्रित क्रोमोजेनिक घोल को ठंडा करें और इसे तत्काल तीव्र विकास के लिए झिल्ली पर लगायें। |
| अनियमित बैंड आकार | मेथनॉल के साथ स्थानांतरण या असमान जलयोजन के दौरान हवा के बुलबुले (PVDF झिल्लियों के लिए) | स्थानांतरण की स्थितियों को अनुकूलित करें. |
| फिल्म स्पॉट | एचआरपी-लेबल वाली सामग्री का समुच्चय | 0.2μm झिल्ली से HRP-लेबल वाली सामग्री को फ़िल्टर करें |
| गैर-विशिष्ट बैंड | प्रतिक्रिया प्रणाली में अत्यधिक एचआरपी | तनु एचआरपी-लेबल सामग्री |
| एसडीएस गैर-विशिष्ट प्रोटीन बंधन का कारण बनता है | प्रयोगात्मक प्रक्रिया में एसडीएस का उपयोग न करें | |
| ख़राब एंटीबॉडी विशिष्टता | उच्च गुणवत्ता वाले एंटीबॉडी से प्रतिस्थापित करें | |
| अपर्याप्त अवरोधन | ब्लॉकिंग समय बढ़ाएँ या किसी अलग ब्लॉकिंग एजेंट का उपयोग करें |
आदेश की जानकारी
| प्रोडक्ट का नाम | उत्पाद संख्या | विनिर्देश |
| सुपर ईसीएल डिटेक्शन अभिकर्मक | 36208ES60/76 | 100 एमएल/50 एमएल |
| उन्नत ईसीएल केमिलीलुमिनसेंट सब्सट्रेट किट | 36222ES60/76 | 100 एमएल/500 एमएल |
| सुपरसिग्नल सुपरड्यूरा विस्तारित अवधि सब्सट्रेट | 36223ES10/60/70/76 | 10 एमएल/100 एमएल/200 एमएल/500 एमएल |
| सुपरसिग्नल मैक्सीसिग्नल अधिकतम संवेदनशीलता सब्सट्रेट | 36224ES10/60/70/76 | 10 एमएल/100 एमएल/200 एमएल/500 एमएल |