1.पृष्ठभूमि परिचय
स्ट्रेप्टाविडिन एक बायोटिन-बाइंडिंग प्रोटीन है जो स्ट्रेप्टोमाइसेस एविडिनी से प्राप्त होता है। इसका गैर-विशिष्ट बंधन एविडिन की तुलना में बहुत कम है, और अंडे के सफेद एविडिन की तुलना में, जिसमें तटस्थ पीएच पर शुद्ध सकारात्मक चार्ज होता है और इसमें लगभग 7% कार्बोहाइड्रेट होते हैं, स्ट्रेप्टाविडिन में अधिक अनुकूल रासायनिक गुण होते हैं जैसे कि तटस्थ पीएच पर लगभग कोई शुद्ध चार्ज नहीं होता है और कोई कार्बोहाइड्रेट नहीं होता है। इसलिए, इसे एविडिन के विकल्प के रूप में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
2.उत्पाद विशेषताएँ
टेट्रामर संरचना: स्ट्रेप्टाविडिन 66KDa के आकार के साथ एक होमोटेट्रामर के रूप में मौजूद है;
उच्च आत्मीयतास्ट्रेप्टाविडिन का प्रत्येक अणु बायोटिन के चार अणुओं से अत्यधिक विशिष्ट रूप से बंध सकता है, उनके बीच अत्यंत मजबूत आत्मीयता होती है;
विस्तृत अनुप्रयोग: स्ट्रेप्टाविडिन-बायोटिन कॉम्प्लेक्स का पृथक्करण स्थिरांक नैनोमोलर रेंज में है, एक गुण जो आमतौर पर आणविक जीव विज्ञान अनुप्रयोगों में उपयोग किया जाता है; अधिकांश अनुप्रयोगों में, इसका उपयोग एंटीबॉडी प्रोटीन के साथ परस्पर रूप से किया जा सकता है;
उच्च गुणवत्ता वाला निष्कर्षण: शुद्धिकरण से प्राप्त स्ट्रेप्टोमाइसेस एविडिनी;
चित्र 1. स्ट्रेप्टाविडिन
उत्पाद आवेदन
अनुप्रयोग 1: स्ट्रेप्टाविडिन के साथ शुद्ध राल
1) आवेदन सिद्धांतस्ट्रेप्टाविडिन और बायोटिन के बीच परस्पर क्रिया के आधार पर, स्ट्रेप्टाविडिन 6% एगरोज़ से अत्यधिक क्रॉस-लिंक्ड है, और अद्वितीय तैयारी प्रक्रिया इसे उच्च भौतिक रासायनिक गुण प्रदान करती है, जिससे यह उच्च दबावों का सामना कर सकता है। यह अपेक्षाकृत उच्च प्रवाह दरों पर लक्ष्य प्रोटीन की शुद्धि प्राप्त कर सकता है, जिससे यह बड़े पैमाने पर औद्योगिक प्रोटीन शुद्धिकरण के लिए अधिक उपयुक्त हो जाता है।
चित्र 2. स्ट्रेप्टाविडिन रेजिन का शुद्धिकरण सिद्धांत
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चित्र 3. स्ट्रेप्टाविडिन रेजिन द्वारा शुद्ध किया गया प्रोटीन
3）अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न| सवाल | संभावित कारण | अनुशंसित समाधान |
| स्तंभ का पश्च दबाव बहुत अधिक है | पैकिंग अवरुद्ध है | राल को साफ करें. |
| लिसिस बफर में छोटे ठोस कण होते हैं, इसे लोड करने से पहले 0.22μm या 0.45μm फिल्टर झिल्ली के साथ फ़िल्टर करने की सिफारिश की जाती है, या हटाने के लिए अपकेंद्रित्र किया जाता है। | ||
| नमूना बहुत चिपचिपा है. | नमूने में न्यूक्लिक एसिड की उच्च सांद्रता होती है, श्यानता कम होने तक विश्लेषण समय बढ़ाएं, या DNase I (अंतिम सांद्रता 5 μg/ml), Mg मिलाएं2+ (अंतिम सांद्रता 1 mM), बर्फ पर 10-15 मिनट तक रखें | |
| बफर बहुत चिपचिपा है | कार्बनिक अभिकर्मक या प्रोटीन स्थिरीकरण अभिकर्मक (जैसे ग्लिसरॉल, आदि) पश्च दबाव बढ़ा सकते हैं, परिचालन प्रवाह दर कम कर सकते हैं। | |
| एल्यूशन घटक में गैर-उद्देश्य प्रोटीन | अत्यधिक विभाजन से वांछित प्रोटीन विकृत हो जाता है | हल्के लिसिस स्थितियों का उपयोग करें। प्रयोगात्मक स्थितियां अनुभव पर आधारित हैं। |
| लक्ष्य प्रोटीन एकत्रित होकर अवक्षेपण उत्पन्न करता है | 1-10 mM की अंतिम सांद्रता पर प्री-सेल लाइसिस घोल में DTT मिलाएं। | |
| लक्ष्य प्रोटीन पूरी तरह से निस्तारित नहीं होता | निक्षालन आयतन बहुत छोटा है | निक्षालन आयतन बढ़ाएँ और निक्षालन प्रवाह दर घटाएँ। |
| एल्यूशन बफर का pH बदल जाता है | ताजा तैयार एलुएंट का उपयोग करें | |
| एलुएंट ऊष्मायन समय पर्याप्त नहीं है | जेल के साथ क्षालन बफर के ऊष्मायन समय को बढ़ाएं। |
अनुप्रयोग 2: फ्लोरोसेंट समूह और एंजाइम संयुग्म लेबल स्ट्रेप्टाविडिन।
चित्र 4. विभिन्न संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन
1）एंजाइम संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन- हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन
Ⅰ.विशेष संयुग्मन तकनीक के माध्यम से उच्च शुद्धता वाले स्ट्रेप्टाविडिन और हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज द्वारा निर्मित;
Ⅱ.पेरोक्सिडेस की उच्च विशिष्ट गतिविधि को बनाए रखता है। अनुप्रयोग: इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी), इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री (आईसीसी), इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (आईएसएच), आदि।
अनुशंसित सांद्रता: WB (केमिलुमिनेसेंस विधि) के लिए 0.01-0.1 µg/mL; ELISA, HC/ICC, WB (सब्सट्रेट रंग विकास) के लिए 1-2 µg/mL
- क्षारीय फॉस्फेट (एपी) संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन
Ⅰ.विशिष्ट सहसंयोजक संबंध के साथ ठोस-चरण विश्लेषण, ऊतक/कोशिका अभिरंजन प्रणालियों और ब्लॉट अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त;
Ⅱ.संयुग्म स्थिर और अत्यधिक सक्रिय है।
अनुप्रयोग: इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी), इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री (आईसीसी), एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोस्पॉट परख (एलिस्पोट), एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा), इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (आईएसएच), और ब्लॉट अनुप्रयोग।
अनुशंसित सांद्रता: ELISA, IHC/ICC के लिए 1-2 µg/mL; WB के लिए 0.1-1 µg/mL
2）फ्लोरोफोर संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन- फ्लुओर® फ्लूओरेसिन संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन
1.नियमित इम्यूनोफ्लोरेसेंस के लिए अनुशंसित;
Ⅱ.अत्यधिक शुद्ध, बहुत कम गैर-विशिष्ट बंधन विशेषताओं के साथ;
Ⅲ.बायोटिन के प्रति उच्च आकर्षण;
अनुप्रयोग: इम्यूनोफ्लोरोसेंस (आईएफ), इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (आईएसएच), फ्लो साइटोमेट्री (फ्लो साइट)।
अनुशंसित सांद्रता: 0.5-2 µg/mL (IF)
- DyLight™ डाई संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन
Ⅰ.इम्यूनोफ्लोरोसेंस, इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन, या फ्लो साइटोमेट्री अनुप्रयोगों में बायोटिनलेटेड द्वितीय एंटीबॉडी और अन्य बड़े अणुओं का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है;
Ⅱ.अत्यधिक शुद्ध, बहुत कम गैर-विशिष्ट बंधन विशेषताओं के साथ;
Ⅲ.बायोटिन के प्रति अत्यंत उच्च आकर्षण;
Ⅳ.उच्च प्रकाश स्थिरता, पीएच असंवेदनशील, और उज्जवल प्रतिदीप्ति;
अनुप्रयोग: इम्यूनोफ्लोरोसेंस (आईएफ), इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (आईएसएच), फ्लो साइटोमेट्री (फ्लो साइट)।
अनुशंसित सांद्रता: 0.5-2 µg/mL (आईएफ)
उत्पाद की जानकारी
| उत्पाद श्रृंखला | उत्पाद संख्या | प्रोडक्ट का नाम | विनिर्देश |
| streptavidin | 35099ईएस | स्ट्रेप्टाविडिन (पाउडर) | 100 मिलीग्राम/1 ग्राम |
| 35101ईएस | स्ट्रेप्टाविडिन (5मिग्रा/एमएल) | 1 मिलीग्राम/5 मिलीग्राम/10 मिलीग्राम/100 मिलीग्राम/1 ग्राम | |
| एंजाइम संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन्स | 35105ईएस | एचआरपी स्ट्रेप्टाविडिन | 100 μएल |
| 35106ईएस | एपी स्ट्रेप्टाविडिन | 100 μएल | |
| फ्लोरोसेंटली लेबल स्ट्रेप्टाविडिन | 35102ईएस | डाइलाइट 405™ स्ट्रेप्टाविडिन | 100 μएल |
| 35103ईएस | वाईएसफ्लोरटीएम 488-संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन | 100 μएल | |
| 35104ईएस | वाईएसफ्लोरटीएम 647-संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन | 100 μएल | |
| 35107ईएस | वाईएसफ्लोरटीएम 584-संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन | 100 μएल | |
| 35108ईएस | Cy3-संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन | 1 मिलीग्राम | |
| स्ट्रेप्टाविडिन शुद्धिकरण श्रृंखला | 20512ईएस | स्ट्रेप्टाविडिन एगरोज़ रेज़िन 6FF | 5 एमएल/5एमएल×5/100 एमएल |
| 20513ईएस | बायोटसेप स्ट्रेप्टाविडिन 6FF क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 1ML | 1 एमएल/1एमएल×5 | |
| 20514ईएस | बायोटसेप स्ट्रेप्टाविडिन 6FF क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 5ML | 5 एमएल/5 एमएल×5 |