--
Pengikatan Fluorescein-dUTP ke DNA yang terpotong oleh TdT transferase merupakan salah satu metode yang paling umum untuk mendeteksi apoptosis, misalnya In Situ Cell Death Kit dari Roche didasarkan pada prinsip ini. Aktivitas TdT transferase dalam produk secara langsung memengaruhi efisiensi pelabelan.
Saat ini, lebih dari 120 kelompok penelitian menggunakan produk ini dan telah menerbitkan banyak artikel berbahasa Inggris di jurnal terkemuka, seperti Theranostics dan EMBO Molecular Medicine.
Mekanisme Deteksi
Pada tahap akhir apoptosis, pemutusan untai ganda atau pemutusan untai tunggal DNA kromosom menghasilkan sejumlah besar ujung 3-OH yang lengket, dan di bawah aksi transfer terminal deoksiribonukleotida (TdT), dUTP yang berlabel fluorescein/enzim diikat ke ujung 3-terminal DNA, sehingga deteksi apoptosis dapat dilakukan melalui deteksi fluoresensi, yang disebut sebagai pelabelan ujung torehan yang dimediasi oleh deoksiribonukleotida terminal transferase. Metode ini disebut Pelabelan Ujung Torehan yang Dimediasi oleh Terminal-Deoksinukleotidil Transferase (TUNEL), dan prinsipnya ditunjukkan dalam Gambar 1.
Gambar 1: Diagram skematik Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling (TUNEL)
Fitur Produk
- Berbagai macam aplikasi
Dapat digunakan untuk irisan jaringan yang tertanam dalam parafin, irisan jaringan beku, sel yang dikultur, dan sel yang diisolasi dari jaringan.
- Sensitivitas deteksi tinggi
Jumlah sel apoptosis yang sangat kecil dapat dideteksi.
- Gangguan latar belakang rendah
Rasio sinyal terhadap noise tinggi.
- Fleksibilitas observasi
Pengamatan mikroskop fluoresensi, deteksi aliran.
Presentasi data
1、Uji terowongan preadiposit tikus (3T3-L)
Gambar 2: Deteksi apoptosis preadiposit 3T3-L tikus. Baris pertama menunjukkan kontrol negatif dan baris kedua menunjukkan kontrol positif. Reagen deteksi: Cat No. 40306 TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)
2、Deteksi terowongan sampel bagian parafin
Gambar 3: LY3009120 sendiri atau dalam kombinasi dengan Vemurafenib dan Obatoclax secara efektif menunda kanker tiroid dalam model tumor cangkok subkutan. IF=8,8. Jenis sampel: jaringan tumor yang tertanam dalam parafin (diambil dari tikus telanjang). Reagen deteksi: Kit Deteksi Apoptosis TUNEL Cat No. 40307 (Alexa Fluor 488).
3. Deteksi terowongan perayapan sel
Gambar 4: Efek seng sulfat pada apoptosis sel endotel di berbagai subkelompok. Jenis sampel: HUVEC (sel endotel vena umbilikalis manusia). Reagen deteksi: Kit Deteksi Apoptosis TUNEL Cat No. 40308 (Alexa Fluor 640)
4、Flow cytometry untuk mendeteksi apoptosis
Gambar 5: Perawatan PA dapat secara efektif mengurangi terjadinya apoptosis selama pemrograman ulang. IF=3,7. Jenis sampel: Sel iPS. Reagen deteksi: Kit Deteksi Apoptosis TUNEL Cat No. 40307 (Alexa Fluor 488).
Kutipan Literatur
[1] Li C, Wang Q, Gu X, dkk. Nano komposit Se@ SiO2 berpori meningkatkan migrasi dan diferensiasi osteogenik sel induk mesenkimal sumsum tulang tikus untuk mempercepat penyembuhan patah tulang pada model tikus [J].Jurnal Internasional Nanomedicine, 2019, 14: 3845. (JIKA 4.76)
[2] Miao T, Qian L, Yu F, dkk. Efek perlindungan hidroksisafflor kuning pada cedera sel endotel arteri koroner manusia yang disebabkan oleh lipoprotein densitas rendah teroksidasi tinggi[J]. Pengembangan, 2019, 22: 581-589.(JIKA 6.208)
[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, dkk. MicroRNA-205 dikaitkan dengan disfungsi ereksi akibat diabetes melitus melalui penurunan regulasi reseptor androgen[J]. Jurnal kedokteran seluler dan molekuler, 2019, 23(5): 3257-3270.(JIKA 4.41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X, dkk. ARC mengatur nekrosis terprogram dan cedera iskemia/reperfusi miokard melalui penghambatan pembukaan mPTP[J]. Biologi Redoks, 2019, 20: 414-426.(JIKA 8.37)
[5] Li P, Hao L, Guo YY, et al. Klorokuin menghambat autophagy dan memperburuk disfungsi mitokondria dan apoptosis pada neuron tikus hipoksia[J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77(JIKA 3.40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X, dkk. Baicalin melemahkan gangguan sawar darah-otak dan transformasi hemoragik serta meningkatkan hasil neurologis pada tikus stroke iskemik dengan pengobatan t-PA yang tertunda: keterlibatan jalur ONOO−-MMP-9[J]. Penelitian Stroke Translasional, 2018, 9(5): 515-529(JIKA 4.87)
[7] Liu Q, Qian Y, Li P, dkk. Efek terapi gabungan dari mikrosfer multifungsi berlabel 131iodine yang mengandung tembaga sulfida dalam pengobatan kanker payudara[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380(JIKA 6.88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT, dkk. Knockout myostatin menginduksi apoptosis pada sel kanker serviks manusia melalui peningkatan generasi spesies oksigen reaktif [J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428(JIKA 8.37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y, dkk. Astilbin memperbaiki nefrotoksisitas yang disebabkan oleh cisplatin melalui pengurangan stres oksidatif dan peradangan[J]. Toksikologi Makanan dan Kimia, 2018, 114: 227-236(JIKA 3.78)
[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ, et al. Ekspresi berlebihan microRNA-181a mengurangi sklerosis glomerulus dan cedera epitel tubulus ginjal pada tikus dengan penyakit ginjal kronis melalui penurunan regulasi jalur TLR/NF-κB dengan mengikat CRY1[J]. Kedokteran Molekuler, 2018, 24(1): 49(JIKA 3.46)
[11] Li G, Yin Q, Ji H, dkk. Sebuah studi tentang skrining dan efek antitumor dari peptida ligan spesifik CD55 pada sel kanker serviks [J]. Desain Obat, Pengembangan dan Terapi, 2018, 12: 3899(JIKA 3.27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F, dkk. Nanomicelles yang dikendalikan oleh lingkungan mikro-tumor dengan properti AIE untuk meningkatkan terapi kanker dan pemantauan apoptosis[J]. Biomaterial, 2019, 188: 96-106.(JIKA 9.85)
[13] Li Z, Li D, Li Q, dkk. Nanopartikel pemandu korona albumin-konjugasi imunogenik rendah in situ untuk kemoterapi penargetan tumor[J]. Ilmu Biomaterial, 2018, 6(10): 2681-2693.(JIKA 5.31)
[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, dkk. Agregat perakitan mandiri titik karbon yang diinduksi ion Gd3+ yang diisi dengan fotosensitizer untuk pencitraan ganda fluoresensi/MRI yang ditingkatkan dan terapi antitumor[J]. Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063(JIKA 7.17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, dkk. 131 Mikrosfer bermuatan tembaga sulfida berlabel I untuk mengobati tumor hati melalui embolisasi arteri hati[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(JIKA 8.12 )
Pertanyaan yang Sering Diajukan
Q: Munculnya pelabelan fluoresensi non-spesifik?
1) Jaringan/sel itu sendiri memiliki kadar aktivitas nuklease atau polimerase yang tinggi, yang dapat dengan mudah menyebabkan munculnya penandaan fluoresensi yang tidak spesifik, seperti sel otot polos. Solusinya adalah dengan memperbaiki sel atau jaringan segera setelah diambil dan memperbaikinya secara memadai untuk menghentikan enzim ini menyebabkan hasil positif palsu.
2) Penggunaan fiksatif yang tidak tepat, seperti beberapa fiksatif asam, menyebabkan hasil positif palsu. Fiksatif paraformaldehida netral 4% yang baru disiapkan sangat dianjurkan.
3) Fluoresensi non-spesifik juga dapat terjadi jika waktu reaksi uji TUNEL terlalu lama dan permukaan sel atau jaringan tidak dapat dijaga tetap basah. Berhati-hatilah dalam mengendalikan waktu reaksi dan pastikan larutan reaksi uji TUNEL menutupi sampel dengan baik.
Q: Latar belakang fluoresensinya sangat tinggi?
1) Sel yang membelah dan berkembang biak dengan kecepatan tinggi, dengan tingkat transkripsi tinggi, terkadang juga menunjukkan kerusakan DNA dalam nukleus.
2) Paparan cahaya eksitasi yang berkepanjangan menyebabkan hasil positif palsu.
Q: Efisiensi pelabelan rendah?
1) Fiksasi dengan etanol atau metanol menyebabkan efisiensi pelabelan rendah.
2) Waktu fiksasi terlalu lama, sehingga tingkat ikatan silang terlalu tinggi. Sebaiknya waktu fiksasi dikurangi.
3) Bagian jaringan terlalu tebal, yang membuat efek fiksasi tidak memuaskan, dan lebih baik mengontrol dalam 10 μm.
(4) Pemadaman fluoresensi: Fluoresensi akan padam secara parah dalam 10 menit cahaya normal. Solusinya adalah menghindari pengoperasian cahaya.
Detail Produk
| Nama Produk | Nomor barang. | Spesifikasi |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |