Mitokondria
Mitokondria adalah pabrik energi sel, tempat utama fosforilasi oksidatif intraseluler dan sintesis adenosin trifosfat (ATP), yang menyediakan energi untuk aktivitas seluler. 95% energi yang dibutuhkan untuk aktivitas kehidupan seluler berasal dari mitokondria. Selain menyediakan energi untuk sel, mitokondria juga terlibat dalam proses seperti diferensiasi sel, transfer informasi seluler, dan apoptosis, serta memiliki kemampuan untuk mengatur pertumbuhan sel dan siklus sel. Oleh karena itu, pengujian seperti mitokondria dan membran mitokondria merupakan bagian penting dari studi sel.
Definisi dan pentingnya potensial membran mitokondria
Potensial membran mitokondria merupakan hasil dari distribusi muatan pada kedua sisi membran mitokondria bagian dalam dan merupakan faktor kunci dalam mempertahankan fungsi mitokondria normal. Dalam mitokondria, rantai transpor elektron menghasilkan gradien proton melalui reaksi redoks yang mendorong sintesis ATP. Stabilitas potensial membran mitokondria berhubungan langsung dengan pasokan energi sel dan status kelangsungan hidupnya. Sejumlah besar penelitian telah menunjukkan bahwa mitokondria berhubungan erat dengan apoptosis, di mana penurunan potensial transmembran mitokondria dianggap sebagai salah satu peristiwa paling awal dalam proses reaksi kaskade apoptosis. Hal ini terjadi sebelum munculnya fitur apoptosis (kondensasi kromatin, kerusakan DNA) dalam nukleus, dan setelah potensial transmembran mitokondria runtuh, apoptosis menjadi ireversibel. Dengan demikian, penurunan potensial membran mitokondria merupakan peristiwa penting dalam tahap awal apoptosis.
Prinsip Kerja Probe JC-1
JC-1 adalah pewarna fluoresensi lipid kationik, yang dapat digunakan sebagai indikator potensial transmembran mitokondria. JC-1 ada dalam dua keadaan, monomer dan multimer. Pada konsentrasi rendah, ia ada sebagai monomer, dan fluoresensi hijau dapat dideteksi, dan ketika dideteksi melalui uji aliran, ia biasanya berada di saluran FL-1 (saluran yang sama dengan FITC). Pada konsentrasi tinggi, ia ada sebagai multimer, dan cahaya merah dapat dideteksi, dan bila terdeteksi melalui uji aliran, biasanya berada di saluran FL-2 (saluran yang sama dengan PE). JC-1 juga dapat digunakan sebagai pewarna fluoresensi lipid kationik, dan dapat digunakan sebagai indikator potensial transmembran mitokondria. dan PE saluran yang sama). Karena perubahan konsentrasi JC-1, proses transisi reversibel antara monomer dan multimer terbentuk.
Pada sel normal, ketika potensial membran normal, JC-1 memasuki mitokondria melalui polaritas membran mitokondria dan membentuk multimer fluoresensi merah karena peningkatan konsentrasi, sedangkan pada sel apoptotik, potensial transmembran mitokondria mengalami depolarisasi dan JC-1 dilepaskan dari mitokondria pada konsentrasi yang lebih rendah dan dibalikkan ke bentuk monomer fluoresensi hijau. Oleh karena itu, perubahan potensial membran mitokondria dapat dideteksi dengan mendeteksi fluoresensi hijau dan merah.
Catatan: Gambar dikutip dari internet
Pesawat JC-10
JC-10, turunan dari JC-1, adalah probe yang bergantung pada potensial yang digunakan untuk menentukan potensial transmembran mitokondria melalui flow cytometry, mikroskopi fluoresensi, dan uji fluoresensi berbasis pelat mikrotiter. Pada sel yang sehat, JC-10 secara selektif terakumulasi dalam mitokondria, menghasilkan agregat merah yang menunjukkan spektrum eksitasi yang luas dan nilai emisi yang besar pada 590 nm.Namun, pada sel apoptotik dan nekrotik dengan potensi transmembran mitokondria rendah, JC-10 berdifusi keluar dari mitokondria dan menghasilkan monomer JC-10, yang mengakibatkan pergeseran ke arah emisi hijau (525 nm). Zat ini telah berhasil digunakan sebagai indikator potensi transmembran mitokondria dalam berbagai jenis sampel termasuk miosit, neuron, jaringan utuh, dan mitokondria terisolasi.
JC-10--Pengganti JC-1
- Stabilitas: JC-10 memiliki bias deteksi yang lebih rendah karena memiliki kelarutan yang lebih tinggi dan sensitivitas yang lebih tinggi dalam media berair.
- Sinyal yang ditingkatkan: JC-10 memiliki rasio sinyal terhadap latar belakang yang lebih tinggi daripada JC-1.
- Sensitivitas yang ditingkatkan: JC-10 mampu mendeteksi perubahan halus dalam hilangnya potensial transmembran mitokondria lebih baik daripada JC-1 di semua lini sel yang diuji.
- Aplikasi luas: JC-10 dapat digunakan pada hepatosit primer tikus.
- Nyaman: JC-10 kompatibel dengan penanda enzim fluoresen, pencitra sel, dan sitometer aliran.
Catatan: Perubahan potensial membran mitokondria yang disebabkan oleh komedo diukur pada sel Jurkat dengan JC-10 dan JC-1. Setelah merawat sel Jurkat dengan camptothecin (10 mM) selama 4 jam, larutan upsampling pewarna JC-1 dan JC-10 ditambahkan ke dalam sumur dan diinkubasi selama 30 menit. Intensitas fluoresensi bentuk agregat dan monomerik JC-1 dan JC-10 diukur pada Ex/Em = 490/525 nm dan 490/590 nm menggunakan pelabel enzim NOVOstar (BMG Labtech).
Analisis hasil
Saat mendeteksi monomer JC-1, lampu eksitasi dapat diatur ke 490 nm dan lampu emisi dapat diatur ke 530 nm; saat mendeteksi polimer JC-1, lampu eksitasi dapat diatur ke 525 nm dan lampu emisi dapat diatur ke 590 nm. Apoptosis dideteksi dengan flow cytometry, fluoresensi hijau dideteksi melalui saluran FL-1, dan fluoresensi merah dideteksi melalui saluran FL-2. FL-1+, FL-2+ merupakan sel normal, sedangkan FL-1+, FL-2- merupakan sel apoptosis.
Catatan: Sumber gambar adalah forum situs web Asosiasi Streamline Tiongkok
Beroperasi tanpa keraguan
T: JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Fluorescent Probe, dapatkah produk ini digunakan untuk mewarnai potongan jaringan?
A: Mencerna jaringan hidup menjadi sel-sel individual untuk memastikan aktivitas sel sebelum pewarnaan.
T: Dapatkah saya memperbaiki sel sebelum pewarnaan dengan JC-1?
J: Tidak. Pewarna JC-1 terakumulasi dalam mitokondria dengan cara yang bergantung pada potensial dan dapat digunakan untuk mendeteksi sel, jaringan, atau potensial membran mitokondria yang dimurnikan. Imobilisasi mengganggu potensial listrik, yang mengakibatkan ketidakmampuan probe untuk terakumulasi pada mitokondria dan hilangnya spesifisitas.
Q: Ada partikel agregat dalam larutan kerja JC-1 dan saya berencana untuk menghilangkannya dengan sentrifugasi sebelum pewarnaan, apakah ada parameter yang direkomendasikan untuk sentrifugasi?
A: Larutan Kerja JC-1 dapat disentrifugasi pada kecepatan 13.000 g selama sekitar 1-2 menit.
Informasi Pemesanan
| Nama Produk | Nomor barang. | Spesifikasi |
| Nomor telepon 40705ES03/08 | 1mg/5mg dosis tunggal | |
| 40707ES03/08 | 1mg/5mg dosis tunggal |