Pengantar Apoptosis
Apoptosis adalah fenomena kematian sel terprogram yang terjadi selama perkembangan sel atau ketika sel tersebut dipengaruhi oleh faktor-faktor tertentu, dan dipicu oleh regulasi gen intraseluler dan produk-produknya. Dalam jalur apoptosis, peristiwa terjadi dalam urutan kronologis, satu per satu, yang mengarah pada penyajian vesikel apoptosis, dan kemudian apoptosis terjadi. Apoptosis memainkan peran penting dalam perkembangan embrio dan morfogenesis, pemeliharaan populasi sel normal yang stabil dalam jaringan, pertahanan tubuh dan respons imun, kerusakan sel yang disebabkan oleh penyakit atau keracunan, penuaan, dan perkembangan tumor, dan memiliki nilai terapeutik yang potensial.
Prinsip Deteksi
Distribusi fosfolipid dalam membran sel normal bersifat asimetris. Fosfatidilserina (PS) terletak pada permukaan dalam membran sel dalam sel hidup, dan selama apoptosis, membran sel mengalami perubahan, dan PS dibalik dari permukaan dalam membran sel ke permukaan luar membran sel. Annexin V secara khusus mengenali PS pada permukaan sel yang mengalami apoptosis, sedangkan PS dari sel hidup terletak pada permukaan dalam membran sel dan tidak dapat mengikat secara khusus ke Annexin V.
PS sel nekrotik juga berpindah dari permukaan dalam membran sel ke permukaan luar membran sel, dan Annexin V juga mengenali PS pada permukaan sel nekrotik, sehingga Annexin V tidak dapat membedakan antara sel nekrotik dan sel apoptotik. Sebaliknya, pewarna PI mampu mengikat DNA intraseluler dan membedakan antara sel nekrotik dan sel hidup. Membran sel sel apoptotik awal dan sel hidup masih utuh, dan pewarna PI tidak dapat dengan bebas melewati membran sel untuk memasuki sel dan mengikat DNA, sehingga pewarna PI tidak dapat memberi label pada sel apoptotik dan sel hidup, sementara pewarna PI mampu melewati membran sel sel nekrotik dan mengikat DNA di dalam sel, dan pewarna PI dalam sel nekrotik akan memancarkan fluoresensi merah setelah dieksitasi oleh laser 488 nm, yang akan diterima oleh saluran yang sesuai. Jadi Annexin V dan PI dapat digunakan secara bersamaan untuk membedakan antara sel hidup, sel apoptotik awal dan sel apoptotik atau nekrotik akhir.
Gambar 2 Prinsip deteksi Annexin V / PI
Deteksi Sitometri Aliran
Panjang gelombang eksitasi maksimum FITC adalah 488 nm, panjang gelombang emisi maksimum adalah 525 nm, dan fluoresensi hijau FITC terdeteksi di saluran FL1. Panjang gelombang eksitasi maksimum kompleks PI-DNA adalah 535 nm, panjang gelombang emisi maksimum adalah 615 nm, dan fluoresensi merah PI terdeteksi di saluran FL2 atau FL3. Analisis dilakukan dengan perangkat lunak seperti CellQuest, dan plot sebaran dua warna digambar dengan FITC sebagai koordinat horizontal dan PI sebagai koordinat vertikal. Dalam percobaan umum, sel dapat dibagi menjadi tiga subpopulasi, dengan sel hidup hanya memiliki fluoresensi latar belakang intensitas sangat rendah, sel apoptosis awal hanya memiliki fluoresensi hijau kuat, dan sel apoptosis akhir memiliki pewarnaan ganda dengan fluoresensi hijau dan merah.
Gambar 3. Deteksi Flow Cytometry
Pertanyaan yang Sering Diajukan
T: Dapatkah uji apoptosis Annexin V diterapkan pada tanaman atau bakteri (prokariota)?
A: Ya, tetapi perlu menyiapkan protoplas karena sel tumbuhan atau bakteri (prokariota) mengandung dinding sel. Dosis larutan pewarna yang tepat hanya perlu merendam sel, dan waktu pewarnaan agak berbeda untuk setiap sel.
T: Bagaimana cara menilai hasil percobaan?
A: Sel hidup (Annexin V-/PI-), sel apoptosis awal (Annexin V+/PI-), sel apoptosis akhir, dan sel nekrotik menunjukkan kepositifan ganda (Annexin V+/PI+), inti telanjang (Annexin V-/PI+).
T: Apa perbedaan antara Annexin V dan TUNEL?
A: Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) adalah metode pewarnaan yang digunakan untuk mengidentifikasi lokasi fragmentasi DNA intraseluler - ciri khas apoptosis lanjut.
Pewarnaan Annexin V mengenali tahap awal apoptosis dengan mengikat residu PS yang terekspos di luar sel karena hilangnya asimetri membran sel.
T: Apakah mungkin melakukan pengujian hanya menggunakan Annexin V-FITC tanpa mendeteksi PI?
A: Ya, itu mungkin. Untuk sampel uji khusus, seperti sel darah merah tanpa inti, atau penggunaan obat Doxorubicin (Adriamycin) yang mengganggu deteksi PI, dimungkinkan untuk melakukan pengujian hanya menggunakan Annexin V-FITC dalam kedua kasus.
Detail Produk
| Nama Produk | Nomor barang. | Spesifikasi |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit Deteksi Apoptosis Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |