Dalam proses kultur sel, pencernaan sel sering diperlukan, sehingga tripsin yang digunakan untuk mencerna sel akan sangat diperlukan untuk kultur sel, dan ini juga sangat penting, yang akan memengaruhi keadaan pertumbuhan sel.

Tripsin secara garis besar dapat dibagi menjadi dua jenis, yaitu tripsin rekombinan dan tripsin non-rekombinan.

• Tripsin non-rekombinan diperoleh dari ekstraksi hewan, dengan asal hewan, dan juga merupakan penggunaan tripsin tradisional, yang umumnya ditemukan dalam sistem pencernaan hewan dan diekstraksi langsung dari jaringan pankreas sapi atau babi.
• Tripsin rekombinan diproduksi menggunakan teknologi rekombinan genetik dan bukan berasal dari hewan.

Pengenalan dan aplikasi produk

Tripsin non-rekombinan (berasal dari hewan)

Fitur produk:

Tripsin non-rekombinan (dikenal juga sebagai tripsin) adalah enzim proteolitik serin yang diekstrak dari pankreas sapi, domba, dan babi, yang secara spesifik dapat membelah ujung karboksil lisin dan arginin yang bermuatan positif, dimurnikan melalui kristalisasi ganda, dan selanjutnya disiapkan melalui teknologi kromatografi dan ultrafiltrasi, dengan asal hewan.

Karena enzim pankreas dapat bekerja pada protein transmembran dan protein dalam matriks ekstraseluler, seperti kadherin, integrin, dll., enzim tersebut sekarang umum digunakan untuk memisahkan jaringan dan sel monolapis. Meskipun tripsin dapat menghidrolisis proteolisis antarsel menjadi sel-sel terpisah, reaksi jaringan atau sel yang berbeda terhadap tripsin berbeda, dan aktivitas sel yang tersebar juga terkait dengan konsentrasi tripsin, suhu dan waktu reaksi, dan kemampuan tripsin untuk menyebarkan sel paling kuat dalam kondisi pH 7-9 dan suhu 37 °C. Penambahan EDTA ke larutan tripsin sebagai agen khelasi mengikat kalsium dan magnesium menjadi struktur enam gigi, yang dapat melemahkan adhesi sel-ke-sel dan meningkatkan perolehan tripsin terhadap ikatan peptida target yang dihidrolisis.

Aplikasi utama tripsin pada awalnya di bidang biofarmasi adalah produksi insulin, dan segera digunakan juga di bidang kultur sel lainnya. Enzim pankreas hewan umumnya digunakan dalam kultur serum, dan komposisi serta konsentrasi tripsin yang ditambahkan ke sel yang berbeda pun berbeda.

Aplikasi

1. produksi insulin dan vaksin inaktif;
2. Isolasi dan kultur sel jaringan;
3. Penggunaan klinis dan bedah;
4. Bahan pembantu pengolahan dalam industri makanan;

Tripsin rekombinan (bebas dari hewan)

Fitur produk

Tripsin rekombinan merupakan enzim yang diproduksi menggunakan teknologi rekayasa genetika, yang memiliki keunggulan berupa stabilitas yang baik, kemurnian yang tinggi, dan tidak berasal dari hewan. Dalam proses produksi biofarmasi modern, penggunaan bahan baku yang mengandung asal hewan dapat membawa sumber virus potensial yang menyebabkan penyakit zoonosis ke dalam produk, seperti BSE penyakit sapi gila, virus penyakit kaki dan mulut, dll. Untuk mengurangi sumber pencemaran, tripsin disintesis melalui teknologi rekayasa genetika, yang mengatasi risiko kontaminasi virus yang mungkin dibawa oleh tripsin babi atau sapi tradisional.

Tripsin rekombinan sebagian besar diekspresikan secara rekombinan oleh E. coli rekombinan atau sistem ragi dan dimurnikan dengan kromatografi multi-tahap, tanpa kontaminasi heterozim seperti kimotripsin. Tripsin rekombinan memiliki sifat yang sama dengan tripsin yang diekstraksi secara alami, dengan urutan asam amino yang homolog dengan urutan tripsin babi, yang secara khusus membelah gugus karboksil dalam residu lisin dan arginin dalam rantai polipeptida.Karena polusi sumbernya non-hewani dan kemurniannya tinggi, ia memiliki berbagai aplikasi dalam pengembangan farmasi, penelitian biokimia, proteomik, dan bidang lainnya.

Tripsin rekombinan arus utama di pasaran adalah tripsin babi rekombinan yang diekspresikan dalam Escherichia coli atau ragi menggunakan teknologi rekombinan DNA, dan urutan asam aminonya sepenuhnya konsisten dengan tripsin babi, dengan aktivitas dan spesifisitas yang sama seperti tripsin alami. Tripsin ini terdiri dari 223 asam amino dan mengandung 6 pasang ikatan disulfida. Enzim ini mengandung dua bentuk tripsin aktif: α-tripsin dan β-tripsin. Aktivitasnya dihambat oleh inhibitor protease serin seperti PMSF dan TLCK, khelator ion logam seperti EDTA, dll. Tripsin rekombinan digunakan dalam kultur bebas serum, dan seperti tripsin, sel yang berbeda ditambahkan dengan komponen dan konsentrasi tripsin yang berbeda.

Aplikasi

1. vaksin dan produksi insulin rekombinan;
2. Persiapan sampel jaringan untuk analisis sel;
3. terapi sel imun;
4. Produksi biofarmasi;
5. Penelitian urutan protein, struktur dan omik

Perbandingan produk secara detail

Produk	Tripsin non-rekombinan (berasal dari hewan)	Tripsin rekombinan (bebas dari hewan)
Barang	40123ES (fenol merah(-),EDTA(+)) 40124ES (fenol merah(-),EDTA(-)) 40126ES (fenol merah (+), EDTA (-)) 40127ES (fenol merah(+),EDTA(+))	40512ES 20416ES (MS-AMAN)
Sumber	Diambil dari pankreas sapi, babi, dan domba	bakteri Escherichia coli（40512ES） Pichia pastoris (20416ES)
Keamanan	Kontaminasi dengan patogen potensial	Tidak ada kontaminasi virus eksogen
Kemurnian	Lebih dari 90% larutan tripsin 1:250 adalah pengotor	Kemurnian tinggi (β-tripsin≥ 70%, α-tripsin≤20%）
Jenis sel pencernaan	Garis sel yang paling berdekatan dan melekat kuat	Garis sel yang paling berdekatan dan melekat kuat
Batasan kimotripsin	Tidak lebih dari 50 unit kimotripsin per 2500 unit tripsin.	Tidak ada kontaminasi enzim mirosinase dan pengotor lainnya
Aktivitas spesifik	≥2500 Satuan USP/mg protein	≥3800 Satuan USP/mg protein
Efek pencernaan	ketidakstabilan	Pencernaan kuat dan jumlah enzim rendah
Tingkat pemotongan sendiri	Mudah untuk memotong sendiri dan menghasilkan fragmen pemotongan sendiri, yang mempengaruhi hasil analisis spektrometri massa	Mudah untuk memotong sendiri dan menghasilkan fragmen pemotongan sendiri, yang mempengaruhi hasil analisis spektrometri massa
Cairan terlarut	Larutan HBSS dengan atau tanpa Ca2+, Mg2+	Larutan HBSS dengan atau tanpa Ca2+ dan Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL (20416ES)
Kelangsungan hidup sel	Normal	Normal
Apakah pembekuan dan pencairan diperlukan?	Ya	Ya

Selain tripsin yang paling umum digunakan dalam pencernaan sel, ada banyak jenis produk enzim pencernaan lain yang juga dapat digunakan, seperti berikut ini.

Tentang bidang aplikasi kolagenase

Kolagenase merupakan endonuklease peptidase yang secara spesifik dapat mengenali sekuens Pro-X-Gly-Pro dan membelah ikatan peptida antara asam amino netral (X) dan glisin (Gly) dalam sekuens tersebut, kolagenase merupakan satu-satunya protease yang dapat mendegradasi fibril kolagen alami dengan struktur superkoil tiga untai, dan secara efektif dapat menghidrolisis protein, polisakarida, dan lipid lain dalam matriks ekstraseluler jaringan ikat dan jaringan epitel, sehingga membuat produk ini sangat cocok untuk pencernaan jaringan.

1. Kolagenase I., umumnya digunakan sebagai persiapan sel epitel, hati, paru-paru, lemak, dan sel jaringan adrenal;
2. Kolagenase II, yang digunakan untuk persiapan sel-sel yang berasal dari jaringan seperti jantung, tulang, otot, hati, tiroid dan tulang rawan;
3. Kolagenase III, umumnya digunakan dalam persiapan sel-sel mamae;
4. Kolagenase IV, yang umumnya digunakan untuk persiapan sel pulau pankreas, atau untuk percobaan persiapan sel di mana integritas reseptor perlu dipertahankan.
5. Kolagenase V., cocok untuk isolasi sel pulau pankreas dan sel jaringan ikat.

Tentang bidang aplikasi senyawa tripsin

Accutase adalah digest sel yang mengandung aktivitas proteolitik dan kolagenase, dan merupakan pengganti sempurna untuk digest tripsin-EDTA untuk mencerna sel dari wadah kultur jaringan konvensional dan wadah kultur yang melekat. Accutase cocok untuk disosiasi jaringan dan isolasi sel, karena sel yang diisolasi mempertahankan antigen permukaan yang utuh dan tidak mengandung komponen yang berasal dari hewan atau bakteri, yang dapat memenuhi persyaratan percobaan selanjutnya seperti pelabelan permukaan sel, analisis pertumbuhan virus, flow cytometry, dan pengujian terkait bioreaktor.

Bidang aplikasi pengganti enzim pankreas

Produk enzim PerfCell Tryzyme™ Express sangat murni, memiliki sedikit kerusakan sel, mudah dicerna, dan dapat disimpan secara stabil pada suhu ruangan, sehingga menjadikannya enzim pencernaan yang ideal untuk berbagai kultur lini sel. Jenis produk ini tidak memerlukan penggunaan inhibitor tripsin untuk inaktivasi, dan tidak mengandung bahan asal hewan, yang lebih cocok untuk beberapa eksperimen sel yang tumbuh tanpa serum.

Tentang area aplikasi pembuangan

Dispase II Dispase II, suatu metaloproteinase non-spesifik, umumnya digunakan dalam biologi sel untuk mengisolasi sel tunggal dari berbagai jaringan atau organ, dan digunakan dalam kultur sel berikutnya, seperti isolasi sel primer, pengoperan sel, dll., dan juga dapat digunakan untuk menghilangkan agregasi sel yang terjadi selama kultur sel suspensi. Dibandingkan dengan protease lain yang umum digunakan dalam biologi sel (misalnya, tripsin, kolagenase, pronase, dll.), enzim ini memiliki keunggulan sebagai berikut:

1. Enzim pencernaan sel yang cepat, efektif, dan lembut, dengan sedikit kerusakan pada sel, dan dapat menjaga integritas membran sel;
2. Berasal dari bakteri, tidak terkontaminasi mikoplasma atau virus hewan lainnya;
3. Stabilitas yang kuat, tidak terpengaruh oleh suhu, pH dan komponen serum;
4. Dapat digunakan untuk mengisolasi berbagai jenis jaringan dan sel.

Rekomendasi produk terkait

Nomor katalog	Nama Produk	Ukuran
40123ES60	PerfCel™l Tripsin-EDTA (0,25%), Fenol merah	100 ml air
40124ES60	PerfCell™ Trypsin-tanpa EDTA (0,25%), tanpa fenol merah	100 ml air
40126ES60	PerfCell™ Tripsin (0,25%), fenol merah	100 ml air
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0,25%), Fenol merah	100 ml air
40101ES25	Tripsin 1:250 (bubuk)	25 gram
40512ES10/60	PerfCell™ Tripsin Rekombinan (serbuk)	10mg/100mg dosis tunggal
nomor 20416ES60	Tripsin Rekombinan (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Ekspres	100 ml air
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Ekspres	100 ml air
40506ES60	MENUNTUT	100 ml air
40104ES60/80	Buang II	100mg/1 gram