Mikoplasma, juga dikenal sebagai organisme mirip pleuropneumonia (PPLO), adalah prokariota terkecil dan paling sederhana yang ditemukan sejauh ini yang tidak memiliki dinding sel. Mereka memiliki diameter 0,1 hingga 0,3 μm, dapat melewati filter, dan menunjukkan pleomorfisme yang tinggi. Mereka adalah kontaminan bakteri yang relatif umum dan sulit dideteksi dalam kultur sel mamalia.
Kontaminasi mikoplasma memiliki banyak efek buruk pada kultur sel dan telah menjadi masalah serius dalam praktik kultur sel. Diperkirakan secara konservatif bahwa tingkat kontaminasi mikoplasma dalam kultur sel rutin berkisar antara 15% hingga 35%, yang secara serius mengganggu kredibilitas hasil eksperimen.
Sekitar 95% kontaminasi mikoplasma dalam kultur sel terutama disebabkan oleh Acholeplasma laylawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma orale, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hominis, dan Mycoplasma hyorhinis. Pada media kultur, koloni mikoplasma membentuk tampilan seperti 'telur goreng'. Supernatan kultur sel dan membran sel menyediakan lingkungan yang cocok untuk pertumbuhan mikoplasma, dan mikoplasma yang menjadi parasit pada permukaan sel dapat menembus membran sel inang.
Sumber utama kontaminasi mikoplasma meliputi: media kultur sel atau komponen-komponennya (seperti bahan baku untuk media, serum, dan reagen lainnya), personel laboratorium, inkubator kultur sel, tangki penyimpanan nitrogen cair, partikel dan aerosol di udara, penggunaan antibiotik berlebihan, kultur sel yang tidak disegel dengan benar, dan sel-sel yang sudah terkontaminasi mikoplasma.
Sementara itu, bahaya yang ditimbulkan oleh kontaminasi tersebut meliputi: menyebabkan pembuangan massal produk sel atau produk yang diproduksi menggunakan sel sebagai media karena ketidakmampuan menghilangkan mikoplasma secara efektif selama pemurnian hilir; mencemari semua peralatan dan fasilitas terkait, serta produk antara atau akhir yang bersentuhan dengan bahan yang terkontaminasi; menyebabkan sel-sel normal lainnya terkontaminasi oleh mikoplasma; menyebabkan pembuangan bank benih sel atau virus yang penting karena kontaminasi mikoplasma; memaksa laboratorium untuk menghentikan produksi atau operasi eksperimental guna mengatasi kontaminasi mikoplasma; menyebabkan berkembangnya resistansi mikoplasma, sehingga semakin sulit untuk dihilangkan; memperluas area kontaminasi mikoplasma; dan menimbulkan ancaman bagi kultur sel lain di laboratorium.
Oleh karena itu, pengujian dan penghilangan mikoplasma secara teratur harus dilakukan untuk memastikan tidak ada mikoplasma yang hadir dalam sistem kultur sel, yang penting untuk kemajuan normal penelitian ilmiah.
Mikoplasma Deteksi
Mikoplasma merupakan jenis kontaminasi yang relatif umum tetapi biasanya sulit dihilangkan. Untuk proses biologis yang melibatkan kultur sel, peraturan mengharuskan bahwa 'tidak boleh ada kontaminasi mikoplasma.'
- Edisi 2020 dari Farmakope Cina, Volume III, 'Persiapan dan Kontrol Kualitas Substrat Sel Hewan untuk Produksi dan Pengujian Produk Biologis,' menetapkan bahwa untuk sel yang digunakan dalam produksi, pengujian mikoplasma harus dilakukan pada Bank Sel Induk (MCB), Bank Sel Kerja (WCB), dan Sel Akhir Produksi (EOPC).
- FDA, Panduan untuk Industri: Karakterisasi dan Kualifikasi Substrat Sel dan Bahan Biologis Lainnya yang Digunakan dalam Produksi Vaksin Virus untuk Indikasi Penyakit Menular, menetapkan bahwa pengendalian mikoplasma harus dilakukan pada bahan mentah, benih virus, cairan panen yang belum diproses, dan bahan lainnya.
- ICH Q5D, 'Derivasi dan Karakterisasi Substrat Sel yang Digunakan untuk Produksi Produk Bioteknologi/Biologi,' juga menyebutkan bahwa pengendalian mikoplasma harus dilakukan pada bahan mentah, benih virus, cairan panen yang belum diproses, dan bahan lainnya.
Gambar 1 Titik pengujian kontaminasi Mycoplasma yang diwajibkan oleh peraturan domestik dan internasional
Metode deteksi mikoplasma tradisional terutama mencakup metode kultur dan metode sel indikator. Namun, karena siklus deteksi yang panjang atau masalah sensitivitas dari kedua metode ini, hal tersebut menyebabkan siklus produksi atau rilis produk yang diperpanjang bagi perusahaan. Dengan perkembangan terapi sel dan gen, persyaratan industri untuk ketepatan waktu dan sensitivitas deteksi mikoplasma menjadi semakin ketat. Masa simpan yang pendek tidak cukup untuk mendukung periode deteksi yang begitu lama, itulah sebabnya metode NAT (Pengujian Asam Nukleat) yang cepat telah menonjol di antara berbagai metode deteksi mikoplasma.
Gambar 2 Metode deteksi mikoplasma yang tercantum dalam peraturan domestik dan internasional
Berdasarkan NAT (teknik amplifikasi asam nukleat),
Produk ini digunakan untuk deteksi kualitatif cepat potensi kontaminasi mikoplasma dalam bahan baku produksi, bank sel, benih virus, cairan panen virus atau sel, dan sel terapeutik. Produk ini terutama digunakan dalam proses penelitian, pengembangan, produksi, dan pelepasan biofarmasi.
Kualifikasi Produk
Kepatuhan terhadap Peraturan: Divalidasi sesuai dengan persyaratan farmakope EP2.6.7, JP G3, dan USP 63, memenuhi standar organisasi resmi internasional.
Kepatuhan Audit: Produksi produk mematuhi standar sistem manajemen mutu ISO13485 dan didukung oleh dokumentasi audit yang komprehensif.
Jaminan Kualitas: Semua bahan baku enzim yang dibutuhkan untuk kit ini diproduksi sendiri dan telah diindustrialisasi, sehingga menjamin pasokan yang stabil.
Akumulasi Pengalaman Teknis: Ada dasar teknis yang kuat dalam metode TaqMan, dan sensitivitas kit dapat mencapai 10 CFU/mL dan di bawahnya.
Fokus pada Kinerja Produk: Pustaka antibodi enzim Taq, dengan antibodi pemblokiran ganda, meningkatkan spesifisitas, sensitivitas, dan stabilitas kit.
Fitur Produk
Beberapa Jenis Deteksi: Probe TaqMan yang dioptimalkan dapat mendeteksi hingga 183 spesies mikoplasma.
Mudah digunakan: Total waktu untuk persiapan dan pengujian sampel kurang dari 3 jam, menghilangkan perlunya waktu tunggu 28 hari yang terkait dengan metode kultur.
Sensitivitas Tinggi: Batas deteksinya serendah 10 CFU/mL, menjadikannya alternatif yang layak untuk metode kultur langsung.
Spesifisitas Tinggi: Primer dan probe dirancang dengan menargetkan 16S rRNA, memastikan tidak ada reaksi silang dengan spesies yang berkerabat dekat seperti clostridia dan lactobacilli.
Keamanan Tinggi: Kontrol positif (PC) dalam kit tersebut tidak bersifat infeksius, sehingga sepenuhnya menghilangkan risiko kontaminasi.
Ketahanan Interferensi Kuat: Pengenalan kontrol internal (IC) membantu menyingkirkan gangguan sampel dan kelainan dalam persiapan reaksi, sehingga secara efektif menghindari hasil negatif palsu.
Gambar 3 Alur Kerja untuk Deteksi Mikoplasma Menggunakan Kit Deteksi qPCR Real-time Mikoplasma
2.Kit Deteksi Mikoplasma Satu Langkah MycAway™ Plus-ColorProduk ini menggunakan teknologi amplifikasi isotermal yang unik, yang menawarkan diskriminasi warna yang lebih tinggi. Perubahan dari biru-ungu (negatif) menjadi biru langit (positif) lebih mudah dilihat oleh mata telanjang. Selain itu, produk ini juga dilengkapi komponen anti-kontaminasi untuk menghilangkan terjadinya positif palsu.
Gambar 4: Prosedur Operasi untuk Mendeteksi Mikoplasma Menggunakan Kit Deteksi Mikoplasma Satu Langkah MycAway™ Plus-Color
3.GMyc-PCR Mikoplasma DeteksiPeralatanTidak seperti metode deteksi PCR satu langkah konvensional, jumlah primer ditingkatkan dari satu pasang menjadi tiga pasang, yang menargetkan daerah yang dilestarikan dari rRNA 16S dan 23S mycoplasma untuk amplifikasi PCR bertingkat. Hal ini tidak hanya mengurangi produk yang tidak spesifik tetapi juga meningkatkan sensitivitas produk secara signifikan, sehingga memungkinkan deteksi hanya satu salinan mycoplasma.
[Bahasa Indonesia]
Gambar 5 Prosedur Operasional Deteksi Mycoplasma Menggunakan GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit
Penghapusan Mikoplasma
Dalam proses kultur sel, pengujian rutin dapat secara efektif mencegah kontaminasi mikoplasma dalam skala besar. Namun, jika sel-sel tersebut sudah terkontaminasi dengan mikoplasma, sel-sel tersebut perlu segera ditangani. Praktik terbaik adalah mensterilkan sel-sel yang terkontaminasi di bawah tekanan tinggi dan kemudian membuangnya untuk menghindari kontaminasi pada lini sel bersih lainnya. Jika sel-sel yang terkontaminasi sangat berharga dan perlu untuk menghilangkan kontaminasi mikoplasma, kombinasi antibiotik dapat digunakan untuk mencapai tujuan ini. Karena mikoplasma tidak memiliki dinding sel, antibiotik tradisional umumnya tidak efektif terhadapnya. Oleh karena itu, pemilihan reagen penghilang mikoplasma yang tepat sangatlah penting.
Fitur Produk
Toksisitas Rendah: Toksisitas minimal terhadap sel, memastikan tidak ada gangguan pada percobaan sel berikutnya seperti transfeksi dan uji viabilitas.
Stabilitas Tinggi: Reagen dapat disimpan dalam jangka waktu lama pada suhu -20°C dan tetap mempertahankan efikasinya yang tinggi.
Mudah digunakan: Cukup tambahkan produk ke media kultur yang terkontaminasi mikoplasma dan inkubasi.
Bertindak Cepat: 'Hasil Langsung,' dengan efek yang terlihat secepat dalam 3 hari.
Spektrum Luas: Mampu menghilangkan sebagian besar jenis mikoplasma yang ditemukan di laboratorium.
Gambar 6.Ilustrasi Uji Sitotoksisitas Reagen Penghilang Mikoplasma
Pencegahan Mikoplasma
Dalam proses kultur sel, kontaminasi mikoplasma sering terjadi. Akan tetapi, karena karakteristiknya yang unik, sulit untuk mendeteksinya dengan mata telanjang atau peralatan mikroskopis. Oleh karena itu, pencegahan mikoplasma sangat penting untuk dilakukan dengan baik. Pencegahan kontaminasi mikoplasma yang efektif dapat dicapai dengan menambahkan reagen pencegahan mikoplasma ke dalam media kultur.
Saat ini, mikoplasma di laboratorium terutama berasal dari: kontaminasi silang antar sel, kontaminasi lingkungan kerja atau peralatan laboratorium, teknik aseptik yang buruk oleh peneliti, media kultur atau reagen yang terkontaminasi, dan jaringan atau organ asli yang terkontaminasi mikoplasma. Rangkaian produk pencegahan mikoplasma yang dikembangkan oleh
Informasi Produk
| Produk | Nomor Katalog | Nama Produk | spesifikasi produk |
| Contoh kit pra-perawatan | 18461ES | 25T/100T | |
| 18467ES | Kit Persiapan Sampel MolPure® Mag48 FN | 3×16T/ 6×16T | |
| Instrumen ekstraksi asam nukleat | 80511ES | Ekstraktor Asam Nukleat Otomatis 48-Saluran | 48 Saluran |
|
Kit Deteksi Mikoplasma | 40619ES | Kit Deteksi qPCR Real-time Mycoplasma MycAway® (2G)
| 25T/100T |
| 40612ES | 25T/100T | ||
| 40601ES | 10 pengujian/20 pengujian | ||
| Reagen Penghilang Mikoplasma | 40607ES | MycPergiWaktu Standar Perawatan (1000×) - Reagen Penghilang Mikoplasma | 1ml/5×1ml
|
|
Reagen Pencegahan Mikoplasma | 40608ES | MycPergiWaktu Standar Profilaksis (2000×) - Reagen Pencegahan Mikoplasma | 1ml/5×1ml
|
| 40605ES | MycPergiWaktu Standar Semprotan (Siap pakai) | 500ml/2×500ml/10×500ml
| |
| 40609ES | Penjaga MycWaktu Standar-1 Larutan (100×), untuk Mendisinfeksi Bak Air Inkubator CO2 | 100 ml | |
| 40610ES | Penjaga MycWaktu Standar-2 Larutan (500×), untuk Mendisinfeksi Bak Air Biasa | 100 ml |