Transfeksi sel adalah teknik untuk memasukkan asam nukleat eksogen (seperti DNA, mRNA, siRNA, miRNA, dll.) ke dalam sel, dan memainkan peran penting dalam penelitian biomedis modern. Seiring dengan penelitian ilmiah yang terus mendalam, permintaan akan berbagai jenis sel juga semakin beragam, mulai dari sel HEK293 umum hingga jenis sel tumor dan sel primer khusus, masing-masing dengan karakteristik dan persyaratannya yang unik. Demikian pula, berbagai jenis asam nukleat juga memerlukan strategi transfeksi khusus untuk memastikan pengiriman gen yang efisien dan aman. Oleh karena itu, memilih reagen transfeksi yang tepat sangat penting untuk keberhasilan percobaan.
Reagen transfeksi kimia merupakan alat yang sangat diperlukan dalam penelitian biologi sel, yang memasukkan asam nukleat seperti DNA, mRNA, siRNA, miRNA, dll., ke dalam sel melalui berbagai mekanisme untuk mencapai ekspresi gen, pembungkaman, atau studi fungsional. Saat ini, reagen transfeksi kimia yang umum digunakan terutama meliputi reagen transfeksi liposom, reagen transfeksi PEI, dan reagen transfeksi kalsium fosfat, masing-masing dengan keunggulan unik dan skenario yang dapat diterapkan.
Tabel 1: Apa perbedaan antara reagen transfeksi kimia yang berbeda?
| Kategori Produk | Prinsip | Keuntungan | Kekurangan |
| Reagen transfeksi liposom | 1. Reagen transfeksi liposom memiliki lipid bermuatan positif yang mengikat asam nukleat bermuatan negatif untuk membentuk kompleks lipid-asam nukleat. 2. Kompleks ini tertarik ke membran sel yang bermuatan negatif. 3. Sel menelan kompleks ke dalam endosom melalui endositosis. 4. Efek "spons proton" dari lipid dalam kompleks mencegah pengasaman endosom, yang menyebabkan destabilisasi dan pecahnya membran, melepaskan kompleks ke dalam sitoplasma. 5. Asam nukleat kecil seperti siRNA, miRNA, atau mRNA dapat bekerja di sitoplasma, sementara DNA perlu memasuki nukleus untuk diekspresikan. 6. Setelah berada di dalam nukleus, DNA ditranskripsi menjadi mRNA dan diterjemahkan menjadi protein, yang mengekspresikan gen asing. | 1. Reagen transfeksi liposom menawarkan efisiensi tinggi dengan berbagai lini sel, termasuk sel primer yang sulit ditransfeksi. 2. Serbaguna, kompatibel dengan sel yang melekat maupun sel yang tersuspensi, dan berbagai asam nukleat seperti DNA, siRNA, dan miRNA. 3. Reagen ini bekerja dengan baik dalam media yang mengandung serum, menghindari kebutuhan untuk menghilangkan serum dan dengan demikian meminimalkan kerusakan sel. | 1. Reagen transfeksi liposom dapat bersifat racun bagi sel, terutama pada konsentrasi tinggi atau dalam jangka waktu lama, yang berpotensi memengaruhi kelangsungan hidup dan fungsi sel. 2. Biayanya lebih mahal dibandingkan metode tradisional seperti transfeksi kalsium fosfat. 3. Aplikasi in vivo terbatas karena pembersihan serum, akumulasi dalam jaringan paru-paru, dan potensi menyebabkan respons peradangan yang kuat dan toksisitas tinggi. |
| PEI reagen transfeksi | 1. PEI, polimer bermuatan positif, mengikat DNA bermuatan negatif untuk membentuk kompleks PEI-DNA melalui interaksi elektrostatik. 2. Kompleks ini menempel pada membran sel yang bermuatan negatif. 3. Sel menelan kompleks PEI-DNA melalui endositosis, membentuk endosom. 4. Efek "spons proton" dari PEI menyebabkan endosom membengkak dan pecah dalam lingkungan asam, melepaskan kompleks ke dalam sitoplasma. 5.Di dalam sitoplasma, ikatan PEI-DNA putus, yang memungkinkan DNA memasuki nukleus, tempat ia ditranskripsi dan diterjemahkan menjadi protein. | 1. Reagen transfeksi PEI membentuk kompleks stabil dengan DNA, meningkatkan efisiensi transfeksi. 2. Memiliki sitotoksisitas yang lebih rendah dibandingkan polimer kationik lainnya, sehingga dapat menjaga kelangsungan hidup dan fungsi sel. 3. Reagen PEI menawarkan solusi hemat biaya, terutama untuk transfusi skala besar seperti produksi vektor virus. 4. Reagen PEI tersedia dalam tingkat GMP untuk produksi klinis dan komersial, menjamin kualitas dan kepatuhan. | 1. Reagen transfeksi PEI memiliki fleksibilitas terbatas, terutama digunakan untuk DNA dan kurang efektif dengan asam nukleat lain seperti mRNA, siRNA, dan miRNA. 2. Mereka menunjukkan efisiensi tinggi pada jenis sel tertentu, seperti sel HEK293, untuk pengemasan virus dan ekspresi protein, tetapi berkinerja buruk pada sel yang sulit ditransfeksi. |
| Reagen transfeksi kalsium fosfat | 1. DNA/kalsium fosfat membentuk ko-presipitasi dalam penyangga HEPES dengan fosfat, tempat muatan negatif DNA mengikat ion kalsium positif. 2. Sel menelan ko-presipitat ini, yang menempel pada permukaannya, melalui endositosis, suatu langkah krusial untuk efisiensi transfeksi. 3. Di dalam sel, ko-presipitat melepaskan DNA, yang dapat menyebabkan ekspresi sementara atau integrasi stabil ke dalam genom. | 1. Transfeksi kalsium fosfat hemat biaya, cocok untuk laboratorium dengan anggaran terbatas. 2. Mudah dilakukan, hanya memerlukan langkah-langkah sederhana dan keterampilan teknis minimal. 3. Dapat digunakan untuk ekspresi protein sementara dan pembuatan garis sel yang stabil. | 1. Efisiensi transfeksi kalsium fosfat bervariasi dan sensitif terhadap faktor-faktor seperti pH dan kemurnian DNA, yang dapat menyebabkan kegagalan transfeksi, terutama dengan DNA yang tidak murni. 2. Tidak cocok untuk semua jenis sel, terutama digunakan untuk sel HEK293, dan kurang efektif untuk sel primer dan beberapa jenis sel lainnya. |
Penerapan Luas: Mampu mentransfeksi DNA plasmid, siRNA, miRNA, dan mRNA secara efisien.
Efisiensi Transfeksi Tinggi: Efisiensi transfeksi sel melebihi 90%, memenuhi kebutuhan ko-transfeksi beberapa plasmid.
Terverifikasi di Berbagai Lini Sel: Menunjukkan efisiensi transfeksi yang baik pada lebih dari 40 lini sel yang berbeda.
Berbagai Macam Aplikasi: Digunakan untuk konstruksi garis sel yang stabil, ekspresi protein sementara, dan pengemasan virus AAV dan LV.
Frekuensi Sitasi Tinggi dalam Literatur: Dikutip dalam lebih dari 400 publikasi berdampak tinggi, dengan total faktor dampak melebihi 3000+.
Cara memilih reagen transfeksi yang sesuai dengan kebutuhan Anda
Mengingat persyaratan khusus untuk efisiensi transfeksi dan kondisi pada berbagai jenis sel dan asam nukleat (seperti DNA, mRNA, siRNA, dll.), pemilihan reagen transfeksi yang tepat sangat penting untuk keberhasilan percobaan. Berdasarkan kebutuhan khusus percobaan, pilih reagen transfeksi yang dapat mengoptimalkan efisiensi transfeksi dan meminimalkan sitotoksisitas untuk memastikan keakuratan data percobaan dan keandalan hasil percobaan.
Presentasi Kasus
Dalam sistem pelat 6 sumur, plasmid yang mengekspresikan GFP ditransfeksi ke dalam sel HEK293 menggunakan
Dalam pelat 12 sumur, sel HEK293 ditransfeksi dengan total 1 μg DNA plasmid; dengan menggunakan 3 μL reagen transfeksi, dimungkinkan untuk berhasil melakukan ko-transfeksi dua plasmid.
Kasus Pelanggan
Divalidasi di berbagai lini sel, dengan jangkauan aplikasi yang lebih luas.
| Sel | Sel | Sel | Sel | Sel |
| 293F | Caco2 | HEK293T | LM3 | NIH-3T3 |
| 293T | CHO-K1 | HEK293 | MCF10A | PC12 |
| 3t3 | COS-7 | HeLa | MCF-7 | Raw264.7 |
| 5-8F | DF-1 | Hepatitis 3B | MDA-MB-231 | RKO |
| Nomor telepon A549 | H520 | Hepa 1-6 adalah | MEF | SGC-7901 |
| BV-2 | H9 | HepG2 | MKN-28 | SMCC7721 |
| Bahasa Indonesia: C2C12 | H9c2 | Universitas Ho Chi Minh | N2A | Benar |
| C6 | HaCaT | Lenti X-293T | NCI-H1975 | HCT116 |
| WRL-68 | THP-1 | MDCK | Hepatitis 2C | Lagi… |
Daftar Produk
| Nomor kucing | Nama Produk | Asam nukleat | Aplikasi |
| 40802ES | DNA | Reagen transfeksi liposom berkinerja tinggi | |
| 40804ES | LV | Meningkatkan kemampuan infeksi lentivirus. | |
| 40806ES | siRNA, miRNA, ASO | Reagen transfeksi spesifik siRNA dan miRNA dengan efisiensi knockdown yang tinggi. | |
| 40808ES | DNA, siRNA, miRNA | Reagen transfeksi liposom yang ditingkatkan yang dapat melakukan transfeksi DNA dan RNA dalam berbagai jenis sel, masih menunjukkan efek yang baik pada sel-sel yang sulit ditransfeksi. | |
| 40809ES | Bahasa Indonesia: | Reagen transfeksi spesifik mRNA dengan efisiensi transfeksi tinggi dalam berbagai jenis sel. | |
| 40815ES | DNA | Berlaku secara luas untuk ekspresi protein dan pengemasan virus (bentuk bubuk). | |
| 40816ES | Hieff Trans®Polietilenimina Linier (PEI) MW40000(lisis cepat) | DNA | |
| 40820ES | DNA | Reagen transfeksi khusus untuk pengemasan virus, mampu mencapai hasil lebih tinggi untuk pengemasan virus AAV dan LV | |
| 40821ES | DNA | ||
| 40823ES | DNA | Efisiensi transfeksi tertinggi. Sangat cocok untuk produksi AAV dalam kultur suspensi, menghasilkan hasil yang lebih tinggi. |
Dikutip dalam beberapa publikasi berdampak tinggi, memastikan kualitas (daftar sebagian referensi yang dikutip)
- Liang X, Gong M, Wang Z, dkk. Kompleks LncRNA TubAR dengan TUBB4A dan TUBA1A untuk meningkatkan perakitan mikrotubulus dan mempertahankan mielinisasi. Cell Discov. 2024;10(1):54. Diterbitkan 21 Mei 2024. doi:10.1038/s41421-024-00667-y. JIKA=33,5(40808ES)
- Wang A, Chen C, Mei C, dkk. Penginderaan imun bawaan terhadap disfungsi lisosomal mendorong berbagai gangguan penyimpanan lisosomal. Nat Cell Biol. 2024;26(2):219-234. doi:10.1038/s41556-023-01339-x.JIKA=21,3(40802ES)
- Liu H, Zhen C, Xie J, dkk. TFAM merupakan reseptor autofagi yang membatasi peradangan dengan mengikat DNA mitokondria sitoplasma. Nat Cell Biol. 2024;26(6):878-891. doi:10.1038/s41556-024-01419-6.JIKA=21,3(40802ES)
- Wang WW, Ji SY, Zhang W, dkk. Desain berbasis struktur modulator reseptor apelin non-hipertrofik. Sel. 2024;187(6):1460-1475.e20. doi:10.1016/j.cell.2024.02.004.JIKA=64,5(40802ES)
- Ke J, Pan J, Lin H, dkk. Penargetan Mikrolipofagi yang Dimediasi Rab7-Rilp Mengurangi Toksisitas Lipid pada Kardiomiopati Diabetik. Adv Sci (Weinh). Diterbitkan daring pada 5 Juni 2024. doi:10.1002/advs.202401676.JIKA=15.1(40806ES)
- Jiang L, Xie X, Su N, dkk. RNA fluoresensi pergeseran Stokes besar untuk pencitraan fluoresensi emisi ganda dan bioluminesensi dalam sel hidup. Nat Methods. 2023;20(10):1563-1572. doi:10.1038/s41592-023-01997-7.JIKA=48(40802)
- Lou M, Huang D, Zhou Z, dkk. Onkoprotein virus DNA HPV18 E7 secara selektif menghambat aktivasi imun bawaan yang dipicu oleh cGAS-STING. J Med Virol. 2023;95(1):e28310. doi:10.1002/jmv.28310.JIKA=20,69(40802ES)
- Su J, Shen S, Hu Y, dkk. SARS-CoV-2 ORF3a menghambat aliran autofagi dan fungsi antivirus yang dimediasi oleh cGAS-STING. J Med Virol. 2023;95(1):e28175. doi:10.1002/jmv.28175.JIKA=20.69(40802ES)
- Lu YY, Zhu CY, Ding YX, dkk. Sefarantin, pengatur keap1-Nrf2, menghambat pertumbuhan kanker lambung melalui stres oksidatif dan jalur metabolisme energi. Cell Death Discov. 2023;9(1):450. Diterbitkan 12 Desember 2023. doi:10.1038/s41420-023-01752-z.JIKA=7(40806ES)
- Li X, Zhang Y, Xu L, dkk. Sensor ultrasensitif mengungkap lanskap spasiotemporal metabolisme laktat dalam fisiologi dan penyakit. Cell Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002.JIKA=31.373(40802ES)
- Li X, Zhang Y, Xu L, dkk. Sensor ultrasensitif mengungkap lanskap spasiotemporal metabolisme laktat dalam fisiologi dan penyakit. Cell Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002.JIKA=31.373(40804ES)
- Huang Y, Motta E, Nanvuma C, dkk. CCL18 yang berasal dari mikroglia/makrofag pada manusia meningkatkan perkembangan glioma melalui sumbu CCR8-ACP5 yang dianalisis dalam model irisan yang dihumanisasi. Cell Rep. 2022;39(2):110670. doi:10.1016/j.celrep.2022.110670.JIKA=8,8(40804ES)
- Chai Q, Yu S, Zhong Y, dkk. Fosfolipid fosfatase bakteri menghambat piroptosis inang dengan membajak ubikuitin. Sains. 2022;378(6616):eabq0132. doi:10.1126/science.abq0132.JIKA=63.714(40802ES)
- Liu R, Yang J, Yao J, dkk. Kontrol optogenetik fungsi dan metabolisme RNA menggunakan protein pengikat RNA yang dapat dialihkan melalui cahaya. Nat Biotechnol. 2022;40(5):779-786. doi:10.1038/s41587-021-01112-1.JIKA=54.908(40802ES)
- Chen S, Chen G, Xu F, dkk. Pengobatan asma eosinofilik alergi melalui rekayasa sel T reseptor antigen chimeric yang ditambatkan pada IL-5. Cell Discov. 2022;8(1):80. Diterbitkan 16 Agustus 2022. doi:10.1038/s41421-022-00433-y.JIKA=38.079(40804ES)