Latar Belakang – Apa itu ROS
Spesies oksigen reaktif (ROS) adalah produk normal metabolisme sel - molekul bioaktif yang mengandung oksigen, termasuk peroksida, superoksida, radikal hidroksil, oksigen singlet dan α-oksigen, dll., yang memainkan peran regulasi penting dalam jalur pensinyalan sel dan transkripsi, seperti apoptosis, autofagi, penuaan, kanker, dll.
Efek konsentrasi ROS pada sel – mengapa mendeteksi ROS?
Pada tingkat spesies oksigen reaktif yang rendah, ROS terlibat dalam pensinyalan dan regulasi intraseluler sebagai "pembawa pesan redoks". Namun, di bawah tekanan lingkungan (misalnya, radiasi pengion, paparan panas, sinar ultraviolet, hipoksia, dll.), tingkat ROS meningkat secara dramatis, yang dapat menyebabkan kerusakan DNA, menghambat ekspresi gen, menyebabkan kesalahan pelipatan protein, dan bahkan memengaruhi sintesis protein, yang menyebabkan kerusakan parah pada struktur seluler, yang dikenal sebagai stres oksidatif.
Setelah kadar ROS melebihi kapasitas pertahanan antioksidan endogen, keseimbangan redoks terganggu, yang menyebabkan perubahan struktural atau konformasi dalam DNA, lipid, protein, dan akhirnya kematian sel.
Tingkat ROS merupakan sinyal penting kerusakan sel yang disebabkan oleh fungsi fisiologis normal dan faktor lingkungan, dan deteksi tingkat ROS intraseluler sangat penting untuk memahami jalur pensinyalan dan mekanisme potensial aksi beberapa obat. Oleh karena itu, pemilihan probe yang tepat untuk mendeteksi ROS memainkan peran penting dalam penelitian mekanisme penyakit dan penyaringan obat.
Bagaimana cara kerja deteksi ROS?
Itu Kit Uji Spesies Oksigen Reaktif (CAT# 50101ES01) adalah metode yang paling umum digunakan untuk mengukur kadar spesies oksigen reaktif intraseluler berdasarkan perubahan intensitas fluoresensi pewarna fluoresensi DCFH-DA (2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate).
DCFH-DA sendiri tidak memiliki fluoresensi dan dapat melewati membran sel dengan bebas, dan setelah memasuki sel, dapat dihidrolisis oleh esterase intraseluler untuk menghasilkan DCFH. Namun, DCFH tidak dapat menembus membran sel, sehingga memudahkan probe untuk diberi label dan diagregasi di dalam sel. Spesies oksigen reaktif intraseluler mampu mengoksidasi DCFH non-fluoresensi untuk membentuk DCF fluoresensi. Intensitas fluoresensi hijau DCF berbanding lurus dengan tingkat spesies oksigen reaktif intraseluler, dan tingkat spesies oksigen reaktif intraseluler dapat diketahui dengan mendeteksi fluoresensi DCF.
Di bawah kondisi panjang gelombang eksitasi 488 nm dan panjang gelombang emisi 525 nm, fluoresensi DCF dideteksi oleh mikroskop fluoresensi, mikroskop konfokal laser, spektrofotometer fluoresensi, pembaca mikroplat fluoresensi, flow cytometer, dll., untuk menentukan tingkat spesies oksigen reaktif intraseluler.
Literatur yang diterbitkan oleh pelanggan yang menggunakan produk ini (beberapa contoh)
Hingga September 2022, total 164 artikel telah diterbitkan dalam kit deteksi spesies oksigen reaktif ROS (50101ES01), dengan total faktor dampak 913,72.
Efek produksi ROS pada polarisasi makrofag dan pembunuhan sel tumor （PMID: 35665496; PMID: 35301299; ID PMC: PMC8931093ID PMC: PMC9353410.
Tanya Jawab Umum
Q1: Sampel mana yang cocok untuk pengujian ROS?
A1: Umumnya digunakan untuk mendeteksi sel mamalia, dan hanya cocok untuk mendeteksi spesies oksigen reaktif dalam sel hidup atau in vivo.
Q2: Apakah alat uji ROS cocok untuk deteksi dalam serum atau plasma?
A2: Tidak cocok untuk mendeteksi ROS dalam serum atau homogenat jaringan. Suspensi sel tunggal yang disiapkan dari jaringan segar dapat dicoba.
Q3: Apakah tanaman atau bakteri dapat dideteksi?
A3: Hanya cocok untuk mendeteksi spesies oksigen reaktif dalam sel hidup atau in vivo, karena waktu paruh radikal hidroksil dan radikal superoksida oksigen sangat pendek, dan hanya cocok untuk mendeteksi sel hidup. Tanaman atau bakteri, yang dapat digunakan untuk deteksi setelah persiapan protoplas, kit ini tidak dapat mendeteksi ROS in vivo.
Q4: Bagaimana saya dapat menghindari latar belakang fluoresensi yang berlebihan?
A4: Setelah inkubasi probe, pastikan untuk membersihkan sisa probe yang belum masuk ke dalam sel.
Q5: Dapatkah saya mendeteksi jumlah ROS dalam sel normal?
A5: Kandungan spesies oksigen reaktif dalam sel normal sangat rendah, dan efek deteksinya mungkin tidak terlalu bagus.
Q6: Nilai fluoresensi negatif dan positif sama, apa yang terjadi?
A6: Mungkin disebabkan oleh konsentrasi probe yang ditambahkan terlalu besar, disarankan untuk mengurangi konsentrasi probe sebesar 5-7,5 μM dan waktu inkubasi: 15-20 menit.
Q7: Fluoresensi kontrol positif lemah, apa yang terjadi?
A7: Kontrol positif Rosup biasanya terkonsentrasi pada 100 μM, dan peningkatan signifikan spesies oksigen reaktif diamati 30 menit-4 jam setelah stimulasi. Efek kontrol positif spesies oksigen reaktif dapat sangat bervariasi di antara sel yang berbeda. Jika peningkatan ROS tidak diamati dalam waktu 30 menit setelah stimulasi, waktu induksi dapat diperpanjang atau konsentrasi Rosup dapat ditingkatkan dengan tepat.
A8: Probe yang sama, tidak terbagi, 5 kali pertama efeknya sangat bagus, kali ini tidak diwarnai, apa masalahnya?
Q8: 1. Kondisi sel tidak baik, sehingga efisiensi pewarnaan rendah; 2. Waktu induksi obat positif terlalu pendek, dan kadar spesies oksigen reaktif dapat ditingkatkan secara signifikan dengan menginkubasi pada suhu 37°C dalam gelap selama 30 menit-4 jam; 3. Probe telah dibekukan dan dicairkan lebih dari 4 kali, efisiensi pewarnaan berkurang, dan sinyal fluoresensi tidak stabil (terkadang kuat, terkadang lemah, dan mudah padam). Sebaiknya probe dibagi dan disimpan dalam freezer bersuhu -20°C yang terlindung dari cahaya untuk menghindari siklus beku-cair yang berulang.
Q9: Instrumen apa yang dapat digunakan untuk pengujian?
A9: Mikroskop fluoresensi, mikroskop konfokal laser, spektrofotometer fluoresensi, pembaca mikroplat fluoresensi, sitometer aliran, dll. dapat mendeteksi nilai fluoresensi.
Publikasi penelitian ilmiah yang diterbitkan oleh pelanggan yang menggunakan produk ini (sebagian)
[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Hidrogel Berbasis Mikroalga untuk Penyakit Radang Usus dan Kecemasan serta Depresi yang Terkait. Adv Mater. 26 Januari 2024: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Diterbitkan dalam bentuk elektronik sebelum dicetak. PMID: 38277492. JIKA: 29,4
[2] Zhang M, dkk. Perekrutan Sel Imun dengan Pembungkaman Cahaya pada Eksosom Berasal dari NK (LASNEO) untuk Pemberantasan Tumor Sinergetik. Adv Sci (Weinh). Agustus 2022;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Terbit secara elektronik 4 Juni 2022. JIKA: 16.806
[3] Zhang D, dkk. Mikroorganisme pembawa oral berbasis mikroalga untuk homeostasis mikrobiota usus dan perlindungan usus pada pasien kanker radioterapi. Nat Commun. 2022 Mar 17;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. JIKA: 14.919
[4] Jiao D, dkk.BMSC terstimulasi oksida grafen tereduksi yang bersifat biokompatibel menginduksi percepatan remodeling tulang dan pergerakan gigi ortodontik melalui peningkatan osteoklastogenesis dan angiogenesis. Bioact Mater. 6 Februari 2022; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. JIKA: 14.593
[5] Guo G, dkk. Terapi Kemodinamik Selektif-Ruang Nanokubus CuFe5O8 untuk Infeksi Terkait Implan. ACS Nano. 27 Oktober 2020;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Terbit elektronik 22 September 2020. PMID: 32931252. JIKA: 14.588
[6] Yang C, dkk. Terapi Fotodinamik dan Fototermal yang Diperantarai Nanorod TiO2 Berhiaskan Fosfor Merah untuk Karsinoma Sel Ginjal. Small. 2021 Jul;17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 Jun 19. PMID: 34145768. JIKA：13.281
[7] Xiaolu Chen, dkk. Nanopartikel penghantar amplifikasi kaskade yang dienkapsulasi oleh jaringan fenolik logam mengatasi resistensi obat kanker melalui kombinasi kelaparan/kemodinamik/terapi kemoterapi. Jurnal Teknik Kimia. Agustus 2022; 442:136221. JIKA: 13.273
[8] Hao Ding, dkk. Sel punca mesenkimal yang dienkapsulasi dalam hidrogel suntik pemulung spesies oksigen reaktif dan penghasil O2 untuk pengobatan infark miokard. Jurnal Teknik Kimia. 2022.133511:1385-8947. JIKA: 13.273
[9] Yu H, dkk. Nanokatalis rangkap tiga dengan suplai O2 yang dapat diaktifkan dengan laser dan peningkatan fototermal untuk terapi katalitik yang efektif terhadap tumor hipoksia. Biomaterial. 2022 Jan; 280:121308. PMID: 34896860. JIKA: 12.479
[10] Sun D, dkk. Nanoformulasi berbasis siklodekstrin menghasilkan pemberian bersama ginsenosida Rg3 dan quercetin untuk kemoterapi-imunoterapi pada kanker kolorektal. Acta Pharm Sin B. 2022 Jan;12(1):378-393. PMID: 35127393. JIKA: 11.614
[11] Xiong Y, dkk. Nanopartikel biopolimer yang dapat diaktifkan secara spesifik terhadap tumor yang distabilkan oleh obat pendahulu pati etil hidroksi untuk terapi kanker kooperatif yang diperkuat sendiri. Theranostics. 1 Januari 2022;12(2):944-962. PMID: 34976222. JIKA: 11.556
[12] Gao J, dkk. "Nano-boat" supramolekul yang ditargetkan pada mitokondria secara simultan menghambat metabolisme energi ganda untuk kemoterapi-radioterapi selektif tumor dan sinergis. Theranostics. 1 Januari 2022;12(3):1286-1302. PMID: 35154487. JIKA: 11.556
[13] Zhong D, dkk. Mikroalga fotosintetik hasil rekayasa kalsium fosfat untuk melawan hipoksia-tumor dengan modulasi hipoksia in situ dan radiofototerapi bertingkat. Theranostics. 22 Januari 2021;11(8):3580-3594. PMID: 33664849. JIKA: 11.556
[14] Sun J, dkk. Sitotoksisitas abu terbang hasil pembakaran sampah kota padat yang distabilkan/dipadatkan. J Hazard Mater. 15 Februari 2022;424(Pt A):127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Terbit elektronik 29 September 2021. PMID: 34879564. JIKA: 10.588
[15] Zhu C, dkk. Hidrogel termosensitif multifungsi untuk memodulasi lingkungan mikro pada Osteoartritis dengan mempolarisasi makrofag dan membersihkan RONS. J Nanobiotechnology. 2022 Mei 7;20(1):221. JIKA: 10.435
[16] Pan X, dkk. Nanosfer seng oksida untuk penyingkiran hidrogen sulfida dan ferroptosis pada kanker kolorektal. J Nanobiotechnology. 27 November 2021;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. JIKA: 10.435
[17] He J, dkk. Nanoshell emas-perak meningkatkan penyembuhan luka akibat infeksi bakteri yang resistan terhadap obat dan memungkinkan pemantauan melalui pencitraan hamburan Raman yang ditingkatkan permukaannya. Biomaterial. 2020 Mar; 234:119763. PMID: 31978871. JIKA: 10.317
[18] Cheng Q, dkk. Nanoterapi mengganggu homeostasis redoks seluler untuk terapi fotodinamik yang sangat baik. Biomaterial. Desember 2019; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Terbit secara elektronik, 17 September 2019. PMID: 31557591. JIKA: 10.273
[19] Zhong D, dkk. Kubik α agregat yang dipicu laser-Fe2O3@Au nanokomposit untuk pencitraan resonansi magnetik dan terapi sinergis fototermal/radiasi yang ditingkatkan. Biomaterial. 2019 Okt; 219:119369. PMID: 31351244. JIKA: 10.273
[20] Sun C, dkk. Eliminasi selenoksida memanipulasi stres oksidatif untuk meningkatkan kemanjuran antitumor. Biomaterials. Desember 2019; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Terbit elektronik 24 September 2019. PMID: 31569018. JIKA: 10.273
Produk yang direkomendasikan
| Nama Produk | Nomor katalog | Ukuran |
| 50101ES01 | 1 Kit (1000 tes) |