Diagnosis yang akurat dimulai dengan transkripsi terbalik

- RT-qPCR didukung oleh reverse replikasi yang sangat efisien transkriptase

Reverse Transcriptase (enzim RT) merupakan enzim yang mampu mengubah cetakan RNA menjadi DNA komplementer (cDNA). Dalam penelitian biologi molekuler, reverse transcriptase banyak digunakan, terutama dalam bidang diagnostik molekuler. Melalui proses reverse transcription, genom RNA virus dapat diubah menjadi cDNA, yang kemudian dapat diamplifikasi dan dideteksi menggunakan teknik seperti qPCR. Karakteristik ini memungkinkan diagnosis virus RNA yang akurat, seperti HIV, influenza A, dan influenza B.

Gambar 1. Diagram skema proses transkripsi balik

Pencarian reagen diagnostik molekuler RT-qPCR yang lebih cepat, lebih sensitif, dan lebih mudah dioperasikan telah menjadi tren utama pengembangan saat ini. Sebagai salah satu bahan baku utama dalam proses RT-qPCR, reverse transcriptase perlu memiliki kecepatan reverse transkripsi yang lebih cepat, hasil sintesis yang lebih tinggi, dan ketahanan panas yang lebih baik. Untuk mendapatkan reverse transcriptase yang lebih cocok untuk RT-qPCR, Yeasen telah mengembangkan HifairWaktu Standar serangkaian transkriptase terbalik melalui modifikasi genetik berdasarkan M-MLV, yang menampilkan aktivitas RNase H yang lebih rendah, stabilitas termal yang lebih tinggi, dan kemampuan sintesis berkelanjutan yang lebih kuat.

Gambar 2. Skema tindakan transkripsi terbalik

Hifair™Transkriptase Terbalik

Yeasen memiliki berbagai macam HifairWaktu Standar reverse transcriptase, dan dapat menyediakan berbagai bentuk produk, termasuk enzim dan premix, Anda dapat memilih sesuai dengan kebutuhan aktual. Tabel berikut mencantumkan karakteristik dan aplikasi yang direkomendasikan dari berbagai Yeasen transkriptase terbalik.

Tabel 1 Pedoman pemilihan dari Hifair™ Transkriptase Terbalik

Nama Produk (Nomor Produk) )

Fitur produk

Aplikasi yang direkomendasikan

HifairWaktu Standar III terbalik transkriptase (11111ES)

Stabil secara termal (hingga 65°C), cocok untuk templat yang kompleks

RT-LAMPU

HifairWaktu Standar V terbalik

transkriptase (11300ES)

Kompatibilitas yang kuat, kecepatan cepat, dan hasil sintesis tinggi

Satu langkah RT-PCR/qPCR

Catatan: Semua enzim yang disebutkan di atas tersedia dalam formulasi konsentrasi tinggi atau non-gliserol.

Kami sekarang menyoroti reverse transcriptase yang digunakan dalam reagen diagnostik molekuler RT-qPCR: HifairWaktu Standar V Reverse Transcriptase. Enzim ini dibedakan berdasarkan kompatibilitasnya yang kuat, kecepatannya yang tinggi, dan hasil sintesisnya yang tinggi, yang mampu bertahan pada suhu reaksi hingga 58°C. Enzim ini sangat cocok untuk pengembangan reagen diagnostik molekuler RT-qPCR.

Demonstrasi kinerja Hifair™ V transkriptase balik

1.Mampu menahan suhu reaksi 58°C, sangat cocok untuk transkripsi balik templat RNA kompleks.

    Gambar 3. Transkriptase Balik HifairWaktu Standar V Reverse Transcriptase dan merek T* diinkubasi pada suhu 55℃ dan 58℃ masing-masing selama 30 menit untuk mendeteksi aktivitas enzim yang tersisa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa HifairWaktu Standar V Reverse Transcriptase masih dapat mempertahankan aktivitas 70% setelah inkubasi pada suhu 58℃ selama 30 menit, yang jauh lebih tinggi daripada merek T*.

    2. Tingkat deteksi RT-qPCR lebih baik dibandingkan merek lainBahasa Indonesia:dan tKisaran deteksi adalah 1 pg-1 μg.

    Gambar 4. Menggunakan 1 pg-1 μg (7 gradien) total RNA dari sel 293T sebagai templat, transkripsi balik dilakukan menggunakan HifairWaktu Standar V one-step RT-gDNA digestion SuperMix untuk qPCR (Cat#11142), V*, T*. cDNA yang diperoleh dianalisis secara kuantitatif dengan qPCR. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sensitivitas 11142ES dapat mencapai 1 pg, yang lebih baik daripada merek lain.

    Mutasi transkriptase terbalik Perpustakaan Yeasen

    Yeasen terus mempromosikan evolusi transkriptase balik dengan ini adalah ZymeEditorWaktu Standar platform. Sejauh ini, kami telah menyaring berbagai mutan transkriptase balik dengan kinerja luar biasa dalam berbagai aplikasi, yang dapat sepenuhnya memenuhi kebutuhan berbagai kelompok pelanggan dalam berbagai bidang aplikasi.

    Tabel 2. Itu Panduan Seleksi Mutasi Transkriptase Terbalik dari Yeasen

    Produk yang Direkomendasikan

    Klasifikasi Produk

    Nama Produk

    Nomor Katalog.

    Seri enzim PCR kinerja tinggi

    Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq DNA Polimerase, 5 U/μL

    10726ES

    Hifair™ V Transkriptase Terbalik (200 U/μL)

    11300ES

    Urasil DNA Glikosilase (UDG/UNG), 1 U/μL

    14455ES

    Penghambat RNase Murine (40 U/µL)

    10603ES

    Campuran dNTP (masing-masing 25 mM)

    10125ES

    Pertanyaan