1. Bagaimana mencegah RNA terdegradasi?

2. Apa itu inhibitor RNase?

3. Apa fungsi RNase Inhibitor?

4. Apa saja fitur Inhibitor Murine RNase?

5. Produk terkait dan kinerja

6. Produk Terkait

7. Pertanyaan yang Sering Diajukan

1. Bagaimana mencegah RNA terdegradasi?

RNase berperan penting dalam metabolisme asam nukleat dan dapat ditemukan di hampir semua jenis prokariota dan eukariota. RNase disekresikan dalam cairan tubuh seperti air mata, air liur, dan keringat untuk melindungi diri dari invasi mikroorganisme, dan RNase juga terdapat dalam serpihan kulit. Namun, sumber utama RNase di sebagian besar lingkungan adalah mikroorganisme, yaitu bakteri, dan jamur. RNase sangat sulit dinonaktifkan dan menunjukkan stabilitas tinggi, ketahanan terhadap panas, ketahanan terhadap asam, dan ketahanan terhadap alkali. Setelah denaturasi termal, RNase dapat dengan cepat mendapatkan kembali struktur aslinya. RNase biasanya sangat aktif dan tersebar luas di sel dan jaringan eukariotik dan prokariotik. RNA dalam sampel dapat terdegradasi sepenuhnya hanya dengan sedikit kontaminasi RNase. Kontaminasi RNase dalam penelitian dapat berasal dari sumber internal dan eksternal. RNase dalam sel terutama merupakan sumber kontaminasi endogen, sedangkan sumber eksogen meliputi persediaan eksperimen, lingkungan laboratorium, dan peneliti itu sendiri. RNase, terutama anggota keluarga RNase A, adalah protein kecil dan padat yang mengandung beberapa residu sistein yang mampu membentuk banyak ikatan disulfida intramolekuler. Setelah kembali ke suhu ruangan, tanpa adanya agen denaturasi, RNase yang terdenaturasi akan mengembalikan struktur alaminya dan beberapa fungsi. Oleh karena itu, RNase mempertahankan aktivitas yang cukup besar setelah siklus beku-cair berulang, bahkan setelah autoklaf. Sifat stabil enzim ini membuatnya tahan terhadap banyak metode dekontaminasi, yang biasanya memerlukan metode kimia agresif untuk menghilangkan RNase dari permukaan dan larutan.

Untuk menghindari degradasi RNA yang rentan, tindakan pencegahan khusus harus dilakukan saat bekerja dengan RNA. Untuk mengendalikan RNase eksogen, operator perlu mengenakan sarung tangan selama percobaan, dan mengganti sarung tangan setelah menyentuh kulit, gagang pintu, dan permukaan benda biasa. Dan operator perlu menggunakan pipet khusus untuk operasi RNA, dan menggunakan ujung dinding bebas RNase, tabung sentrifus, senyawa, dan reagen. Jauhkan dari atau tutupi lubang ventilasi dan jendela yang terbuka, dan gunakan area yang jarang dilalui sebagai area bebas RNase. Dan selama ekstraksi dan analisis RNA, jangan melakukan eksperimen lain yang dapat menyebabkan kontaminasi RNase.
Metode penghambatan aktivitas RNase endogen pertama-tama adalah dengan mengawetkan sampel. Setelah jaringan diambil sampelnya, RNA tidak boleh langsung diekstraksi. Sebaliknya, RNA harus segera dibekukan dan disimpan dalam lingkungan -80°C dengan nitrogen cair, dan percobaan harus dilakukan sesegera mungkin untuk meminimalkan degradasi RNA.Inhibitor RNase ditambahkan ke lisat sel untuk secara bersamaan memecah sel dan menonaktifkan RNase, meminimalkan aktivitas RNase yang dilepaskan selama kerusakan sel. Semua reagen dan peralatan harus diperlakukan khusus untuk menonaktifkan RNase sebelum digunakan.

Selain itu, inhibitor RNA dapat digunakan untuk menghambat aktivitas RNase dan mencegah degradasi RNA oleh RNase. Ada beberapa jenis penghambat RNA:

• Dietil pirokarbonat (DEPC): Ini adalah penghambat RNase yang kuat tetapi tidak lengkap. Ini mendenaturasi protein melalui kombinasi cincin imidazol histidin dalam kelompok gen aktif RNase, sehingga menghambat aktivitas enzim.
• Guanidine isothiocyanate: Saat ini dianggap sebagai penghambat RNase yang paling efektif, ia juga dapat menonaktifkan RNase sambil melisiskan jaringan, yang dapat menghancurkan struktur sel dan memisahkan asam nukleat dari nukleoprotein, dan juga memiliki efek tertentu pada RNase. Efek denaturasi yang kuat.
• Kompleks vanadyl ribonucleoside: kompleks yang dibentuk oleh ion vanadium oksida dan nukleosida, yang dapat bergabung dengan RNase untuk membentuk analog transisi, hampir sepenuhnya menghambat aktivitas RNase.
• Protein penghambat RNase (RNasin): suatu glikoprotein asam yang diekstrak dari hati tikus atau blastodisk manusia, RNasin merupakan penghambat RNase non-kompetitif, yang dapat mengikat berbagai RNase, sehingga membuatnya tidak aktif.
• Lainnya: SDS, urea, tanah diatom, dll. juga memiliki efek penghambatan tertentu pada RNase.

2. Apa itu inhibitor RNase?

Inhibitor RNase merupakan golongan zat yang dapat menghambat aktivitas RNase. Inhibitor RNase yang umum meliputi Diethyl Pyrocarbonate (DEPC), Guanidine Isothiocyanate, Ribonucleoside Vanadyl Complexes (RVC), dan protein inhibitor RNase (RNasin). Di antara zat-zat tersebut, DEPC dan guanidine isothiocyanate memiliki toksisitas tertentu, dan RVC memiliki efek penghambatan pada PCR polimerase, yang tidak mendukung percobaan selanjutnya. RNasin tidak beracun dan merupakan inhibitor RNase non-kompetitif, yang dapat mengikat berbagai RNase untuk menonaktifkannya.

3. Apa fungsi RNase Inhibitor?

Inhibitor RNase umumnya digunakan sebagai tindakan pencegahan dalam manipulasi enzimatik RNA untuk menghambat dan mengendalikan kontaminan tersebut. RNasin adalah glikoprotein asam yang diekstrak dari hati tikus atau blastoderm manusia, yang secara spesifik dapat mengikat RNase secara non-kovalen untuk membentuk kompleks, yang menyebabkan inaktivasi RNase, sehingga melindungi integritas RNA. Saat ini, Inhibitor RNase membantu mencegah degradasi RNA dalam aplikasi seperti sintesis cDNA, RT-PCR, reaksi transkripsi/translasi in vitro, atau pemurnian RNA.

4. Apa saja fitur Inhibitor Murine RNase?

Inhibitor RNase murine rekombinan tidak mengandung 2 sistein peka oksidasi yang terkandung dalam inhibitor RNase asal manusia. Oleh karena itu, inhibitor RNase murine memiliki aktivitas anti-oksidasi yang tinggi dan lebih stabil untuk eksperimen DTT rendah. Selain itu, Inhibitor RNase Murine Yeasen memiliki fitur-fitur berikut:
1) Penghambatan RNase secara menyeluruh: Inhibitor RNase Murine Yeasen khususnya menghambat RNase A, RNase B, RNase C, dan seterusnya.
2) Kondisi reaksi serbaguna: Inhibitor RNase aktif pada pH 5,0-9,0 dan 25℃-55℃, yang cocok untuk transkriptase balik termostabil.
3) Beberapa percobaan hilir dimungkinkan: Tidak ada penghambatan aktivitas polimerase yang diamati ketika Inhibitor RNase digunakan dengan Taq DNA Polimerase, AMV atau M-MuLV Reverse Transcriptase, atau Phage RNA Polimerase (SP6, T7, atau T3).
4) Barang yang diproduksi secara massal: kapasitas manufaktur tunggal sebesar 2 miliar U membantu manajemen biaya dengan memastikan homogenitas produk, stabilitas pasokan, dan ketepatan waktu.
5) Konsistensi batch-ke-batch: platform ekspresi dan pemurnian protein matang oleh sistem manajemen mutu ISO13485, pengujian kontrol kualitas berdasarkan persyaratan mutu untuk memastikan stabilitas produk antar batch.

5. Produk terkait dan kinerja

A. Inhibitor RNase menghambat aktivitas RNase

1μg total RNA sel HEK, 1μL inhibitor RNase dapat secara efektif menghambat 5ng RNase.

Gambar 1. Efek penghambatan Inhibitor Murine RNase.

B. RNase Inhibitor melampaui produk asing dalam pengujian qPCR

Dampak penghambatan dari Yeasen dan inhibitor RNase turunan tikus (MRI) Perusahaan R* diukur menggunakan teknik qPCR dalam keadaan eksperimen yang identik, dan inhibitor RNase dari Yeasen Sumber murine secara efisien menghambat RNase A dalam sistem. Dampak penghambatannya lebih unggul dibandingkan pesaing.

Gambar 2. Uji penghambatan RNase MRI R*

Catatan: Kurva pada gambar dari kiri ke kanan adalah: Kontrol positif (hanya RNA, tanpa RNase dan MRI), MRI 40 U, ​​MRI 30 U, MRI 20 U, MRI 10 U, dan Kontrol negatif (RNA + RNase, tanpa MRI).

Gambar 3. Yeasen Uji penghambatan RNase MRI

Catatan: Kurva pada gambar dari kiri ke kanan adalah: Kontrol positif (hanya RNA, tanpa RNase dan MRI), MRI 80 U, MRI 60 U, MRI 40 U, ​​MRI 30 U, MRI 20 U, MRI 10 U, Kontrol negatif (RNA+RNase, tanpa MRI).

Gambar 4. Hasil CT RT-qPCR Yeasen MRI dan R* MRI

6. Produk terkait

Produk terkait yang Yeasen dapat menyediakan ditunjukkan pada Tabel 1:

Tabel 1.Daftar Produk

7. Pertanyaan yang Sering Diajukan

Q1: Apakah akan ada RNase dalam inhibitor RNase Murine?
A: Setiap reagen akan mendeteksi aktivitas RNase untuk memastikan bahwa inhibitor Murine RNase tidak membawa kontaminasi RNase.
Q2: Apakah inhibitor Murine RNase akan berdampak pada percobaan PCR hilir?
J: Tidak akan ada pengaruhnya. Setiap batch inhibitor Murine RNase bebas dari kontaminasi genomik setelah pengujian kualitas dan dapat digunakan dalam penelitian RT-PCR dan RT-qPCR.
Q3: Apakah inhibitor Murine RNase akan dinonaktifkan?
A: Inhibitor akan dinonaktifkan pada suhu di atas 65°C, dan pengadukan yang kuat juga akan menyebabkan inaktivasi.
Q4: Tindakan pencegahan apa yang harus diambil saat menggunakan inhibitor Murine RNase untuk menyiapkan sistem reaksi?
Jawaban: Saat menyiapkan sistem, inhibitor RNase dapat ditambahkan terlebih dahulu sebelum komponen lain yang dapat menimbulkan sumber kontaminasi RNase ditambahkan.
Q5: Apakah inhibitor Murine RNase memiliki aktivitas endonuklease dan eksonuklease?
Jawaban: Tidak ada aktivitas endonuklease dan eksonuklease, yang membantu meningkatkan hasil produk.

Mengenai membaca:

Inhibitor Murine RNase ——Berhasil menghilangkan kontaminasi RNase dan melestarikan RNA

Pemilihan Transkriptase Terbalik

Yeasen UDG yang tidak tahan panas——Mudah mengendalikan polusi aerosol

Bahan baku amplifikasi isotermal berkualitas tinggi - Membuat RT-LAMP lebih sensitif dan lebih cepat!